HPLC minta előkészítő megoldások a legjobb eredmények érdekében

Négy lépés a HPLC minta előkészítéséhez

1. lépés. A vizes oldatok elemzése

2. lépés. Szabványok előkészítése

Az összetett azonosítás és számszerűsítés szabványainak előkészítése unalmas és időigényes folyamat lehet. Pontosan mérlegelje a szilárd anyagot úgy, hogy az oldószer előre meghatározott térfogata nehéz legyen, és a hiba miatti hulladék költséges lehet - különösen a gyógyszerekkel való munka esetén. Más tényezők, például a hőmérséklet tovább bonyolítják a standard előkészítést. A hőmérsékleti ingadozások megváltoztatják az oldószer sűrűségét és hozzájárulnak a koncentráció drámai különbségeihez.



Egy olyan egyenleg használata, amely lehetővé teszi a mérlegelési pontosságot több tizedesjegyig, és automatizálja a folyamatot az egyensúly összekapcsolásával az oldószer adagolóval, garantálja a legmagasabb pontosságot. Az olyan szoftverek használata, mint a YApp16 adagolási Q-alkalmazás, lehetővé teszi a mért értékek automatikus számítását és gravimetrikus megfigyelését. Az oldószer hőmérsékletének és sűrűségének dokumentálása szintén biztosítja a rendkívül pontos koncentrációkat, különösen a következő napokban a szabványok elkészítésekor. Közvetlen adatátvitel a YApp16 mérlegelési alkalmazásból a Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Kromatográfiás Data System (CDS) szoftver a papír nélküli adatkezelés lehetősége a teljes adatok integritásával.

3. lépés. Térjen vissza az alapokhoz jó pipettázással

A pontos és pontos pipettázás fontosságát túl gyakran figyelmen kívül hagyják, és magától értetődőnek tekintik. A felhasználói készségek szintje és tapasztalata jelentős következményekkel járhat olyan érzékeny elemzésekre, mint a HPLC. A megfelelő pipetta kiválasztása csökkentheti az emberi hibákat és a pazarolt oldószerek kapcsolódó költségeit.



A hangerő -zárral rendelkező mechanikus pipetták egyszerű megoldást kínálnak a véletlenszerű térfogatváltozások megelőzésére, míg a kifinomultabb elektronikus pipetták kiküszöbölik a felhasználói variabilitást, hogy következetesen pontos mennyiségeket biztosítsanak. A pipett tip is fontos részlet, amelyet figyelembe kell venni a HPLC elemzések szempontjából. Az alacsony visszatartási tippek a legjobbak a különböző viszkozitások oldószereivel való munka esetén, mivel ezek maximalizálják a minta visszanyerését. A minta szennyeződése a pipettapirokból történő kimosódás eredményeként is előfordulhat. Mint ilyen, a nagy kémiai ellenállású tippek megőrzik a minta integritását.

4. lépés. Szűrő a pontosság és a hosszú élettartam érdekében

A minták elemzés előtti szűrésének további gondoskodása javítja a megbízhatóságot, és meghosszabbíthatja a HPLC oszlop élettartamát az eltömődési hatások megelőzésével. A fecskendőszűrők egy egyszerű, gyors megoldás a minták szűrésére az oszlopkromatográfia előtt. Mint a pipette -tippeknél, a HPLC -ben használt oldószerek speciális szűrőket igényelnek a kimosódások és a minta szennyeződésének megakadályozására.

A cellulózmembránok rezisztensek a dimetil -szulfoxid (DMSO), amidok, ketonok, észter és étervegyületek ellen. Különösen kemény oldószerek esetén a bevonatlan polieterszulfon (PTFO) membránok megakadályozzák a kimosódást és a minta szennyeződését. A minta szűrése nagyon időigényessé válik, amikor a mintaszám növekszik. A több mintájú szűrő egységek, például a ClarISTEP® szűrőrendszer, fecskendők nélkül feldolgozhatják a mintákat és a gyorsminta előkészítését a minőség feláldozása nélkül.

Öt probléma, amellyel figyelnie kell！

1. Melyek a laboratóriumok legnagyobb mintájának előkészítő problémái?

A laboratóriumok idő és költségek szempontjából egyre növekvő nyomás alatt állnak, gyakran nemcsak nagy számú mintával, hanem különböző természetű mintákkal is. A minta előkészítése olyan terület, ahol a mintátípusok, vagy a minta előkészítési módszerek és a felhasznált anyagok finom különbségei befolyásolhatják a kapott eredményeket. A szűrőberendezés és az oldószer közötti kompatibilitás biztosítása minimalizálhatja a problémákat; Például az extrahálható vegyületek szintje, amelyek zavarhatják az analit detektálását.

2. Mi történik, ha a minta előkészítése rosszul megy?

Az analitikus nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) alkalmazások előtt a mintákat különféle módszerekkel készítik el, amelyek mindegyike befolyásolhatja az analitikai eredményeket azáltal, hogy befolyásolja a rendszerbe injektált mintát. A nem hatékony minta előkészítése az oszlop élettartamának csökkentéséhez, az alkatrészek megnövekedett szolgáltatási követelményeihez, a műszerek lehetséges leállásahoz, a kromatográfiás elválasztás hatékonyságának csökkentéséhez és a reprodukálhatósághoz, valamint sok más problémahoz vezethet.

3. Első pillantásra a szűrés egyszerű folyamatnak tűnik ...

Noha a szűrés egy nagy munkafolyamat látszólag kicsi része, a megfelelő szűrő kiválasztásának egy adott alkalmazáshoz való hatása jelentős lehet. Például azok a módszerek, amelyek nem távolítják el a megfelelő részecskéket, az oszlopok blokkolását eredményezhetik. A minta előkészítő eszközök nem megfelelő választása bizonyos körülmények között az extrahálható vegyületeket felszabadíthatja a mintába, megkötheti az érdeklődés analitjait, vagy a minták elvesztése révén hibákat vezethet be - mindegyik befolyásolja a megfigyelt eredmények minőségét és reprodukálhatóságát. Ha biztos benne, hogy a szűrő fogyóeszközök nem járulnak hozzá az átdolgozáshoz vagy a gyökér okozott nyomozáshoz szükséges hibákhoz, akkor pénzt takaríthat meg, és nyugalmat ad magának.

4. Melyek a leggyakoribb minta előkészítése a „kudarc”?

A helytelen szűrőmembránválasztás az egyik probléma, amelyet sokat látunk. A problémák az extrahálható anyagok idegen csúcsokként jelentkezhetnek, amelyek zavarhatják az érdeklődésre számot tartó analitok kimutatását. A szűrő táptalajának mintával vagy oldószerrel való inkompatibilitása a kémiai ellenállás szempontjából nem kizárólag a szűrő táptalaj oldódási hatására korlátozódik. Az oldószerek a polimer membrán anyagok enyhe duzzanatát okozhatják, ha nem teljesen kompatibilisek, ami viszont befolyásolhatja a szűrési teljesítményt, ami a minták hatástalan tisztításához vezethet. A probléma megoldásának egyik módja egy olyan membrán kiválasztása, amely széles körben kompatibilis mind a vizes, mind a szerves oldószerekkel. A tipikus HPLC minta előkészítéséhez a regenerált cellulózmembránokat tartalmazó fecskendők és fecskendő nélküli szűrők jó lehetőségek széles körű oldószer -kompatibilitásuk miatt.

Egy másik általános bukás egy szűrőeszköz használata, amely nagyobb az előkészített hangerőhez. A túl nagy szűrőeszközök használata azt jelenti, hogy a minta kis mennyisége a szűrőben marad, még akkor is, ha az óvintézkedéseket a lehető legnagyobb mértékben kiürítik.

5. Milyen előnyei vannak a szűrési lépés komolyan történő megtételének?

Az analitikai teszteléssel foglalkozó legtöbb laboratórium alapvető célja az olyan következetes folyamatok kidolgozása, amelyek a következetes eredményeket alátámasztják - és amelyek következetes szűrést igényelnek. A megfelelő pórusméretű és visszatartási jellemzőkkel rendelkező szűrőberendezés kiválasztása elősegíti a tényleges részecskék eltávolítását, míg a megfelelő méret és a szűrőegység kialakítása megválaszthatja a minta elvesztését. A jó szűrés segíti az oszlop védelmét is, és potenciálisan meghosszabbítja mind az injektor, mind az oszlop élettartamát.

Következtetés

A HPLC értékes technika az élettudományhoz és a biofarmakeutikus kutatáshoz, mivel pontos, reprodukálható eredményeket eredményez. Ez a pontosság a HPLC minta integritásától függ, és a kiváló minőségű minták biztosításának legjobb módja a legjobb eszközökkel való kezdés. Az ultrapure víz, a szokásos előkészítés, a pipetták, a tippek és a szűrők megoldásaival a HPLC minta előkészítő vonal minden részletet figyelembe vesz. Az automatizált megoldások és szoftverek szintén segítenek a minta előkészítésének és a tiszta minták tiszta eredmények eléréséhez.

További vitákat fogadunk a HPLC minta előkészítő megoldásairól!