HPLC -prøveforberedelsesløsninger til de bedste resultater

Fire trin til HPLC -prøveforberedelse

Trin 1. Analyse af vandige løsninger

Trin 2. Forberedelse af standarder

Forberedelse af standarder til sammensat identifikation og kvantificering kan være en kedelig og tidskrævende proces. Det er vanskeligt at veje et solidt, så et foruddefineret volumen af ​​opløsningsmiddel kan bruges, og affald på grund af fejl kan være dyrt - især når man arbejder med lægemidler. Andre faktorer såsom temperatur komplicerer yderligere standardforberedelse. Temperatursvingninger ændrer opløsningsmiddeltætheden og bidrager til dramatiske forskelle i koncentration.



Brug af en balance, der muliggør en vejningsnøjagtighed op til flere decimaler og automatisering af processen ved at knytte balancen til et opløsningsmiddeldispenser, garanterer den højeste præcision. Brug af software som YAPP16 Dosering Q-App muliggør automatiske beregninger og gravimetrisk overvågning af målte værdier. Dokumentation af opløsningsmidlets temperatur og densitet sikrer også meget nøjagtige koncentrationer, især når man forbereder standarder på efterfølgende dage. Direkte dataoverførsel fra YAPP16, der vejer applikation til Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) software er en mulighed for papirløs datahåndtering med fuld dataintegritet.

Trin 3. Kom tilbage til det grundlæggende med god pipetting

Betydningen af ​​nøjagtig og præcis pipettering overses for ofte og tages for givet. Brugerfærdighedsniveau og oplevelse kan have betydelige konsekvenser for følsomme analyser som HPLC. Valg af den rigtige pipette kan reducere menneskelig fejl og de tilknyttede omkostninger ved spildte opløsningsmidler.



Mekaniske pipetter med en volumenlås tilbyder en simpel løsning til at forhindre utilsigtede volumenændringer, mens mere sofistikerede elektroniske pipetter eliminerer brugervariabiliteten til konsekvent at levere præcise mængder. Pipettspidsen er også en vigtig detalje at overveje til HPLC -analyser. Tips til lav opbevaring er bedst, når man arbejder med opløsningsmidler af forskellige viskositeter, da de maksimerer prøveudvindingen. Prøveforurening kan også forekomme som et resultat af udvaskning fra pipettspidsen. Som sådan bevarer tip med høj kemisk resistens integritet.

Trin 4. Filter for nøjagtighed og levetid

At tage yderligere omhu for at filtrere prøver inden analyse forbedrer pålideligheden og kan forlænge levetiden for HPLC -kolonnen ved at forhindre tilstopningseffekter. Sprøjtefiltre er en enkel, hurtig opløsning til filtrering af prøver før søjlekromatografi. Som med pipett -tip, nødvendiggør de anvendte opløsningsmidler i HPLC specifikke filtre for at forhindre udvaskning og prøveforurening.

Cellulosemembraner er resistente over for dimethylsulfoxid (DMSO), amider, ketoner, ester og etherforbindelser. For især barske opløsningsmidler forhindrer ikke -overtrukne polyethersulfone (PTFO) membraner udvaskning og prøveforurening. Prøvefiltrering bliver meget tidskrævende, når prøvenummeret øges. Multi-prøve filtreringsenheder, såsom Claristep®-filtreringssystemet, kan behandle prøver uden sprøjter og hurtigsporprøveforberedelse uden at ofre kvalitet.

Fem problemer, du skal være opmærksom på！

1. Hvad er de største prøvepræsidentproblemer, som laboratorier står overfor?

Laboratorier er under stigende pres med hensyn til tid og omkostninger, der ofte ikke kun beskæftiger sig med et stort antal prøver, men også prøver af forskellige naturer. Prøveforberedelse er et område, hvor subtile forskelle mellem prøvetyper eller de anvendte prøveforberedelsesmetoder og materialer kan påvirke de opnåede resultater. At sikre kompatibilitet mellem materialerne i filtreringsenheden og opløsningsmidlet kan minimere problemer; For eksempel niveauerne af ekstraherbare forbindelser, der kan forstyrre analytdetektion.

2. Hvad sker der, når prøveforberedelsen går galt?

Før analytiske højprestansi-væskekromatografi (HPLC) applikationer fremstilles prøver ved en række forskellige metoder, som alle har potentialet til at påvirke analytiske resultater ved at påvirke prøven injiceret i systemet. Forberedelse af ineffektiv prøve kan føre til en reduktion i søjlens levetid, øgede servicekrav til komponenter, potentiel nedetid for instrumentering, reduktion i kromatografisk adskillelseseffektivitet og reproducerbarhed og mange andre problemer.

3. Ved første øjekast virker filtrering som en simpel proces ...

Selvom filtrering er en tilsyneladende lille del af en stor arbejdsgang, kan virkningen af ​​at vælge det rigtige filter til en given anvendelse være betydelig. F.eks. Kan metoder, der ikke fjerner tilstrækkelige partikler, resultere i kolonneblokering. Uhensigtsmæssigt valg af prøveforberedelsesenheder kunne under visse omstændigheder frigive ekstraherbare forbindelser i prøven, binde analytter af interesse eller indføre fejl gennem prøvetab - alt sammen påvirker kvaliteten og reproducerbarheden af ​​de observerede resultater. Hvis du er overbevist om, at dine forbrugsstoffer til filtrering ikke bidrager til fejl, der kræver omarbejdning eller rodårsagsundersøgelser, vil du spare penge og give dig selv ro i sindet.

4. Hvad er den mest almindelige prøveforberedelse 'mislykkes'?

Forkert filtermembranvalg er et problem, vi ser meget. Problemer kan forekomme som udvendige toppe fra ekstraherbare ting, hvilket kan forstyrre påvisningen af ​​analytterne af interesse. Inkompatibiliteten af ​​filtermedier med en prøve eller opløsningsmiddel med hensyn til kemisk resistens er ikke kun begrænset til opløsningseffekter på filtermediet. Opløsningsmidler kan forårsage let hævelse af polymere membranmaterialer, når de ikke er fuldt kompatible, hvilket igen kan påvirke filtreringsydelsen, hvilket fører til ineffektiv oprydning af prøver. En måde at løse dette problem på er ved at vælge en membran, der er bredt kompatibel med både vandige og organiske opløsningsmidler. Til typisk HPLC -prøveforberedelse er sprøjte og spredningsløse filtre, der indeholder regenererede cellulosemembraner, en god mulighed på grund af deres brede opløsningsmiddelkompatibilitet.

Brug af en filterenhed, der er større end nødvendig for, at volumen er forberedt, er en anden almindelig faldgrube. Brugen af ​​for store filterenheder betyder, at små mængder af prøven forbliver i filteret, selv efter at der er taget forholdsregler til at udvise så meget som muligt.

5. Hvad er fordelene ved at tage filtreringstrinnet alvorligt?

Et grundlæggende mål for de fleste laboratorier, der beskæftiger sig med analytisk test, er at udvikle ensartede processer, der understøtter ensartede resultater - og som kræver ensartet filtrering. Valget af en filtreringsenhed med den rigtige porestørrelse og fastholdelsesegenskaber hjælper med at sikre effektiv fjernelse af partikler, mens valget af passende størrelse og design af filterenhed kan hjælpe med at minimere prøvetab. God filtrering hjælper også med at beskytte kolonnen og udvider potentielt levetiden for både injektoren og kolonnen.

Konklusion

HPLC er en værdifuld teknik for livsvidenskab og biofarmaceutisk forskning, da den leverer nøjagtige, reproducerbare resultater. Denne nøjagtighed afhænger af integriteten af ​​HPLC-prøven, og den bedste måde at sikre prøver af høj kvalitet er at starte med de bedste værktøjer. Med opløsninger til ultrapure -vand, standardforberedelse, pipetter, tip og filtre tegner HPLC -prøveforberedelseslinjen for hver detalje. Automatiske løsninger og software hjælper også med at strømline prøveforberedelse til at levere rene prøver til rene resultater.

Flere diskussioner om HPLC -prøveforberedelsesløsninger er velkomne!