2. Veća osjetljivost vašeg HPLC stupca
3. Veća točnost
4. manje lažno pozitivnih vrhova
5. manje pozadinske buke
6.ne
Četiri koraka za pripremu uzorka u uzorku HPLC
Uvjeravamo vas kako možete uštedjeti vrijeme s našim rješenjima i istovremeno povećati obnovljivost svojih rezultata:
Korak 1. Analiza vodenih otopina
Loša kvaliteta vode jedan je od najvećih čimbenika koji doprinose problemima tijekom HPLC -a. Nečistoće vode u mobilnoj fazi mogu komunicirati s stupcem i rezultirati lošom razlučivošću i osjetljivošću ili neočekivanim vrhovima u kromatogramu, koji se obično nazivaju duhovnim vrhovima. Korištenje ultračiste vode značajno smanjuje rizik od onečišćenja organskim ugljikovima, mikroorganizmima, endotoksinima, RNazama i DNazama. Ultrapurna voda dostupna je za kupnju, međutim, korištenje sustava za pročišćavanje vode u vašem laboratoriju najlakši je način da se osigura visokokvalitetna ultračista voda. Tip 1 voda reagensa koja zadovoljava ASTM, NCCLS, ISO i USP standarde najbolji su izbor za HPLC aplikacije.
Korak 2. Priprema standarda
Priprema standarda za identifikaciju i kvantifikaciju spoja može biti naporan i dugotrajan postupak. Točno vaganje krute tvari tako da je teško definirani volumen otapala teško, a otpad zbog pogreške može biti skupo - posebno kada radite s farmaceutskim proizvodima. Ostali čimbenici poput temperature dodatno kompliciraju standardnu pripremu. Temperaturne fluktuacije mijenja gustoću otapala i doprinose dramatičnim razlikama u koncentraciji.
Korištenje ravnoteže koja omogućava točnost vaganja do nekoliko decimalnih mjesta i automatizaciju postupka povezivanjem ravnoteže s raspršivačem otapala jamči najveću preciznost. Korištenje softvera kao što je Yapp16 doziranje Q-APP omogućava automatske proračune i gravimetrijsko nadgledanje izmjerenih vrijednosti. Dokumentiranje temperature i gustoće otapala također osigurava vrlo točne koncentracije, posebno prilikom pripreme standarda u sljedećim danima. Izravni prijenos podataka s YAPP16 vaganje aplikacije na Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 softver za kromatografiju podataka (CDS) opcija je opcija za rukovanje bez papira s potpunim integritetom podataka.
Korak 3. Vratite se na osnove s dobrim pipetom
Važnost preciznog i preciznog pipeta prečesto se zanemaruje i uzima zdravo za gotovo. Razina i iskustvo korisničkih vještina mogu imati značajne posljedice na osjetljive analize poput HPLC -a. Odabir prave pipete može smanjiti ljudsku pogrešku i pridružene troškove izgubljenih otapala.
Mehaničke pipete s zaključavanjem volumena nude jednostavno rješenje za sprečavanje slučajnih promjena volumena, dok sofisticiranije elektroničke pipete uklanjaju varijabilnost korisnika kako bi dosljedno isporučile precizne količine. Savjet pipete također je važan detalj koji treba uzeti u obzir za HPLC analize. Savjeti za malo zadržavanja najbolji su u radu s otapalima različitih viskoznih, jer maksimiziraju oporavak uzorka. Zagađenje uzorka može se dogoditi i kao rezultat ispiranja s vrha pipete. Kao takvi, savjeti s visokom kemijskom otporom čuvaju integritet uzorka.
Korak 4. Filter za točnost i dugovječnost
Uzimanje dodatne brige za filtriranje uzoraka prije analize poboljšava pouzdanost i može produžiti život HPLC stupca sprječavajući efekte začepljenja. Filteri za šprice jednostavno su, brzo rješenje za filtriranje uzoraka prije kromatografije na stupcu. Kao i kod vrhova pipete, otapala koja se koriste u HPLC -u zahtijevaju određene filtre kako bi se spriječilo ispiranje i kontaminaciju uzorka.
Membrane celuloze otporne su na dimetil sulfoksid (DMSO), amide, ketone, ester i eterske spojeve. Za posebno oštra otapala, membrane bez prisvajanja polietherulfona (PTFO) sprječavaju ispiranje i onečišćenje uzorka. Filtracija uzorka postaje dugotrajna kada se broj uzorka poveća. Filtracijske jedinice s više uzorka, poput sustava Claristep® filtracije, mogu obraditi uzorke bez šprica i pripreme uzoraka ubrza bez žrtvovanja kvalitete.
Pet problema na koje trebate obratiti pažnju na！
1. Koji su najveći problemi s pripremom uzoraka s kojima se suočavaju laboratoriji?
Laboratoriji su pod sve većim pritiskom u pogledu vremena i troškova, često se bave ne samo s velikim brojem uzoraka, već i uzorcima različitih priroda. Priprema uzoraka je područje u kojem suptilne razlike između vrsta uzoraka ili metoda pripreme uzorka i korištenih materijala mogu utjecati na dobivene rezultate. Osiguravanje kompatibilnosti između materijala u uređaju za filtraciju i otapala može umanjiti probleme; Na primjer, razine ekstrahiranih spojeva koji mogu ometati otkrivanje analitika.
2. Što se događa kada priprema uzoraka pođe po zlu?
Prije analitičke aplikacije visokih performansi tekuće kromatografije (HPLC), uzorci se pripremaju različitim metodama, a sve oni mogu utjecati na analitičke rezultate utječući na uzorak ubrizgan u sustav. Neučinkovita priprema uzoraka može dovesti do smanjenja životnog vijeka stupca, povećanih zahtjeva za uslugom za komponente, potencijalnog zastoja instrumentacije, smanjenja učinkovitosti i obnovljivosti kromatografskog razdvajanja i mnogih drugih problema.
3. Na prvi pogled, filtracija izgleda kao jednostavan postupak ...
Iako je filtracija naizgled mali dio velikog tijeka rada, utjecaj odabira pravog filtra za određenu primjenu može biti značajan. Na primjer, metode koje ne uklanjaju dovoljno čestica mogu rezultirati blokiranjem stupca. Neprimjeren izbor uređaja za pripremu uzoraka mogao bi, pod određenim okolnostima, osloboditi spojeve koji se mogu ekstrahirati u uzorak, vezati analite od interesa ili uvesti pogreške kroz gubitak uzorka - svi utječu na kvalitetu i obnovljivost promatranih rezultata. Ako ste sigurni da vaš potrošni materijal za filtraciju ne doprinosi pogreškama koje zahtijevaju preradu ili istrage uzroka, uštedjet ćete novac i dati sebi mir.
4. Koji su najčešći uzorak priprema "neuspjeh"?
Netočni izbor membrane filtra jedan je problem koji vidimo puno. Problemi se mogu pojaviti kao vanjski vrhovi iz ekstraktavih, što može ometati otkrivanje analita od interesa. Nekompatibilnost filtriranih medija s uzorkom ili otapalom u smislu kemijske otpornosti nije isključivo ograničena na efekte otapanja na filtrirani medij. Otapala mogu uzrokovati lagano oticanje materijala od polimerne membrane kada nisu u potpunosti kompatibilne, što zauzvrat može utjecati na performanse filtracije, što dovodi do neučinkovitog čišćenja uzoraka. Jedan od načina za rješavanje ovog problema je odabir membrane koja je široko kompatibilna s vodenim i organskim otapalima. Za tipične HPLC uzorke uzoraka, štrcaljke i filtera bez šprica koji sadrže regenerirane membrane celuloze dobra su opcija zbog njihove široke kompatibilnosti otapala.
Upotreba filtriranog uređaja koji je veći od potrebnog za pripremu glasnoće je još jedna uobičajena zamka. Upotreba previše velikih uređaja za filtriranje znači da će male količine uzorka ostati u filtru, čak i nakon što se poduzmu mjere opreza kako bi se izbacila što je više moguće.
5. Koje su prednosti ozbiljno uzimanje koraka filtracije?
Temeljni cilj većine laboratorija koje se bave analitičkim testiranjem je razviti dosljedne procese koji podupiru konzistentne rezultate - i koji zahtijevaju dosljedno filtriranje. Odabir uređaja za filtraciju s pravom veličinom pora i karakteristika zadržavanja pomaže osigurati učinkovito uklanjanje čestica, dok izbor odgovarajuće veličine i dizajna filtrirane jedinice može pomoći u smanjenju gubitka uzorka. Dobra filtracija također pomaže u zaštiti stupca i potencijalno proširuje životni vijek injektora i stupca.
Zaključak
HPLC je vrijedna tehnika znanosti o životu i biofarmaceutskih istraživanja jer daje točne, ponovljive rezultate. Ova točnost ovisi o integritetu uzorka HPLC-a, a najbolji način da se osigura visokokvalitetni uzorci je započeti s najboljim alatima. Uz otopine za ultračistu vodu, standardnu pripremu, pipete, savjete i filtre, liniju pripreme HPLC uzorka za svaki detalj. Automatizirana rješenja i softver također pomažu u pojednostavljenju pripreme uzoraka za isporuku čistih uzoraka za čiste rezultate.
Više rasprava o HPLC rješenjima za pripremu uzoraka je dobrodošlo!
engleski
kineski
