1. انسداد ستون HPLC خود
2. حساسیت بالاتر ستون HPLC شما
3. دقت بالاتر
4. کمتر قله های کاذب مثبت
5. سر و صدای پس زمینه کمتر
6. بدون شستشو
چهار مرحله برای تهیه نمونه HPLC
بگذارید ما را متقاعد کنیم که چگونه می توانید با راه حل های ما وقت خود را صرفه جویی کنید و در عین حال تکرارپذیری نتایج خود را افزایش دهید:
مرحله 1. تجزیه و تحلیل راه حل های آبی
کیفیت پایین آب یکی از بزرگترین عوامل مؤثر در مشکلات در هنگام اجرای HPLC است. ناخالصی های آب در فاز متحرک می تواند با ستون در تعامل باشد و منجر به وضوح و حساسیت ضعیف یا قله های غیر منتظره در کروماتوگرام شود ، که معمولاً به عنوان قله های شبح گفته می شود. با استفاده از آب اولتراپور ، خطر آلودگی با کربن های آلی ، میکروارگانیسم ها ، اندوتوکسین ها ، RNases و DNAS را کاهش می دهد. آب Ultrapure برای خرید در دسترس است ، با این حال ، استفاده از سیستم تصفیه آب در آزمایشگاه شما ساده ترین راه برای اطمینان از آب فوق العاده با کیفیت بالا است. نوع 1 آب درجه یک که مطابق با استانداردهای ASTM ، NCCLS ، ISO و USP است بهترین انتخاب برای برنامه های HPLC است.
مرحله 2. تهیه استانداردها
تهیه استانداردها برای شناسایی و اندازه گیری ترکیبی می تواند یک فرآیند خسته کننده و وقت گیر باشد. با دقت وزن یک جامد به طوری که از یک حجم از پیش تعریف شده از حلال استفاده می شود دشوار است و زباله به دلیل خطا می تواند پرهزینه باشد - به ویژه هنگام کار با داروهای دارویی. عوامل دیگر مانند دما بیشتر آماده سازی استاندارد را پیچیده می کند. نوسانات دما چگالی حلال را تغییر داده و به تفاوت های چشمگیر در غلظت کمک می کند.
استفاده از تعادل که باعث می شود دقت وزنه برداری تا چندین مکان اعشاری و خودکار کردن فرآیند با پیوند دادن تعادل به یک توزیع کننده حلال ، بالاترین دقت را تضمین کند. استفاده از نرم افزاری مانند دوز yapp16 Q-APP محاسبات خودکار و نظارت گرانشی مقادیر اندازه گیری شده را امکان پذیر می کند. مستند سازی دما و تراکم حلال نیز غلظت های بسیار دقیقی را تضمین می کند ، به خصوص هنگام تهیه استانداردها در روزهای بعدی. انتقال مستقیم داده ها از برنامه توزین YAPP16 به نرم افزار Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 سیستم داده کروماتوگرافی (CDS) گزینه ای برای کار با داده های بدون کاغذ با یکپارچگی داده کامل است.
مرحله 3. با پیپت خوب به اصول اولیه برگردید
اهمیت پیپتینگ دقیق و دقیق بیش از حد غافل می شود و از آن استفاده می شود. سطح و تجربه مهارت کاربر می تواند پیامدهای قابل توجهی برای تجزیه و تحلیل های حساس مانند HPLC داشته باشد. انتخاب پیپت مناسب می تواند خطای انسانی و هزینه های مرتبط با حلال های هدر رفته را کاهش دهد.
پیپت های مکانیکی با قفل حجم یک راه حل ساده برای جلوگیری از تغییر حجم تصادفی ارائه می دهند ، در حالی که پیپت های الکترونیکی پیشرفته تر تنوع کاربر را برای ارائه مداوم حجم دقیق از بین می برند. نوک پیپت همچنین جزئیات مهمی است که برای تجزیه و تحلیل HPLC در نظر گرفته شده است. نکات مربوط به احتباس کم هنگام کار با حلال های ویسکوزیته های مختلف بهترین است ، زیرا آنها بهبود نمونه را به حداکثر می رسانند. آلودگی نمونه نیز می تواند در نتیجه شستشوی نوک پیپت رخ دهد. به همین ترتیب ، نکاتی با مقاومت در برابر شیمیایی بالا یکپارچگی نمونه را حفظ می کند.
مرحله 4. فیلتر برای صحت و طول عمر
مراقبت بیشتر برای فیلتر کردن نمونه ها قبل از تجزیه و تحلیل ، قابلیت اطمینان را بهبود می بخشد و می تواند با جلوگیری از اثرات گرفتگی ، عمر ستون HPLC را طولانی تر کند. فیلترهای سرنگ یک راه حل ساده و سریع برای فیلتر کردن نمونه ها قبل از کروماتوگرافی ستون است. مانند نکات پیپت ، حلال های مورد استفاده در HPLC برای جلوگیری از شستشوی و آلودگی نمونه ، فیلترهای خاص را ضروری می کنند.
غشای سلولز در برابر دی متیل سولفوکسید (DMSO) ، آمیدها ، کتون ها ، استر و اتر مقاوم هستند. برای حلال های مخصوصاً سخت ، غشاهای پلی اترسولفون بدون پوشش (PTFO) از شستشوی و آلودگی نمونه جلوگیری می کنند. با افزایش تعداد نمونه ، تصفیه نمونه بسیار وقت گیر می شود. واحدهای تصفیه چند نمونه ای ، مانند سیستم تصفیه Claristep® ، می توانند نمونه ها را بدون سرنگ و آماده سازی نمونه سریع بدون قربانی کردن کیفیت پردازش کنند.
پنج مشکل شما باید به آن توجه کنید
1. بزرگترین مشکلات آمادگی نمونه با آزمایشگاه ها چیست؟
آزمایشگاه ها از نظر زمان و هزینه تحت فشار فزاینده ای قرار دارند و اغلب نه تنها با تعداد زیادی نمونه بلکه نمونه هایی از طبیعت های مختلف نیز سروکار دارند. آماده سازی نمونه منطقه ای است که تفاوت های ظریف بین انواع نمونه یا روش های آماده سازی نمونه و مواد مورد استفاده می تواند بر نتایج به دست آمده تأثیر بگذارد. اطمینان از سازگاری بین مواد موجود در دستگاه تصفیه و حلال می تواند مسائل را به حداقل برساند. به عنوان مثال ، سطح ترکیبات قابل استخراج که ممکن است در تشخیص آنالیت تداخل داشته باشند.
2. چه اتفاقی می افتد که نمونه آماده سازی نمونه اشتباه شود؟
قبل از برنامه های کاربردی کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) ، نمونه ها با روش های مختلفی تهیه می شوند که همه آنها با تأثیرگذاری بر نمونه تزریق شده به سیستم ، می توانند بر نتایج تحلیلی تأثیر بگذارند. آماده سازی نمونه ناکارآمد می تواند منجر به کاهش عمر ستون ، افزایش نیازهای خدمات برای مؤلفه ها ، خرابی احتمالی ابزار دقیق ، کاهش کارایی جداسازی کروماتوگرافی و تکرارپذیری و بسیاری از مشکلات دیگر شود.
3. در نگاه اول ، تصفیه به نظر می رسد یک فرآیند ساده ...
اگرچه تصفیه یک بخش به ظاهر کوچک از یک گردش کار بزرگ است ، اما تأثیر انتخاب فیلتر مناسب برای یک برنامه خاص می تواند قابل توجه باشد. به عنوان مثال ، روشهایی که ذرات کافی را از بین نمی برند می توانند منجر به مسدود شدن ستون شوند. انتخاب نامناسب دستگاه های آماده سازی نمونه می تواند ، تحت شرایط خاص ، ترکیبات قابل استخراج را در نمونه آزاد کند ، آنالیت های مورد علاقه را به هم متصل کند یا خطاها را از طریق از دست دادن نمونه معرفی کند - همه تأثیرگذاری بر کیفیت و تکرارپذیری نتایج مشاهده شده. اگر اطمینان دارید که مواد مصرفی فیلتراسیون شما به خطاهایی که نیاز به کار مجدد یا تحقیقات ریشه ای دارند ، کمک نمی کنند ، پس انداز می کنید و به خود آرامش می دهید.
4. رایج ترین نمونه آماده سازی "شکست" چیست؟
انتخاب غشای فیلتر نادرست ، مشکلی است که ما زیاد می بینیم. مسائل می تواند به عنوان قله های بیرونی از استخراج ها ظاهر شود ، که می تواند در تشخیص آنالیت های مورد علاقه دخالت کند. ناسازگاری محیط فیلتر با یک نمونه یا حلال از نظر مقاومت شیمیایی فقط به اثرات انحلال بر روی محیط فیلتر محدود نمی شود. حلال ها می توانند در صورت عدم سازگاری کاملاً تورم مواد غشای پلیمری ایجاد کنند ، که به نوبه خود می تواند بر عملکرد فیلتراسیون تأثیر بگذارد و منجر به پاکسازی ناکارآمد نمونه ها شود. یکی از راه های پرداختن به این مسئله ، انتخاب غشایی است که به طور گسترده با حلال های آبی و ارگانیک سازگار است. برای تهیه نمونه HPLC معمولی ، سرنگ و فیلترهای بدون سرنشین حاوی غشای سلولز بازسازی شده به دلیل سازگاری حلال گسترده آنها گزینه خوبی هستند.
استفاده از دستگاه فیلتر که بزرگتر از حد لازم برای تهیه حجم است ، یکی دیگر از مشکلات رایج است. استفاده از دستگاه های فیلتر خیلی بزرگ بدان معنی است که مقادیر کمی از نمونه در فیلتر باقی می مانند ، حتی پس از انجام اقدامات احتیاطی تا حد ممکن.
5. مزایای جدی گرفتن مرحله فیلتراسیون چیست؟
هدف اساسی اکثر آزمایشگاههای درگیر در آزمایش تحلیلی ، توسعه فرآیندهای سازگار است که پایه و اساس نتایج مداوم را نشان می دهد - و این امر نیاز به فیلتر مداوم دارد. انتخاب یک دستگاه تصفیه با اندازه منافذ مناسب و ویژگی های احتباس به اطمینان از حذف مؤثر ذرات کمک می کند ، در حالی که انتخاب اندازه مناسب و طراحی واحد فیلتر می تواند به حداقل رساندن از دست دادن نمونه کمک کند. تصفیه خوب همچنین به محافظت از ستون کمک می کند و به طور بالقوه طول عمر هر دو انژکتور و ستون را گسترش می دهد.
پایان
HPLC یک تکنیک ارزشمند برای علم زندگی و تحقیقات بیو دارویی است زیرا نتایج دقیق و قابل تکرار را ارائه می دهد. این دقت به یکپارچگی نمونه HPLC بستگی دارد و بهترین راه برای اطمینان از نمونه های با کیفیت بالا ، شروع با بهترین ابزارها است. با وجود راه حل هایی برای آب اولتراپور ، تهیه استاندارد ، پیپت ها ، نکات و فیلترها ، خط آماده سازی نمونه HPLC برای همه جزئیات حساب می کند. راه حل ها و نرم افزارهای خودکار همچنین به ساده سازی آماده سازی نمونه برای ارائه نمونه های تمیز برای نتایج تمیز کمک می کنند.
بحث های بیشتر در مورد راه حل های آماده سازی نمونه HPLC مورد استقبال قرار می گیرد!
انگلیسی
چینی
