Λύσεις προετοιμασίας δείγματος HPLC για καλύτερα αποτελέσματα

Τέσσερα βήματα για την προετοιμασία δείγματος HPLC

Βήμα 1. Ανάλυση υδατικών λύσεων

Βήμα 2. Προετοιμασία προτύπων

Η προετοιμασία των προτύπων για την ταυτοποίηση και την ποσοτικοποίηση των σύνθετων μπορεί να είναι μια κουραστική και χρονοβόρα διαδικασία. Η ακρίβεια ζυγίζει ένα στερεό έτσι ώστε να μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένας προκαθορισμένος όγκος διαλύτη είναι δύσκολη και τα απόβλητα λόγω σφάλματος μπορεί να είναι δαπανηρά - ειδικά όταν εργάζεστε με φαρμακευτικά προϊόντα. Άλλοι παράγοντες όπως η θερμοκρασία περιπλέκουν περαιτέρω την τυπική προετοιμασία. Οι διακυμάνσεις της θερμοκρασίας μεταβάλλουν την πυκνότητα του διαλύτη και συμβάλλουν στις δραματικές διαφορές στη συγκέντρωση.



Χρησιμοποιώντας μια ισορροπία που επιτρέπει μια ακρίβεια ζύγισης έως και αρκετούς δεκαδικούς χώρους και αυτοματοποίηση της διαδικασίας συνδέοντας την ισορροπία με έναν διανομέα διαλύτη εγγυάται την υψηλότερη ακρίβεια. Η χρήση λογισμικού, όπως η δοσολογία YAPP16, το Q-APP επιτρέπει τους αυτόματους υπολογισμούς και τη βαρυμετρική παρακολούθηση των μετρημένων τιμών. Η τεκμηρίωση της θερμοκρασίας και της πυκνότητας του διαλύτη εξασφαλίζει επίσης εξαιρετικά ακριβείς συγκεντρώσεις, ειδικά κατά την προετοιμασία των προτύπων στις επόμενες ημέρες. Η άμεση μεταφορά δεδομένων από την εφαρμογή ζύγισης YAPP16 στο Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Λογισμικό Σύστημα Χρωματογραφίας (CDS) είναι μια επιλογή για τη διαχείριση δεδομένων χωρίς χαρτί με πλήρη ακεραιότητα δεδομένων.

Βήμα 3. Επιστρέψτε στα βασικά με καλή πιπέτα

Η σημασία της ακριβούς και ακριβούς πιπέττωσης είναι πολύ συχνά παραβλέπεται και θεωρείται δεδομένη. Το επίπεδο δεξιοτήτων και η εμπειρία του χρήστη μπορούν να έχουν σημαντικές επιπτώσεις σε ευαίσθητες αναλύσεις όπως το HPLC. Η επιλογή της σωστής πιπέτας μπορεί να μειώσει το ανθρώπινο σφάλμα και το σχετικό κόστος σπατάλης διαλύτες.



Οι μηχανικές πιπέτες με κλείδωμα όγκου προσφέρουν μια απλή λύση για την πρόληψη τυχαίων αλλαγών όγκου, ενώ πιο εξελιγμένες ηλεκτρονικές πιπέτες εξαλείφουν τη μεταβλητότητα των χρηστών για να παρέχουν σταθερά ακριβείς όγκους. Η άκρη της πιπέτας είναι επίσης μια σημαντική λεπτομέρεια που πρέπει να ληφθεί υπόψη για τις αναλύσεις HPLC. Οι χαμηλές συμβουλές συγκράτησης είναι καλύτερες όταν εργάζονται με διαλύτες διαφορετικών ιξώδους, καθώς μεγιστοποιούν την ανάκτηση του δείγματος. Η μόλυνση του δείγματος μπορεί επίσης να εμφανιστεί ως αποτέλεσμα της έκπλυσης από την άκρη της πιπέτας. Ως εκ τούτου, συμβουλές με υψηλή χημική αντίσταση διατηρούν την ακεραιότητα του δείγματος.

Βήμα 4. Φίλτρο για ακρίβεια και μακροζωία

Η πρόσθετη φροντίδα για τη διήθηση των δειγμάτων πριν από την ανάλυση βελτιώνει την αξιοπιστία και μπορεί να παρατείνει τη διάρκεια ζωής της στήλης HPLC, εμποδίζοντας τα αποτελέσματα της απόφραξης. Τα φίλτρα σύριγγας είναι μια απλή, ταχεία λύση για το φιλτράρισμα των δειγμάτων πριν από τη χρωματογραφία στήλης. Όπως και με τις συμβουλές της πιπέτας, οι διαλύτες που χρησιμοποιούνται στην HPLC απαιτούν συγκεκριμένα φίλτρα για την πρόληψη της έκπλυσης και της μόλυνσης του δείγματος.

Οι μεμβράνες κυτταρίνης είναι ανθεκτικές στο διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO), τις αμιδικές, τις κετόνες, τον εστέρα και τις ενώσεις αιθέρα. Για ιδιαίτερα σκληρούς διαλύτες, οι μη επικαλυμμένες μεμβράνες πολυαιθυλεφόνης (PTFO) εμποδίζουν την έκπλυση και τη μόλυνση του δείγματος. Η διήθηση του δείγματος γίνεται πολύ χρονοβόρα όταν αυξάνεται ο αριθμός δείγματος. Οι μονάδες διήθησης πολλαπλών δειγμάτων, όπως το σύστημα φιλτραρίσματος Claristep®, μπορούν να επεξεργαστούν δείγματα χωρίς σύριγγες και την προετοιμασία του δείγματος ταχείας διαστολής χωρίς να θυσιάζουν την ποιότητα.

Πέντε προβλήματα που χρειάζεστε για να δώσετε προσοχή στο！

1. Ποια είναι τα μεγαλύτερα προβλήματα προετοιμασίας δείγματος που αντιμετωπίζουν τα εργαστήρια;

Τα εργαστήρια βρίσκονται υπό αυξανόμενη πίεση όσον αφορά το χρόνο και το κόστος, συχνά ασχολούνται όχι μόνο με υψηλό αριθμό δειγμάτων αλλά και δείγματα ποικίλων φύσεων. Η προετοιμασία του δείγματος είναι μια περιοχή όπου οι λεπτές διαφορές μεταξύ των τύπων δειγμάτων ή των μεθόδων παρασκευής δείγματος και των χρησιμοποιούμενων υλικών μπορεί να επηρεάσουν τα αποτελέσματα που λαμβάνονται. Η διασφάλιση της συμβατότητας μεταξύ των υλικών στη συσκευή φιλτραρίσματος και του διαλύτη μπορεί να ελαχιστοποιήσει τα ζητήματα. Για παράδειγμα, τα επίπεδα εξαγωγικών ενώσεων που ενδέχεται να παρεμβαίνουν στην ανίχνευση αναλύτη.

2. Τι συμβαίνει όταν η προετοιμασία του δείγματος πάει στραβά;

Πριν από τις αναλυτικές εφαρμογές υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC), τα δείγματα παρασκευάζονται με ποικίλες μεθόδους, οι οποίες έχουν τη δυνατότητα να επηρεάσουν τα αναλυτικά αποτελέσματα επηρεάζοντας το δείγμα που εγχέεται στο σύστημα. Η αναποτελεσματική προετοιμασία του δείγματος μπορεί να οδηγήσει σε μείωση της διάρκειας ζωής της στήλης, αυξημένες απαιτήσεις υπηρεσίας για τα εξαρτήματα, πιθανό χρόνο διακοπής των οργάνων, μείωση της αποτελεσματικότητας και αναπαραγωγικότητας του χρωματογραφικού διαχωρισμού και πολλά άλλα προβλήματα.

3. Με την πρώτη ματιά, η διήθηση φαίνεται σαν μια απλή διαδικασία ...

Αν και η διήθηση είναι ένα φαινομενικά μικρό μέρος μιας μεγάλης ροής εργασίας, ο αντίκτυπος της επιλογής του σωστού φίλτρου για μια δεδομένη εφαρμογή μπορεί να είναι σημαντική. Για παράδειγμα, οι μέθοδοι που δεν απομακρύνουν επαρκή σωματίδια μπορούν να οδηγήσουν σε αποκλεισμό στηλών. Η ακατάλληλη επιλογή των συσκευών παρασκευής του δείγματος θα μπορούσε, υπό ορισμένες συνθήκες, να απελευθερώσει εξαχόμενες ενώσεις στο δείγμα, να δεσμεύσει τους αναλυτές ενδιαφέροντος ή να εισαγάγει σφάλματα μέσω της απώλειας δείγματος - που επηρεάζουν την ποιότητα και την αναπαραγωγιμότητα των παρατηρούμενων αποτελεσμάτων. Εάν είστε σίγουροι ότι τα αναλώσιμα διήθησης δεν συμβάλλουν σε σφάλματα που απαιτούν επανεξέταση ή έρευνες για τις ριζικές αιτίες, θα εξοικονομήσετε χρήματα και θα δώσετε στον εαυτό σας την ειρήνη του μυαλού.

4. Ποιο είναι το πιο κοινό δείγμα prep 'αποτυγχάνει';

Η λανθασμένη επιλογή μεμβράνης φίλτρου είναι ένα πρόβλημα που βλέπουμε πολλά. Τα ζητήματα μπορούν να εμφανιστούν ως εξωτερικές κορυφές από εκχυλίσματα, τα οποία μπορούν να παρεμβαίνουν στην ανίχνευση των αναλυτών που ενδιαφέρουν. Η ασυμβατότητα των μέσων φίλτρου με δείγμα ή διαλύτη όσον αφορά τη χημική αντίσταση δεν περιορίζεται αποκλειστικά στις επιδράσεις διάλυσης στα μέσα φίλτρου. Οι διαλύτες μπορούν να προκαλέσουν ελαφρά διόγκωση υλικών πολυμερούς μεμβράνης όταν δεν είναι πλήρως συμβατά, τα οποία με τη σειρά τους μπορούν να επηρεάσουν την απόδοση διήθησης, οδηγώντας σε αναποτελεσματικό καθαρισμό δειγμάτων. Ένας τρόπος αντιμετώπισης αυτού του ζητήματος είναι η επιλογή μιας μεμβράνης που είναι ευρέως συμβατή τόσο με υδατικούς όσο και με οργανικούς διαλύτες. Για την τυπική παρασκευή δείγματος HPLC, τα φίλτρα σύριγγας και σύριγγας που περιέχουν αναγεννημένες μεμβράνες κυτταρίνης είναι μια καλή επιλογή λόγω της συμβατότητας ευρείας διαλύτη τους.

Η χρήση μιας συσκευής φίλτρου που είναι μεγαλύτερη από ό, τι χρειάζεται για την προετοιμασία του όγκου είναι μια άλλη κοινή παγίδα. Η χρήση υπερβολικά μεγάλων συσκευών φίλτρου σημαίνει ότι μικρές ποσότητες του δείγματος θα παραμείνουν στο φίλτρο, ακόμη και μετά την εκτέλεση των προφυλάξεων για να εκδιωχθούν όσο το δυνατόν περισσότερο.

5. Ποια είναι τα πλεονεκτήματα της μετάδοσης του βήματος διήθησης;

Ένας θεμελιώδης στόχος των περισσότερων εργαστηρίων που ασχολούνται με αναλυτικές δοκιμές είναι η ανάπτυξη συνεπών διαδικασιών που υποστηρίζουν τα συνεπή αποτελέσματα - και που απαιτούν σταθερό φιλτράρισμα. Η επιλογή μιας συσκευής φιλτραρίσματος με τα δεξιά χαρακτηριστικά μεγέθους πόρων και διατήρησης βοηθά στην εξασφάλιση αποτελεσματικής απομάκρυνσης σωματιδίων, ενώ η επιλογή του κατάλληλου μεγέθους και του σχεδιασμού της μονάδας φίλτρου μπορεί να βοηθήσει στην ελαχιστοποίηση της απώλειας δείγματος. Η καλή διήθηση βοηθά επίσης στην προστασία της στήλης και ενδεχομένως επεκτείνει τη διάρκεια ζωής τόσο του εγχυτήρα όσο και της στήλης.

Σύναψη

Το HPLC είναι μια πολύτιμη τεχνική για την επιστήμη της ζωής και την βιοφαρμακευτική έρευνα, καθώς προσφέρει ακριβή, αναπαραγώγιμα αποτελέσματα. Αυτή η ακρίβεια εξαρτάται από την ακεραιότητα του δείγματος HPLC και ο καλύτερος τρόπος για να εξασφαλιστεί τα δείγματα υψηλής ποιότητας είναι να ξεκινήσετε με τα καλύτερα εργαλεία. Με λύσεις για εξαιρετικά νερό, τυπική προετοιμασία, πιπέτες, συμβουλές και φίλτρα, η γραμμή προετοιμασίας δείγματος HPLC αντιπροσωπεύει κάθε λεπτομέρεια. Οι αυτοματοποιημένες λύσεις και το λογισμικό βοηθούν επίσης στον εξορθολογισμό της προετοιμασίας του δείγματος για την παροχή καθαρών δειγμάτων για καθαρά αποτελέσματα.

Περισσότερες συζητήσεις σχετικά με τις λύσεις παρασκευής δείγματος HPLC είναι ευπρόσδεκτες!