HPLC -näytteen valmistusratkaisut parhaiden tulosten saavuttamiseksi

Neljä vaihetta HPLC -näytteen valmistelua varten

Vaihe 1. Vesiliuoksten analyysi

Vaihe 2. Standardien valmistelu

Yhdisteiden tunnistamisen ja kvantifioinnin standardien valmistelu voi olla työlästä ja aikaa vievä prosessi. Kiinteän kiinteän punnitseminen tarkasti, jotta voidaan käyttää ennalta määritettyä liuotintilavuutta, ja virheistä johtuva jäte voi olla kallista - varsinkin kun työskentelet lääkkeiden kanssa. Muut tekijät, kuten lämpötila, vaikeuttavat edelleen vakiovalmistelua. Lämpötilan vaihtelut muuttavat liuotintiheyttä ja vaikuttavat dramaattisiin pitoisuuseroja.



Tasapainon avulla, joka mahdollistaa painotarkkuuden useisiin desimaaliin ja automatisoimalla prosessin yhdistämällä tasapaino liuottimen annostelijaan takaa korkeimman tarkkuuden. Ohjelmistojen, kuten YAPP16-annostelun Q-APP-sovelluksen, käyttäminen mahdollistaa mitattujen arvojen automaattiset laskelmat ja gravimetrisen seurannan. Liuottimen lämpötilan ja tiheyden dokumentointi varmistaa myös erittäin tarkkoja pitoisuuksia, etenkin kun valmistetaan standardeja seuraavina päivinä. Suora tiedonsiirto YAPP16 -punnitussovelluksesta Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 -kromatografiatietojärjestelmän (CDS) -ohjelmistoon on vaihtoehto paperittomalle tiedonkäsittelylle täydellisellä tietojen eheydellä.

Vaihe 3. Palaa takaisin perusasioihin hyvällä pipetoinnilla

Tarkan ja tarkan pipetoinnin merkitys jätetään liian usein huomiotta ja sitä pidetään itsestäänselvyytenä. Käyttäjätaitotasolla ja kokemuksella voi olla merkittäviä vaikutuksia herkille analyyseille, kuten HPLC. Oikean pipetin valitseminen voi vähentää inhimillisiä virheitä ja hukkaan liittyvien liuottimien kustannuksia.



Mekaaniset pipettit, joissa on tilavuuslukko, tarjoavat yksinkertaisen ratkaisun vahingossa tapahtuvien tilavuuksien muutosten estämiseksi, kun taas hienostuneemmat elektroniset pipettit eliminoivat käyttäjän vaihtelun toimittaaksesi jatkuvasti tarkkoja määriä. Pipetin kärki on myös tärkeä yksityiskohta, joka on otettava huomioon HPLC -analyyseissä. Pienet retentiovinkit ovat parhaita, kun työskentelet eri viskositeettien liuottimien kanssa, koska ne maksimoivat näytteen palautumisen. Näytteen saastuminen voi tapahtua myös pipetin kärjen huuhtoutumisen seurauksena. Sellaisena kärjet, joilla on korkea kemiallinen resistenssi, säilyttävät näytteen eheyden.

Vaihe 4. Suodatin tarkkuuden ja pitkäikäisyyden varalta

Ylimääräinen varovainen näytteisiin ennen analysointia parantaa luotettavuutta ja voi pidentää HPLC -pylvään käyttöikää estämällä tukkeutumisvaikutuksia. Ruiskunsuodattimet ovat yksinkertainen, nopea liuos näytteiden suodattamiseen ennen pylväskromatografiaa. Kuten pipettikipsissä, HPLC: ssä käytetyt liuottimet vaativat erityisiä suodattimia huuhtoutumisen ja näytteen saastumisen estämiseksi.

Selluloosakalvot ovat resistenttejä dimetyylisulfoksidille (DMSO), amideille, ketoneille, esterille ja eetteriyhdisteille. Erityisen ankarissa liuottimissa päällystämättömät polyethersulfone (PTFO) -kalvot estävät huuhtoutumisen ja näytteen saastumisen. Näytteensuodatuksesta tulee erittäin aikaa vievää, kun näytteen luku kasvaa. Moninäytteen suodatusyksiköt, kuten Claristep®-suodatusjärjestelmä, voivat käsitellä näytteitä ilman ruiskuja ja nopean näytteen valmistelua uhraamatta laatua.

Viisi ongelmaa, jotka sinun on kiinnitettävä huomiota！

1. Mitkä ovat laboratorioiden suurimmat näytteen valmisteluongelmat?

Laboratoriot ovat kasvavan paineessa ajan ja kustannuksen suhteen, ja ne käsittelevät usein vain suuria näytteitä, vaan myös näytteitä vaihtelevista luonteesta. Näytteen valmistelu on alue, jolla hienovaraiset erot näytetyyppien tai näytteen valmistusmenetelmien ja käytettyjen materiaalien välillä voivat vaikuttaa saatuihin tuloksiin. Suodatuslaitteen materiaalien ja liuottimen materiaalien yhteensopivuuden varmistaminen voi minimoida ongelmat; Esimerkiksi poistettavien yhdisteiden tasot, jotka saattavat häiritä analyytin havaitsemista.

2. Mitä tapahtuu, kun näyteprep menee pieleen?

Ennen analyyttisiä korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) -sovelluksia näytteet valmistetaan monilla menetelmillä, joilla kaikilla on potentiaalia vaikuttaa analyyttisiin tuloksiin vaikuttamalla järjestelmään injektoituun näytteeseen. Tehokas näytteen valmistelu voi johtaa pylvään käyttöikän vähentymiseen, komponenttien palvelun vaatimuksiin, instrumentoinnin mahdollisiin seisokkeihin, kromatografisen erottelutehokkuuden ja toistettavuuden vähentymiseen sekä moniin muihin ongelmiin.

3. Ensi silmäyksellä suodatus näyttää yksinkertaiselta prosessilta ...

Vaikka suodatus on näennäisesti pieni osa suuresta työnkulusta, oikean suodattimen valitsemisen vaikutukset tietylle sovellukselle voi olla huomattava. Esimerkiksi menetelmät, jotka eivät poista riittäviä hiukkasia, voivat johtaa pylvään estämiseen. Näytteen valmistuslaitteiden epäasianmukainen valinta voisi tietyissä olosuhteissa vapauttaa uutettavia yhdisteitä näytteeseen, sitoutua kiinnostavia analyyttejä tai tehdä virheitä näytteen menetyksen kautta - kaikki vaikuttavat havaittujen tulosten laatuun ja toistettavuuteen. Jos olet varma siitä, että suodatustarvikkeet eivät osallistu virheisiin, jotka vaativat uudelleensuunnittelu- tai juurikäsittelytutkimuksia, säästät rahaa ja annat itsellesi mielenrauhan.

4. Mitkä ovat yleisin näytteen valmistelu "epäonnistuu"?

Virheellinen suodatinkalvovalinta on yksi ongelma, jota näemme paljon. Ongelmat voivat näkyä vieraina huipuina uuttolaitteista, jotka voivat häiritä kiinnostavien analyyttien havaitsemista. Suodatinväliaineiden yhteensopimattomuus näytteellä tai liuottimella kemiallisen resistenssin suhteen ei rajoitu yksinomaan liukenemisvaikutuksiin suodatinväliaineisiin. Liuottimet voivat aiheuttaa polymeerikalvomateriaalien pienen turvotuksen, kun niitä ei ole täysin yhteensopivia, mikä puolestaan ​​voi vaikuttaa suodatuskykyyn, mikä johtaa näytteiden tehottomaan puhdistukseen. Yksi tapa käsitellä tätä kysymystä on valita kalvo, joka on laajasti yhteensopiva sekä vesipitoisten että orgaanisten liuottimien kanssa. Tyypillisessä HPLC -näytteen valmistuksessa ruisku- ja ruiskuttamattomat suodattimet, jotka sisältävät regeneroituja selluloosamembraaneja, ovat hyvä vaihtoehto niiden laajan liuottimen yhteensopivuuden vuoksi.

Suodatinlaitteen käyttö, joka on suurempi kuin tarvitaan valmistettavan äänenvoimakkuuden kannalta, on toinen yleinen sudenkuopa. Too Large -suodatinlaitteiden käyttö tarkoittaa, että pienet määrät näytettä jää suodattimeen, jopa sen jälkeen, kun varotoimenpiteet on toteutettu niin paljon kuin mahdollista.

5. Mitkä ovat suodatusvaiheen vakavasti ottamisen edut?

Useimpien analyyttisen testauksen laboratorioiden perustavoitteena on kehittää johdonmukaisia ​​prosesseja, jotka tukevat johdonmukaisia ​​tuloksia - ja jotka vaativat johdonmukaista suodatusta. Suodatuslaitteen valinta, jolla on oikea huokoskoko ja retentioominaisuudet, auttaa varmistamaan hiukkasten tehokkaan poistoa, kun taas suodatinyksikön sopivan koon ja suunnittelun valinta voi auttaa minimoimaan näytteen menetyksen. Hyvä suodatus auttaa myös suojaamaan saraketta ja pidentää mahdollisesti sekä injektorin että pylvään käyttöikää.

Johtopäätös

HPLC on arvokas tekniikka biotieteen ja biofarmaseuttisen tutkimuksen kannalta, koska se tuottaa tarkkoja, toistettavia tuloksia. Tämä tarkkuus riippuu HPLC-näytteen eheydestä ja paras tapa varmistaa korkealaatuiset näytteet on aloittaa parhaimmilla työkaluilla. Liuoksella ultrafurta vettä, vakiovalmistelua, pipettejä, vinkkejä ja suodattimia, HPLC -näytteen valmistuslinjatilit jokaiselle yksityiskohdille. Automatisoidut ratkaisut ja ohjelmistot auttavat myös virtaviivaistaa näytteen valmistelua puhtaiden näytteiden toimittamiseksi puhtaiden tulosten saavuttamiseksi.

Lisää keskusteluja HPLC -näytteen valmistusratkaisuista on tervetullut!