HPLC mėginių paruošimo sprendimai geriausiems rezultatams

Keturi HPLC mėginių paruošimo žingsniai

1 žingsnis. Vandeninių sprendimų analizė

2 žingsnis. Standartų paruošimas

Sudėtinio identifikavimo ir kiekybinio įvertinimo standartų paruošimas gali būti varginantis ir daug laiko reikalaujantis procesas. Tiksliai svėrę kietą medžiagą, kad būtų sunku naudoti iš anksto nustatytą tirpiklio tūrį, o atliekos dėl klaidų gali būti brangiai kainuojanti, ypač dirbant su vaistais. Kiti veiksniai, tokie kaip temperatūra, dar labiau apsunkina standartinį preparatą. Temperatūros svyravimai keičia tirpiklio tankį ir prisideda prie dramatiškų koncentracijos skirtumų.



Naudojant balansą, kuris įgalina svėrimo tikslumą iki kelių dešimtainių vietų ir automatizuojant procesą, susiejant pusiausvyrą su tirpiklio dozatoriumi garantuojant aukščiausią tikslumą. Naudojant tokią programinę įrangą kaip „YAPP16 Dozavimas Q-APP“, įgalina automatinius skaičiavimus ir gravimetrinį išmatuotų verčių stebėjimą. Dokumentuoti tirpiklio temperatūrą ir tankį taip pat užtikrinama labai tiksli koncentracija, ypač ruošiant standartus kitomis dienomis. Tiesioginis duomenų perdavimas iš „YAPP16“ svėrimo programos į „Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2“ chromatografijos duomenų sistemos (CDS) programinę įrangą yra galimybė naudoti be popieriaus duomenų tvarkymo su visu duomenų vientisumu.

3 žingsnis. Grįžkite prie pagrindų, naudodami gerą pipetę

Tikslaus ir tikslaus pipetės svarba per dažnai nepastebima ir laikoma savaime suprantamu dalyku. Vartotojo įgūdžių lygis ir patirtis gali turėti didelę įtaką jautrioms analizėms, tokioms kaip HPLC. Tinkamos pipetės pasirinkimas gali sumažinti žmogaus klaidas ir sušvelnintų tirpiklių sąnaudas.



Mechaninės pipetės su tūrio užraktu siūlo paprastą sprendimą, kaip užkirsti kelią atsitiktiniams tūrio pokyčiams, o sudėtingesnės elektroninės pipetės pašalina vartotojo kintamumą, kad nuosekliai užtikrintų tikslius kiekius. Pipetės patarimas taip pat yra svarbi detalė, kurią reikia atsižvelgti atliekant HPLC analizę. Mažai sulaikymo patarimai yra geriausi dirbant su skirtingų klampių tirpikliais, nes jie maksimaliai padidina mėginių atsigavimą. Mėginio užterštumas taip pat gali atsirasti dėl išplovimo iš pipetės galiuko. Taigi patarimai, turintys didelį cheminį atsparumą, išsaugo mėginio vientisumą.

4 žingsnis. Filtruokite tikslumą ir ilgaamžiškumą

Papildomos atsargos, norint filtruoti mėginius prieš analizę, pagerina patikimumą ir gali prailginti HPLC kolonėlės tarnavimo laiką, užkertant kelią užsikimšimo efektams. Švirkštų filtrai yra paprastas, greitas sprendimas filtruoti mėginius prieš kolonėlės chromatografiją. Kaip ir pipetės galiukuose, tirpikliams, naudojamiems HPLC, reikia konkrečių filtrų, kad būtų išvengta išplovimo ir užteršimo.

Celiuliozės membranos yra atsparios dimetilsulfoksidui (DMSO), amidams, ketonams, esteriams ir eterio junginiams. Ypač atšiauriems tirpikliams nepadengtos poliethersulfono (PTFO) membranos apsaugo nuo išplovimo ir mėginio užteršimo. Mėginio filtravimas tampa labai daug laiko, kai padidėja mėginio skaičius. Kelių mėginių filtravimo įrenginiai, tokie kaip „ClariStep®“ filtravimo sistema, gali apdoroti mėginius be švirkštų ir greitai paruošti mėginius, neprarandant kokybės.

Penkios problemos, kurias reikia atkreipti dėmesį į！

1. Kokios yra didžiausios paruošimo problemos, su kuriomis susiduria laboratorijos?

Laboratorijoms daromas spaudimas dėl laiko ir išlaidų, dažnai susiduria ne tik su dideliu skaičiumi mėginių, bet ir skirtingos prigimties pavyzdžių. Mėginių paruošimas yra sritis, kurioje subtilūs skirtumai tarp mėginių tipų ar naudojamų mėginių paruošimo metodų ir naudojamų medžiagų gali paveikti gautus rezultatus. Užtikrinant filtravimo įrenginio medžiagų suderinamumą ir tirpiklį, galite sumažinti problemas; Pavyzdžiui, ekstrahuojamų junginių, kurie gali trukdyti analitės aptikimui, lygis.

2. Kas nutinka, kai pavyzdys suklysta?

Prieš analitinę didelio našumo skysčių chromatografijos (HPLC) pritaikymą, mėginiai yra paruošti įvairiais metodais, kurie visi gali paveikti analitinius rezultatus, paveikdami sistemą įšvirkščiamą mėginį. Neefektyvus mėginio paruošimas gali sumažinti kolonėlės tarnavimo laiką, padidinti komponentų aptarnavimo reikalavimus, galimą prietaisų prastovą, chromatografinio atskyrimo efektyvumo ir atkuriamumo bei daugelio kitų problemų sumažėjimą.

3. Iš pirmo žvilgsnio filtravimas atrodo kaip paprastas procesas ...

Nors filtravimas yra iš pažiūros maža didelės darbo eigos dalis, tinkamo filtro pasirinkimo tam tikram programai poveikis gali būti didelis. Pvz., Metodai, kurie nepašalina pakankamai kietųjų dalelių, gali sukelti kolonėlės blokavimą. Netinkamas mėginių paruošimo įtaisų pasirinkimas tam tikromis aplinkybėmis į imtį galėtų išleisti ištraukiamus junginius, surišti dominančias analizes arba įvesti klaidas per mėginio praradimą - visa tai daro įtaką stebimų rezultatų kokybei ir atkuriamumui. Jei esate įsitikinę, kad jūsų filtravimo eksploatacinės medžiagos neprisideda prie klaidų, kurioms reikalingi pakartotiniai ar šaknų priežastis, jūs sutaupysite pinigų ir suteiksite sau ramybę.

4. Koks yra labiausiai paplitęs pavyzdys „žlunga“?

Neteisingas filtro membranos pasirinkimas yra viena problema, kurią mes daug matome. Klausimai gali pasirodyti kaip pašalinės ištraukų smailės, kurios gali trukdyti aptikti dominančias analizes. Filtro terpės nesuderinamumas su mėginiu ar tirpikliu cheminio atsparumo atžvilgiu neapsiriboja tik tirpimo poveikiu filtro terpei. Tirpikliai gali sukelti nedidelį polimerinių membranos medžiagų patinimą, kai nėra visiškai suderinami, o tai savo ruožtu gali paveikti filtravimo efektyvumą, dėl kurio neveiksmingai išvalyti mėginius. Vienas iš būdų išspręsti šią problemą yra pasirinkti membraną, kuri iš esmės suderinama tiek su vandeniniais, tiek su organiniais tirpikliais. Tipiškam HPLC mėginio paruošimui, švirkštai ir švirkštai, be švirkštų filtrų, kuriuose yra regeneruotų celiuliozės membranų, yra geras pasirinkimas dėl jų plataus tirpiklio suderinamumo.

Kita įprasta defektas yra naudoti filtro įtaiso, kuris yra didesnis nei reikalingas ruošiamam garsumui, naudojimas. Naudojant per didelius filtrų įtaisus, tai reiškia, kad nedidelis mėginio kiekis liks filtre, net jei bus imtasi atsargumo priemonių, kad būtų kuo daugiau išsiųsti.

5. Kokie yra filtravimo žingsnio vertinimo privalumai rimtai?

Pagrindinis daugumos laboratorijų, užsiimančių analitiniais tyrimais, tikslas yra sukurti nuoseklius procesus, kuriais grindžiami nuoseklūs rezultatai, ir kuriems reikalingas nuoseklus filtravimas. Filtravimo įtaiso, turinčio tinkamą porų dydį ir sulaikymo charakteristikas, pasirinkimas padeda užtikrinti veiksmingą kietųjų dalelių pašalinimą, tuo tarpu tinkamo dydžio ir filtro bloko dydžio pasirinkimas gali padėti sumažinti mėginio praradimą. Geras filtravimas taip pat padeda apsaugoti stulpelį ir potencialiai prailginti tiek injektoriaus, tiek stulpelio eksploatavimo laiką.

Išvada

HPLC yra vertinga gyvybės mokslo ir biofarmacijos tyrimų technika, nes ji pateikia tikslius, atkuriamus rezultatus. Šis tikslumas priklauso nuo HPLC mėginio vientisumo, o geriausias būdas užtikrinti aukštos kokybės pavyzdžius yra pradėti nuo geriausių įrankių. Naudodamiesi ultrapūrinio vandens sprendimais, standartiniu paruošimu, pipetėmis, patarimais ir filtrais, HPLC mėginio paruošimo linija atspindi kiekvieną detalę. Automatizuoti sprendimai ir programinė įranga taip pat padeda supaprastinti mėginių paruošimą, kad būtų galima pateikti švarius pavyzdžius, kad būtų galima atlikti švarius rezultatus.

Sveikinimai daugiau diskusijų apie HPLC mėginių paruošimo sprendimus!