Solusi persiapan sampel HPLC untuk hasil terbaik

Empat langkah untuk persiapan sampel HPLC

Langkah 1. Analisis solusi air

Langkah 2. Persiapan Standar

Mempersiapkan standar untuk identifikasi dan kuantifikasi senyawa dapat menjadi proses yang membosankan dan memakan waktu. Menimbang secara akurat sehingga volume pelarut yang telah ditentukan dapat digunakan adalah sulit, dan limbah karena kesalahan bisa mahal - terutama saat bekerja dengan obat -obatan. Faktor -faktor lain seperti suhu semakin memperumit persiapan standar. Fluktuasi suhu mengubah kepadatan pelarut dan berkontribusi pada perbedaan dramatis dalam konsentrasi.



Menggunakan keseimbangan yang memungkinkan akurasi penimbangan hingga beberapa tempat desimal dan mengotomatiskan proses dengan menghubungkan keseimbangan ke dispenser pelarut menjamin presisi tertinggi. Menggunakan perangkat lunak seperti Dosis Yapp16 q-App memungkinkan perhitungan otomatis dan pemantauan gravimetri dari nilai yang diukur. Mendokumentasikan suhu dan kepadatan pelarut juga memastikan konsentrasi yang sangat akurat, terutama ketika menyiapkan standar pada hari -hari berikutnya. Transfer Data Langsung dari Aplikasi Penimbangan Yapp16 ke perangkat lunak Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) adalah opsi untuk penanganan data tanpa kertas dengan integritas data lengkap.

Langkah 3. Kembali ke dasar dengan pipetting yang bagus

Pentingnya pemipaan yang akurat dan tepat terlalu sering diabaikan dan diterima begitu saja. Tingkat keterampilan pengguna dan pengalaman dapat memiliki implikasi yang signifikan untuk analisis sensitif seperti HPLC. Memilih pipet yang tepat dapat mengurangi kesalahan manusia dan biaya terkait pelarut yang terbuang.



Pipet mekanis dengan kunci volume menawarkan solusi sederhana untuk mencegah perubahan volume yang tidak disengaja, sementara pipet elektronik yang lebih canggih menghilangkan variabilitas pengguna untuk secara konsisten memberikan volume yang tepat. Tip pipet juga merupakan detail penting untuk dipertimbangkan untuk analisis HPLC. Kiat retensi rendah adalah yang terbaik ketika bekerja dengan pelarut viskositas yang berbeda, karena mereka memaksimalkan pemulihan sampel. Kontaminasi sampel juga dapat terjadi sebagai akibat dari pencucian dari ujung pipet. Dengan demikian, tips dengan integritas sampel resistensi kimia yang tinggi.

Langkah 4. Filter untuk akurasi dan umur panjang

Mengambil perawatan tambahan untuk memfilter sampel sebelum analisis meningkatkan keandalan dan dapat memperpanjang umur kolom HPLC dengan mencegah efek penyumbatan. Filter jarum suntik adalah solusi sederhana dan cepat untuk memfilter sampel sebelum kromatografi kolom. Seperti halnya ujung pipet, pelarut yang digunakan dalam HPLC memerlukan filter spesifik untuk mencegah pencucian dan kontaminasi sampel.

Membran selulosa resisten terhadap dimetil sulfoksida (DMSO), amida, keton, ester, dan senyawa eter. Untuk pelarut yang keras, membran polyethersulfone (PTFO) yang tidak dilapisi mencegah pencucian dan kontaminasi sampel. Filtrasi sampel menjadi sangat memakan waktu ketika jumlah sampel meningkat. Unit filtrasi multi-sampel, seperti sistem filtrasi Claristep®, dapat memproses sampel tanpa jarum suntik dan persiapan sampel jalur cepat tanpa mengorbankan kualitas.

Lima masalah yang perlu Anda perhatikan！

1. Apa masalah persiapan sampel terbesar yang dihadapi laboratorium?

Laboratorium berada di bawah tekanan yang semakin meningkat dalam hal waktu dan biaya, seringkali berurusan tidak hanya dengan jumlah sampel yang tinggi tetapi juga sampel dari berbagai sifat. Persiapan sampel adalah area di mana perbedaan halus antara jenis sampel atau metode persiapan sampel dan bahan yang digunakan dapat memengaruhi hasil yang diperoleh. Memastikan kompatibilitas antara bahan di perangkat filtrasi dan pelarut dapat meminimalkan masalah; Misalnya, tingkat senyawa yang dapat diekstraksi yang mungkin mengganggu deteksi analit.

2. Apa yang terjadi saat persiapan sampel salah?

Sebelum aplikasi kromatografi cair kinerja tinggi analitik (HPLC), sampel disiapkan dengan berbagai metode, yang semuanya memiliki potensi untuk mempengaruhi hasil analitik dengan mempengaruhi sampel yang disuntikkan ke dalam sistem. Persiapan sampel yang tidak efektif dapat menyebabkan pengurangan kehidupan kolom, peningkatan persyaratan layanan untuk komponen, potensi downtime instrumentasi, pengurangan efisiensi pemisahan kromatografi dan reproduktifitas, dan banyak masalah lainnya.

3. Pada pandangan pertama, penyaringan sepertinya proses sederhana ...

Meskipun penyaringan adalah bagian kecil dari alur kerja yang besar, dampak dari memilih filter yang tepat untuk aplikasi yang diberikan dapat menjadi substansial. Misalnya, metode yang tidak menghilangkan materi partikulat yang cukup dapat mengakibatkan pemblokiran kolom. Pilihan yang tidak tepat dari perangkat persiapan sampel dapat, dalam keadaan tertentu, melepaskan senyawa yang dapat diekstraksi ke dalam sampel, mengikat analit yang menarik atau memperkenalkan kesalahan melalui kehilangan sampel - semua mempengaruhi kualitas dan reproduktifitas hasil yang diamati. Jika Anda yakin bahwa bahan habis pakai filtrasi Anda tidak berkontribusi pada kesalahan yang memerlukan pengerjaan ulang atau penyelidikan penyebab root, Anda akan menghemat uang dan memberi diri Anda ketenangan pikiran.

4. Apa persiapan sampel yang paling umum 'gagal'?

Pilihan membran filter yang salah adalah salah satu masalah yang banyak kita lihat. Masalah dapat muncul sebagai puncak asing dari yang dapat diekstraksi, yang dapat mengganggu deteksi analit yang menarik. Ketidakcocokan media filter dengan sampel atau pelarut dalam hal resistensi kimia tidak hanya terbatas pada efek disolusi pada media filter. Pelarut dapat menyebabkan sedikit pembengkakan bahan membran polimer ketika tidak sepenuhnya kompatibel, yang pada gilirannya dapat mempengaruhi kinerja filtrasi, yang mengarah pada pembersihan sampel yang tidak efektif. Salah satu cara untuk mengatasi masalah ini adalah dengan memilih membran yang secara luas kompatibel dengan pelarut berair dan organik. Untuk persiapan sampel HPLC yang khas, jarum suntik dan filter tanpa suntikan yang mengandung membran selulosa yang diregenerasi adalah pilihan yang baik karena kompatibilitas pelarutnya yang luas.

Penggunaan perangkat filter yang lebih besar dari yang dibutuhkan untuk volume yang disiapkan adalah perangkap umum lainnya. Penggunaan perangkat filter yang terlalu besar berarti bahwa sejumlah kecil sampel akan tetap berada di filter, bahkan setelah tindakan pencegahan diambil untuk mengeluarkan sebanyak mungkin.

5. Apa keuntungan dari mengambil langkah penyaringan dengan serius?

Tujuan mendasar dari sebagian besar laboratorium yang terlibat dalam pengujian analitik adalah untuk mengembangkan proses yang konsisten yang mendukung hasil yang konsisten - dan yang membutuhkan penyaringan yang konsisten. Pemilihan perangkat filtrasi dengan ukuran pori dan karakteristik retensi yang tepat membantu memastikan penghapusan partikulat yang efektif, sementara pilihan ukuran dan desain unit filter yang sesuai dapat membantu meminimalkan kehilangan sampel. Filtrasi yang baik juga membantu melindungi kolom dan berpotensi memperpanjang masa pakai injektor dan kolom.

Kesimpulan

HPLC adalah teknik yang berharga untuk ilmu kehidupan dan penelitian biofarmasi karena memberikan hasil yang akurat dan dapat direproduksi. Akurasi ini tergantung pada integritas sampel HPLC, dan cara terbaik untuk memastikan sampel berkualitas tinggi adalah dengan memulai dengan alat terbaik. Dengan solusi untuk air ultrapure, persiapan standar, pipet, tip, dan filter, jalur persiapan sampel HPLC menyumbang setiap detail. Solusi dan perangkat lunak otomatis juga membantu merampingkan persiapan sampel untuk memberikan sampel bersih untuk hasil yang bersih.

Diskusi lebih lanjut tentang solusi persiapan sampel HPLC disambut!