Solucions de preparació de mostres HPLC per obtenir millors resultats

Quatre passos per a la preparació de la mostra de HPLC

Pas 1. Anàlisi de solucions aquoses

Pas 2. Preparació dels estàndards

La preparació dels estàndards per a la identificació i la quantificació dels compostos pot ser un procés tediós i que requereix temps. Pesa un sòlid amb precisió de manera que es pugui utilitzar un volum predefinit de dissolvent és difícil i els residus a causa de l’error poden ser costosos, sobretot quan es treballa amb productes farmacèutics. Altres factors com la temperatura compliquen encara més la preparació estàndard. Les fluctuacions de la temperatura alteren la densitat de dissolvents i contribueixen a diferències dramàtiques en la concentració.



Utilitzar un saldo que permet una precisió de pesar fins a diversos llocs decimals i automatitzar el procés enllaçar el saldo amb un distribuïdor de dissolvents garanteix la màxima precisió. L'ús de programari com la dosificació de YAPP16 APP permet càlculs automàtics i un seguiment gravimètric dels valors mesurats. Documentar la temperatura i la densitat del dissolvent també garanteix concentracions altament precises, sobretot quan es preparen estàndards els dies posteriors. Transferència directa de dades de l’aplicació de pesatge YAPP16 al programari Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Sistema de dades de dades (CDS) és una opció per a la manipulació de dades sense paper amb integritat completa de dades.

Pas 3. Torneu als conceptes bàsics amb una bona canalització

La importància de la canalització precisa i precisa és massa sovint es passa per alt i es dóna per fet. El nivell i l’experiència d’habilitats d’usuari poden tenir implicacions importants en anàlisis sensibles com HPLC. L’elecció de la pipeta adequada pot reduir l’error humà i els costos associats dels dissolvents malgastats.



Les pipetes mecàniques amb un bloqueig de volum ofereixen una solució senzilla per prevenir canvis de volum accidentals, mentre que les pipetes electròniques més sofisticades eliminen la variabilitat dels usuaris per oferir volums precisos. La punta de la pipeta també és un detall important a considerar per a les anàlisis de HPLC. Els consells de retenció baixa són els millors quan es treballen amb dissolvents de diferents viscositats, ja que maximitzen la recuperació de mostres. La contaminació per mostres també es pot produir com a resultat de la lixiviació de la punta de la pipeta. Com a tal, consells amb una integritat de la mostra d’alta resistència química.

Pas 4. Filtre per a la precisió i la longevitat

Tenir cura addicional per filtrar les mostres abans de l’anàlisi millora la fiabilitat i pot allargar la vida de la columna HPLC evitant els efectes d’obstrucció. Els filtres de xeringa són una solució senzilla i ràpida per filtrar mostres abans de la cromatografia de la columna. Igual que amb les puntes de pipeta, els dissolvents utilitzats en HPLC necessiten filtres específics per evitar la lixiviació i la contaminació de mostres.

Les membranes de cel·lulosa són resistents al dimetil sulfoxid (DMSO), amides, cetones, èster i compostos d’èter. Per a dissolvents especialment durs, les membranes de polietersulfona (PTFO) no recobertes impedeixen la lixiviació i la contaminació de mostres. La filtració de mostres es fa molt temps quan augmenta el número de mostra. Les unitats de filtració multi-mostra, com el sistema de filtració CLARISTEP®, poden processar mostres sense xeringues i preparació de mostres de seguiment ràpid sense renunciar a la qualitat.

Cinc problemes que necessiteu per parar atenció a！

1. Quins són els problemes de preparació de mostres més grans que tenen els laboratoris?

Els laboratoris estan sota una pressió creixent en termes de temps i cost, sovint no només es tracta d’un nombre elevat de mostres, sinó també de mostres de diferents naturaleses. La preparació de mostres és una àrea on les diferències subtils entre els tipus de mostra o els mètodes de preparació de mostres i materials utilitzats poden afectar els resultats obtinguts. Garantir la compatibilitat entre els materials del dispositiu de filtració i el dissolvent pot minimitzar els problemes; Per exemple, els nivells de compostos extractables que poden interferir en la detecció dels analits.

2. Què passa quan la preparació de mostres va malament?

Abans de les aplicacions analítiques de la cromatografia líquida d’alt rendiment (HPLC), les mostres es preparen per diversos mètodes, tots ells que poden influir en els resultats analítics afectant la mostra injectada al sistema. La preparació de mostres ineficaç pot comportar una reducció de la vida de la columna, augment dels requisits de servei per a components, temps d’aturada potencial de la instrumentació, reducció de l’eficiència i la reproductibilitat de la separació cromatogràfica i molts altres problemes.

3. A primera vista, la filtració sembla un procés senzill ...

Tot i que la filtració és una part aparentment petita d’un gran flux de treball, l’impacte d’escollir el filtre adequat per a una aplicació determinada pot ser substancial. Per exemple, els mètodes que no eliminen les partícules suficients poden donar lloc a un bloqueig de columnes. L’elecció inadequada dels dispositius de preparació de mostres podria, en determinades circumstàncies, alliberar compostos extractables a la mostra, unir els analits d’interès o introduir errors mitjançant la pèrdua de mostra, tots influint en la qualitat i la reproductibilitat dels resultats observats. Si esteu segurs que els vostres consumibles de filtració no contribueixen a errors que requereixen investigacions de reelaboració o per causa d’arrel, estalviareu diners i us donareu tranquil·litat.

4. Quins són els "falla" de la preparació de mostres més habituals?

L’elecció incorrecta de la membrana del filtre és un dels problemes que veiem molt. Els problemes poden aparèixer com a pics estranys dels extractables, que poden interferir en la detecció dels analits d'interès. La incompatibilitat dels suports de filtre amb una mostra o dissolvent en termes de resistència química no es limita exclusivament als efectes de dissolució sobre els medis de filtre. Els dissolvents poden causar inflor lleu de materials de membrana polimèrica quan no siguin completament compatibles, cosa que al seu torn pot afectar el rendiment de filtració, donant lloc a una neteja ineficaç de mostres. Una forma d’abordar aquest problema és triar una membrana àmpliament compatible amb dissolvents aquosos i orgànics. Per a la preparació típica de mostres de HPLC, la xeringa i els filtres sense xeringues que contenen membranes de cel·lulosa regenerades són una bona opció per la seva àmplia compatibilitat de dissolvents.

L’ús d’un dispositiu de filtre més gran del necessari per a la preparació del volum és un altre problema comú. L’ús de dispositius de filtre massa grans significa que les petites quantitats de la mostra romandran al filtre, fins i tot després que es prenguin precaucions per expulsar el màxim possible.

5. Quins avantatges té ser seriosament el pas de filtració?

Un dels objectius fonamentals de la majoria de laboratoris que es dediquen a les proves analítiques és desenvolupar processos consistents que fonen els resultats consistents, i que requereixen un filtratge consistent. La selecció d’un dispositiu de filtració amb la mida del porus i les característiques de retenció dretes ajuda a garantir l’eliminació efectiva de partícules, mentre que l’elecció de la mida i el disseny adequades de la unitat de filtre poden ajudar a minimitzar la pèrdua de mostra. Una bona filtració també ajuda a protegir la columna i potencia la vida tant de l’injector com de la columna.

Conclusió

HPLC és una valuosa tècnica per a la ciència de la vida i la investigació biofarmacèutica, ja que proporciona resultats precisos i reproduïbles. Aquesta precisió depèn de la integritat de la mostra HPLC i de la millor manera d’assegurar mostres d’alta qualitat és començar amb les millors eines. Amb solucions per a aigua ultrapure, preparació estàndard, canonades, consells i filtres, la línia de preparació de mostres HPLC compta per a tots els detalls. Les solucions i programari automatitzats també ajuden a agilitzar la preparació de mostres per oferir mostres netes per obtenir resultats nets.

Es donen més debats sobre les solucions de preparació de mostres HPLC.