Solucións de preparación de mostras de HPLC para os mellores resultados

Catro pasos para a preparación da mostra HPLC

Paso 1. Análise de solucións acuosas

Paso 2. Preparación dos estándares

A preparación dos estándares para a identificación e cuantificación dos compostos pode ser un proceso tedioso e que leva moito tempo. Pesa con precisión un sólido para que se poida usar un volume predefinido de disolvente é difícil e os residuos debido ao erro poden ser custosos, especialmente cando se traballa con farmacéuticos. Outros factores como a temperatura complican aínda máis a preparación estándar. As flutuacións de temperatura alteran a densidade do disolvente e contribúen a diferenzas dramáticas na concentración.



Usando un saldo que permite unha precisión de pesas ata varios lugares decimais e automatizando o proceso ligando o saldo a un dispensador de disolventes garante a maior precisión. Usar software como a dosificación de q-APP de YAPP16 permite cálculos automáticos e control gravimétrico dos valores medidos. Documentar a temperatura e a densidade do disolvente tamén asegura concentracións altamente precisas, especialmente cando se preparan os estándares nos días seguintes. A transferencia directa de datos da aplicación de pesaje de YAPP16 ao Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 O software de sistema de datos de cromatografía (CDS) é unha opción para o manexo de datos sen papel con integridade completa de datos.

Paso 3. Volva aos conceptos básicos con bo canalización

A importancia dunha canalización precisa e precisa é a miúdo esquecida e dada por sentada. O nivel de habilidade e experiencia do usuario pode ter implicacións significativas para análises sensibles como HPLC. A elección da pipeta correcta pode reducir o erro humano e os custos asociados de disolventes desperdiciados.



As pipetas mecánicas cun bloqueo de volume ofrecen unha solución sinxela para evitar cambios de volume accidental, mentres que as pipetas electrónicas máis sofisticadas eliminan a variabilidade do usuario para ofrecer volumes precisos. A punta da pipeta tamén é un detalle importante a considerar para as análises de HPLC. Os consellos de baixa retención son os mellores cando traballan con disolventes de diferentes viscosidades, xa que maximizan a recuperación da mostra. A contaminación da mostra tamén pode producirse como resultado da lixiviación da punta da pipeta. Así, consellos con alta resistencia química preserva a integridade da mostra.

Paso 4. Filtro para a precisión e a lonxevidade

O coidado adicional para filtrar mostras antes da análise mellora a fiabilidade e pode prolongar a vida da columna HPLC evitando os efectos de obstrución. Os filtros de xeringa son unha solución sinxela e rápida para filtrar mostras antes da cromatografía en columna. Do mesmo xeito que cos consellos de pipeta, os disolventes empregados en HPLC necesitan filtros específicos para evitar a lixiviación e a contaminación da mostra.

As membranas de celulosa son resistentes ao sulfóxido de dimetilo (DMSO), amidas, cetonas, éster e compostos de éter. Para disolventes especialmente duros, as membranas de polietsulfona non recubertas (PTFO) evitan a lixiviación e a contaminación da mostra. A filtración da mostra leva moito tempo cando aumenta o número de mostra. As unidades de filtración de varias mostras, como o sistema de filtración Claristep®, poden procesar mostras sen xeringas e preparación de mostras de ruta rápida sen sacrificar a calidade.

Cinco problemas que necesitas para prestar atención a！

1. Cales son os maiores problemas de preparación de mostras que enfrontan os laboratorios?

Os laboratorios están a aumentar a presión en termos de tempo e custo, a miúdo tratando non só cun gran número de mostras, senón tamén mostras de diferentes naturezas. A preparación da mostra é unha área onde as diferenzas sutís entre os tipos de mostra ou os métodos de preparación da mostra e os materiais empregados poden afectar os resultados obtidos. Garantir a compatibilidade entre os materiais do dispositivo de filtración e o disolvente pode minimizar os problemas; Por exemplo, os niveis de compostos extraíbles que poden interferir na detección de analitos.

2. Que pasa cando a preparación da mostra sae mal?

Antes das aplicacións analíticas de cromatografía líquida de alto rendemento (HPLC), as mostras prepáranse por unha variedade de métodos, que teñen o potencial de influír nos resultados analíticos afectando a mostra inxectada no sistema. A preparación ineficaz da mostra pode levar a unha redución da vida de columna, un aumento dos requisitos de servizo para compoñentes, un tempo de inactividade potencial de instrumentación, redución da eficiencia e reproducibilidade de separación cromatográfica e moitos outros problemas.

3. A primeira vista, a filtración parece un proceso sinxelo ...

Aínda que a filtración é unha parte aparentemente pequena dun gran fluxo de traballo, o impacto de escoller o filtro adecuado para unha determinada aplicación pode ser substancial. Por exemplo, os métodos que non eliminan as partículas suficientes poden producir o bloqueo de columnas. A elección inadecuada dos dispositivos de preparación de mostras podería, en determinadas circunstancias, liberar compostos extraíbles na mostra, unir os analitos de interese ou introducir erros mediante a perda de mostras, todo influíndo na calidade e reproducibilidade dos resultados observados. Se estás seguro de que os teus consumibles de filtración non contribúen a erros que requiren investigacións de reelaboración ou causa raíz, aforrarás cartos e darás tranquilidade.

4. Cales son a preparación de mostra máis común "falla"?

A elección incorrecta da membrana do filtro é un problema que vemos moito. As cuestións poden aparecer como picos extraños de extractables, que poden interferir na detección dos analitos de interese. A incompatibilidade dos medios de filtro cunha mostra ou disolvente en termos de resistencia química non se limita só aos efectos de disolución nos medios de filtro. Os disolventes poden causar un lixeiro inchazo de materiais de membrana polimérica cando non son totalmente compatibles, o que á súa vez pode afectar o rendemento de filtración, o que conduce a unha limpeza ineficaz de mostras. Un xeito de resolver este problema é escollendo unha membrana moi compatible con disolventes acuosos e orgánicos. Para a preparación típica da mostra HPLC, a xeringa e os filtros sen xeringa que conteñen membranas de celulosa rexeneradas son unha boa opción debido á súa ampla compatibilidade con disolventes.

O uso dun dispositivo de filtro máis grande do necesario para o volume que se está preparando é outro trampolín común. O uso de dispositivos de filtro demasiado grande significa que permanecerán pequenas cantidades da mostra no filtro, incluso despois de que se tomen precaucións para expulsar o máximo posible.

5. Cales son as vantaxes de tomar en serio o paso de filtración?

Un obxectivo fundamental da maioría dos laboratorios que se dedican a probas analíticas é desenvolver procesos consistentes que apunten os resultados consistentes e que requiran un filtrado consistente. A selección dun dispositivo de filtración co tamaño e as características do tamaño dos poros correctos axuda a garantir a eliminación efectiva de partículas, mentres que a elección do tamaño e deseño adecuado da unidade de filtro poden axudar a minimizar a perda de mostra. A boa filtración tamén axuda a protexer a columna e potencialmente estende a vida útil tanto do inyector como da columna.

Conclusión

HPLC é unha valiosa técnica para a ciencia da vida e a investigación biofarmacéutica xa que proporciona resultados precisos e reproducibles. Esta precisión depende da integridade da mostra HPLC, e o mellor xeito de asegurar mostras de alta calidade é comezar coas mellores ferramentas. Con solucións para auga ultrapura, preparación estándar, pipetas, consellos e filtros, a liña de preparación da mostra HPLC contabiliza todos os detalles. As solucións e software automatizados tamén axudan a axilizar a preparación da mostra para ofrecer mostras limpas para obter resultados limpos.

Son benvidos máis discusións sobre as solucións de preparación de mostras de HPLC.