Řešení přípravy vzorku HPLC pro nejlepší výsledky

Čtyři kroky pro přípravu vzorku HPLC

Krok 1. Analýza vodných řešení

Krok 2. příprava standardů

Příprava standardů pro identifikaci a kvantifikaci sloučeniny může být únavný a časově náročný proces. Přesné vážení pevné látky tak, aby bylo možné použít předdefinovaný objem rozpouštědla, je obtížné a odpad způsobený chybou může být nákladný - zejména při práci s léčivami. Další faktory, jako je teplota, dále komplikují standardní přípravu. Kolísání teploty mění hustotu rozpouštědla a přispívá k dramatickým rozdílům v koncentraci.



Použití rovnováhy, která umožňuje přesnost vážení až na několik desetinných míst a automatizaci procesu propojením rovnováhy s výdejním rozpouštědlem zaručuje nejvyšší přesnost. Použití softwaru, jako je dávkování YAPP16, umožňuje automatické výpočty a gravimetrické monitorování naměřených hodnot. Dokumentace teploty a hustoty rozpouštědla také zajišťuje vysoce přesné koncentrace, zejména při přípravě standardů v následujících dnech. Přímý přenos dat z vážící aplikace YAPP16 na software Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) je možností pro zpracování dat bez papíru s plnou integritou dat.

Krok 3.. Vraťte se k základům s dobrým pipetem

Důležitost přesného a přesného pipety je příliš často přehlížena a považována za samozřejmost. Úroveň dovedností a zkušeností uživatelů mohou mít významné důsledky pro citlivé analýzy, jako je HPLC. Výběr správné pipety může snížit lidskou chybu a související náklady na zbytečné rozpouštědla.



Mechanické pipety s objemovým zámkem nabízejí jednoduché řešení pro prevenci náhodných změn objemu, zatímco sofistikovanější elektronické pipety eliminují variabilitu uživatele, aby důsledně poskytovaly přesné objemy. Tip pipety je také důležitým detailem, který je třeba zvážit pro HPLC analýzy. Tipy s nízkou retencí jsou nejlepší při práci s rozpouštědly různých viskozit, protože maximalizují zotavení vzorku. K kontaminaci vzorku může dojít také v důsledku vyluhování z špičky pipety. Proto, tipy s vysokou chemickou odolností zachovávají integritu vzorku.

Krok 4. filtr pro přesnost a dlouhověkost

Další péče o filtrování vzorků před analýzou zvyšuje spolehlivost a může prodloužit životnost sloupce HPLC tím, že zabrání ucpané účinky. Filtry stříkačky jsou jednoduchým a rychlým roztokem pro filtrování vzorků před sloupcovou chromatografií. Stejně jako u špiček pipety vyžadují rozpouštědla použitá v HPLC specifické filtry, aby se zabránilo vyluhování a kontaminaci vzorku.

Celulózové membrány jsou rezistentní na dimethylsulfoxid (DMSO), amidy, ketony, ester a etherové sloučeniny. Pro obzvláště drsná rozpouštědla zabraňují bezpojetí membrán polyethersulfonu (PTFO) vyluhování a kontaminaci vzorku. Filtrace vzorku se stává velmi časově náročnou, když se počet vzorků zvyšuje. Filtrační jednotky s více vzorky, jako je filtrační systém Claristep®, mohou zpracovat vzorky bez injekčních stříkaček a rychlé přípravy vzorku bez obětování kvality.

Pět problémů, které musíte věnovat pozornost！

1. Jaké jsou největší problémy s přípravou na vzorky, kterým čelí laboratoře?

Laboratoře jsou pod rostoucím tlakem z hlediska času a nákladů, často se zabývají nejen vysokým počtem vzorků, ale také vzorků různých povahy. Příprava vzorku je oblast, kde je možné výsledky získat jemné rozdíly mezi typy vzorků nebo metodami přípravy vzorku a použitými metodami přípravy vzorku. Zajištění kompatibility mezi materiály ve filtračním zařízení a rozpouštědlem může minimalizovat problémy; Například hladiny extrahovatelných sloučenin, které by mohly narušit detekci analytů.

2. Co se stane, když se ukázka přípravy pokazí?

Před analytickou vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií (HPLC) jsou vzorky připraveny různými metodami, z nichž všechny mají potenciál ovlivnit analytické výsledky ovlivněním vzoru do systému. Neefektivní příprava vzorku může vést ke snížení životnosti sloupce, zvýšenému servisnímu požadavkům na komponenty, potenciálním prostojům instrumentace, snížení účinnosti a reprodukovatelnosti chromatografické separace a mnoha dalším problémům.

3. na první pohled se filtrace jeví jako jednoduchý proces ...

Ačkoli filtrace je zdánlivě malou součástí velkého pracovního postupu, dopad výběru správného filtru pro danou aplikaci může být podstatný. Například metody, které neodstraňují dostatečné částice, mohou vést k blokování sloupců. Nepříznivý výběr zařízení přípravy vzorku by za určitých okolností mohl uvolnit extrahovatelné sloučeniny do vzorku, vázat analyty zájmu nebo zavést chyby prostřednictvím ztráty vzorku - vše ovlivňující kvalitu a reprodukovatelnost pozorovaných výsledků. Pokud jste si jisti, že vaše filtrační spotřební materiál nepřispívá k chybám, které vyžadují přepracování nebo vyšetřování kořenových příčin, ušetříte peníze a poskytnete si klid.

4. Jaké jsou nejběžnější vzorkové přípravy „selhávají“?

Nesprávná volba membrány filtru je jedním z problémů, který vidíme hodně. Problémy se mohou objevit jako cizí píky z extrahovatelných, které mohou narušit detekci analytů, které jsou zajímavé. Nekompatibilita filtračního média se vzorkem nebo rozpouštědlem z hlediska chemické odolnosti není omezena pouze na účinky rozpouštění na filtrační médium. Rozpouštědla mohou způsobit mírný otok polymerních membránových materiálů, pokud nejsou plně kompatibilní, což může zase ovlivnit filtrační výkon, což vede k neúčinnému čištění vzorků. Jedním ze způsobů, jak tento problém vyřešit, je výběr membrány, která je široce kompatibilní s vodnými i organickými rozpouštědly. Pro typickou přípravu vzorku HPLC jsou stříkačkou a stříkačské filtry obsahující regenerované celulózové membrány dobrou volbou kvůli jejich široké kompatibilitě rozpouštědla.

Dalším běžným úskalím je použití filtračního zařízení, které je větší, než je potřeba pro přípravu objemu. Použití příliš velkých filtračních zařízení znamená, že ve filtru zůstane malá množství vzorku, a to i poté, co budou přijata opatření k co nejvíce vyloučení.

5. Jaké jsou výhody vážně považovat filtrační krok?

Základním cílem většiny laboratoří zapojených do analytického testování je vyvinout konzistentní procesy, které podporují konzistentní výsledky - a které vyžadují konzistentní filtrování. Výběr filtračního zařízení s pravou velikostí pórů a charakteristikami zadržování pomáhá zajistit efektivní odstranění částic, zatímco výběr vhodné velikosti a návrh filtrační jednotky může pomoci minimalizovat ztrátu vzorku. Dobrá filtrace také pomáhá chránit sloupec a potenciálně prodlouží životnost jak vstřikovacího, tak sloupce.

Závěr

HPLC je cenná technika pro vědu o životě a biofarmaceutický výzkum, protože přináší přesné, reprodukovatelné výsledky. Tato přesnost závisí na integritě vzorku HPLC a nejlepším způsobem, jak zajistit vysoce kvalitní vzorky, je začít s nejlepšími nástroji. S roztoky pro ultrapurickou vodu, standardní přípravu, pipety, tipy a filtry odpovídá přípravě vzorku HPLC pro každý detail. Automatizovaná řešení a software také pomáhají zefektivnit přípravu vzorků a poskytovat čisté vzorky pro čisté výsledky.

Více diskusí o řešení přípravy vzorků HPLC je vítáno!