1. თქვენი HPLC სვეტის ბლოკირება
2. თქვენი HPLC სვეტის უფრო მაღალი მგრძნობელობა
3. უფრო მაღალი სიზუსტე
4. ნაკლები ცრუ პოზიტიური მწვერვალები
5. ნაკლები ფონის ხმაური
6.
ოთხი ნაბიჯი HPLC ნიმუშის მომზადებისთვის
მოდით დაგარწმუნოთ, თუ როგორ შეგიძლიათ დაზოგოთ დრო ჩვენი გადაწყვეტილებებით და ამავე დროს გაზარდოთ თქვენი შედეგების რეპროდუქცია:
ნაბიჯი 1. წყლის გადაწყვეტილებების ანალიზი
წყლის ცუდი ხარისხი არის HPLC– ის დროს პრობლემების ერთ - ერთი ყველაზე დიდი ფაქტორი. მობილური ფაზაში წყლის მინარევებს შეუძლიათ ურთიერთქმედება სვეტთან და გამოიწვიოს ცუდი რეზოლუცია და მგრძნობელობა ან მოულოდნელი მწვერვალები ქრომატოგრამაში, რომელსაც ჩვეულებრივ მოიხსენიებენ, როგორც მოჩვენების მწვერვალებს. ულტრაბგერითი წყლის გამოყენებით არსებითად ამცირებს დაბინძურების რისკს ორგანული ნახშირბადებით, მიკროორგანიზმებით, ენდოტოქსინებით, რნმებითა და დნმაზებით. ულტრაბგერითი წყალი ხელმისაწვდომია შესყიდვისთვის, თუმცა, თქვენს ლაბორატორიაში წყლის გამწმენდის სისტემის გამოყენება ყველაზე მარტივი გზაა მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი წყლის უზრუნველსაყოფად. ტიპი 1 რეაგენტ-კლასის წყალი, რომელიც აკმაყოფილებს ASTM, NCCLS, ISO და USP სტანდარტებს საუკეთესო არჩევანია HPLC პროგრამებისთვის.
ნაბიჯი 2. სტანდარტების მომზადება
რთული იდენტიფიკაციისა და რაოდენობრივი სტანდარტების მომზადება შეიძლება იყოს დამღლელი და შრომატევადი პროცესი. ზუსტად წონა მყარი, ისე, რომ გამხსნელის წინასწარ განსაზღვრული მოცულობა შეიძლება გამოყენებულ იქნას, და შეცდომის გამო ნარჩენები შეიძლება იყოს ძვირი - განსაკუთრებით ფარმაცევტებთან მუშაობისას. სხვა ფაქტორები, როგორიცაა ტემპერატურა, კიდევ უფრო ართულებს სტანდარტულ მომზადებას. ტემპერატურის რყევები ცვლის გამხსნელთა სიმკვრივეს და ხელს უწყობს კონცენტრაციის დრამატულ განსხვავებებს.
ბალანსის გამოყენებით, რომელიც საშუალებას იძლევა წონის სიზუსტე რამდენიმე ათწილამდე ადგილამდე და პროცესის ავტომატიზაცია, ბალანსის გამხსნელ დისპენსერთან დაკავშირება, უზრუნველყოფს ყველაზე მაღალ სიზუსტეს. ისეთი პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით, როგორიცაა YAPP16 დოზირების Q-App, საშუალებას იძლევა ავტომატური გამოთვლები და გაზომილი მნიშვნელობების გრავიმეტრიული მონიტორინგი. გამხსნელის ტემპერატურისა და სიმკვრივის დოკუმენტირება ასევე უზრუნველყოფს უაღრესად ზუსტ კონცენტრაციას, განსაკუთრებით შემდგომ დღეებში სტანდარტების მომზადებისას. პირდაპირი მონაცემების გადაცემა YAPP16 წონის აპლიკაციიდან Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 ქრომატოგრაფიის მონაცემთა სისტემის (CDS) პროგრამული უზრუნველყოფა არის მონაცემთა უსადენო მონაცემების გატარების ვარიანტი, მონაცემთა სრული მთლიანობით.
ნაბიჯი 3. დაუბრუნდით საფუძვლებს კარგი პიპეტინგით
ზუსტი და ზუსტი პიპეტების მნიშვნელობა ძალიან ხშირად უგულებელყოფილია და მიღებულია. მომხმარებლის უნარის დონემ და გამოცდილებამ შეიძლება მნიშვნელოვანი გავლენა მოახდინოს მგრძნობიარე ანალიზებზე, როგორიცაა HPLC. სწორი პიპეტის არჩევა შეიძლება შეამციროს ადამიანის შეცდომა და გაფუჭებული გამხსნელების ასოცირებული ხარჯები.
მექანიკური პიპეტები, რომელთაც აქვთ მოცულობის ჩაკეტვა, გთავაზობთ მარტივ გამოსავალს შემთხვევითი მოცულობის ცვლილებების თავიდან ასაცილებლად, ხოლო უფრო დახვეწილი ელექტრონული პიპეტები აღმოფხვრის მომხმარებლის ცვალებადობას, რომ თანმიმდევრულად მიიტანონ ზუსტი მოცულობა. პიპეტის წვერი ასევე მნიშვნელოვანი დეტალია, რომელიც გასათვალისწინებელია HPLC ანალიზებისთვის. დაბალი შეკავების რჩევები საუკეთესოა სხვადასხვა სიბლანტის გამხსნელებთან მუშაობისას, რადგან ისინი მაქსიმალურად გაზრდენ ნიმუშის აღდგენას. ნიმუშის დაბინძურება ასევე შეიძლება მოხდეს პიპეტის წვერიდან გაჟონვის შედეგად. როგორც ასეთი, რჩევები მაღალი ქიმიური წინააღმდეგობის დაცვით შეინარჩუნეთ ნიმუშის მთლიანობა.
ნაბიჯი 4. ფილტრი სიზუსტისა და ხანგრძლივობისთვის
ანალიზამდე ნიმუშების გაფილტვრის დამატებით ზრუნვა აუმჯობესებს საიმედოობას და შეუძლია გახანგრძლივდეს HPLC სვეტის სიცოცხლე, დაბლოკვის ეფექტების თავიდან ასაცილებლად. შპრიცის ფილტრები არის მარტივი, სწრაფი გამოსავალი ნიმუშების ფილტრაციისთვის სვეტის ქრომატოგრაფიამდე. როგორც პიპეტის რჩევები, HPLC- ში გამოყენებული გამხსნელები მოითხოვს სპეციფიკურ ფილტრებს, რათა თავიდან აიცილონ გაჟონვა და ნიმუშის დაბინძურება.
ცელულოზის მემბრანები მდგრადია დიმეთილ სულფოქსიდის (DMSO), ამიდების, კეტონების, ეთერის და ეთერის ნაერთების მიმართ. განსაკუთრებით მკაცრი გამხსნელებისთვის, არაკეთილსინდისიერი პოლიეთერსულფონის (PTFO) მემბრანები ხელს უშლის გაჟონვას და ნიმუშის დაბინძურებას. ნიმუშის ფილტრაცია ხდება ძალიან შრომატევადი, როდესაც ნიმუშის ნომერი იზრდება. მრავალ ნიმუშის ფილტრაციის ერთეულებს, როგორიცაა Claristep® ფილტრაციის სისტემა, შეუძლიათ დაამუშავონ ნიმუშები შპრიცების გარეშე და სწრაფი ნიმუშის მომზადების გარეშე, ხარისხის შეწირვის გარეშე.
ხუთი პრობლემა თქვენ უნდა მიაქციოთ ყურადღება
1. რა არის ყველაზე დიდი ნიმუშის მოსამზადებელი პრობლემები ლაბორატორიების წინაშე?
ლაბორატორიები იზრდება ზეწოლის დროს დროისა და ღირებულების თვალსაზრისით, ხშირად ეხება არა მხოლოდ ნიმუშების დიდ რაოდენობას, არამედ სხვადასხვა ბუნების ნიმუშებს. ნიმუშის მომზადება არის სფერო, სადაც დახვეწილი განსხვავებები ნიმუშის ტიპებს შორის ან ნიმუშის მომზადების მეთოდებსა და გამოყენებულ მასალებს შორის შეიძლება გავლენა იქონიოს მიღებულ შედეგებზე. ფილტრაციის მოწყობილობაში და გამხსნელში მასალებს შორის თავსებადობის უზრუნველყოფა შეიძლება შემცირდეს საკითხები; მაგალითად, მოპოვებული ნაერთების ის დონეები, რომლებიც შეიძლება ხელი შეუშალონ ანალიზის გამოვლენას.
2. რა მოხდება, როდესაც ნიმუშის მოსამზადებელი არასწორია?
ანალიტიკური მაღალი ხარისხის თხევადი ქრომატოგრაფიის (HPLC) გამოყენებამდე, ნიმუშები მზადდება სხვადასხვა მეთოდით, რომელთაგან ყველა მათგანს აქვს ანალიტიკური შედეგების გავლენის პოტენციალი, სისტემაში შეყვანილი ნიმუშის გავლენის გზით. ნიმუშის არაეფექტურმა მომზადებამ შეიძლება გამოიწვიოს სვეტის სიცოცხლის შემცირება, კომპონენტების მომსახურების მოთხოვნების გაზრდა, ინსტრუმენტაციის პოტენციური შემცირება, ქრომატოგრაფიული განცალკევების ეფექტურობის შემცირება და რეპროდუქცია და მრავალი სხვა პრობლემა.
3. ერთი შეხედვით, ფილტრაცია მარტივი პროცესია ...
მიუხედავად იმისა, რომ ფილტრაცია დიდი სამუშაო ნაკადის ერთი შეხედვით მცირე ნაწილია, მოცემული აპლიკაციისთვის სწორი ფილტრის არჩევის გავლენა შეიძლება იყოს არსებითი. მაგალითად, მეთოდები, რომლებიც არ ამოიღებენ საკმარის ნაწილაკებს, შეიძლება გამოიწვიოს სვეტის დაბლოკვა. ნიმუშის მომზადების მოწყობილობების შეუსაბამო არჩევანმა შეიძლება, გარკვეულ პირობებში, გაათავისუფლოს ნიმუშში მოპოვებული ნაერთები, დააკავშიროს ინტერესის ანალიზები ან შემოიღოს შეცდომები ნიმუშის დაკარგვის გზით - ეს ყველაფერი გავლენას ახდენს დაფიქსირებული შედეგების ხარისხზე და რეპროდუქციაზე. თუ დარწმუნებული ხართ, რომ თქვენი ფილტრაციის სახარჯო მასალები არ უწყობს ხელს შეცდომებს, რომლებიც საჭიროებენ გადამუშავებას ან ფესვთა მიზეზების გამოძიებას, თქვენ დაზოგავთ ფულს და საკუთარ თავს მშვიდად მისცემთ.
4. რომელია ყველაზე გავრცელებული ნიმუში მოსამზადებელი "წარუმატებლობა"?
ფილტრის არასწორი არჩევანი არის ერთი პრობლემა, რომელსაც ბევრს ვხედავთ. საკითხები შეიძლება გამოჩნდეს ექსტრაქტებიდან ექსტრაორდინალური მწვერვალებით, რამაც შეიძლება ხელი შეუშალოს ინტერესის ანალიზების გამოვლენას. ფილტრის მედიის შეუთავსებლობა ქიმიური წინააღმდეგობის თვალსაზრისით ნიმუშთან ან გამხსნელთან, არ შემოიფარგლება მხოლოდ ფილტრის მედიაზე დაშლის ეფექტებით. გამხსნელებმა შეიძლება გამოიწვიოს პოლიმერული მემბრანის მასალების უმნიშვნელო შეშუპება, როდესაც არ არის სრულად თავსებადი, რაც თავის მხრივ შეიძლება გავლენა იქონიოს ფილტრაციის შესრულებაზე, რაც გამოიწვევს ნიმუშების არაეფექტურ გაწმენდას. ამ საკითხის მოგვარების ერთი გზაა მემბრანის არჩევით, რომელიც ფართოდ შეესაბამება როგორც წყალხსნარ და ორგანულ გამხსნელებს. ტიპიური HPLC ნიმუშის მომზადებისთვის, შპრიცისა და შპრიცული ფილტრები, რომლებიც შეიცავს რეგენერაციულ ცელულოზის მემბრანებს, კარგი ვარიანტია მათი ფართო გამხსნელი თავსებადობის გამო.
ფილტრის მოწყობილობის გამოყენება, რომელიც უფრო დიდია, ვიდრე საჭიროა მოცულობის მომზადებისთვის, კიდევ ერთი ჩვეულებრივი ნაკვეთია. ძალიან დიდი ფილტრის მოწყობილობების გამოყენება ნიშნავს, რომ ნიმუშის მცირე რაოდენობა დარჩება ფილტრში, თუნდაც სიფრთხილის ზომების მიღების შემდეგ, რაც შეიძლება მეტი გაძევებისთვის.
5. რა უპირატესობა აქვს ფილტრაციის ნაბიჯის სერიოზულად გადადგმას?
ლაბორატორიების უმეტესობის ფუნდამენტური მიზანია ანალიტიკური ტესტირებით არის თანმიმდევრული პროცესების შემუშავება, რომლებიც ახდენენ თანმიმდევრულ შედეგებს - და ეს მოითხოვს თანმიმდევრულ ფილტრაციას. ფილტრაციის მოწყობილობის შერჩევა მარჯვენა პორების ზომით და შეკავების მახასიათებლებით, ხელს უწყობს ნაწილაკების ეფექტური ამოღებას, ხოლო ფილტრის ერთეულის შესაბამისი ზომისა და დიზაინის არჩევანს ხელს შეუწყობს ნიმუშის დაკარგვის მინიმუმამდე შემცირებას. კარგი ფილტრაცია ასევე ხელს უწყობს სვეტის დაცვას და პოტენციურად ავრცელებს როგორც ინჟექტორს, ასევე სვეტს.
დასკვნა
HPLC არის ღირებული ტექნიკა ცხოვრებისეული მეცნიერებისა და ბიოფარმაცევტული კვლევისთვის, რადგან ის აწვდის ზუსტ, რეპროდუქციულ შედეგებს. ეს სიზუსტე დამოკიდებულია HPLC ნიმუშის მთლიანობაზე, ხოლო მაღალი ხარისხის ნიმუშების უზრუნველსაყოფად საუკეთესო საშუალებაა საუკეთესო ინსტრუმენტებით დაწყება. ულტრაბგერითი წყლის, სტანდარტული მომზადების, პიპეტების, რჩევების და ფილტრების გადაწყვეტილებებით, HPLC ნიმუშის მოსამზადებელი ხაზი მოიცავს ყველა დეტალს. ავტომატური გადაწყვეტილებები და პროგრამული უზრუნველყოფა ასევე ხელს უწყობს ნიმუშის მომზადების გამარტივებას სუფთა ნიმუშების მიწოდებისთვის სუფთა შედეგებისთვის.
მეტი დისკუსია HPLC ნიმუშის მომზადების გადაწყვეტილებების შესახებ მისასალმებელია!
ინგლისური
ჩინური
