HPLC paraugu sagatavošanas risinājumi labākajiem rezultātiem

Četri soļi HPLC parauga sagatavošanai

1. solis. Ūdens šķīdumu analīze

2. solis. Standartu sagatavošana

Sagatavošana saliktam identifikācijai un kvantitatīvai noteikšanai var būt nogurdinošs un laikietilpīgs process. Precīzi nosvērt cietu, lai būtu grūti izmantot iepriekš noteiktu šķīdinātāja tilpumu, un, strādājot ar farmaceitiskiem līdzekļiem, var būt dārgi, it īpaši, it īpaši, strādājot ar farmaceitiskiem līdzekļiem. Citi faktori, piemēram, temperatūra, vēl vairāk sarežģī standarta sagatavošanu. Temperatūras svārstības maina šķīdinātāja blīvumu un veicina dramatiskas koncentrācijas atšķirības.



Izmantojot līdzsvaru, kas nodrošina svēršanas precizitāti līdz vairākām aiz komata vietām un automatizē procesu, sasaistot līdzsvaru ar šķīdinātāja dozatoru, garantē visaugstāko precizitāti. Izmantojot programmatūru, piemēram, YAPP16 dozēšanas Q-APP, tiek nodrošināti automātiski aprēķini un izmērīto vērtību gravimetriskā uzraudzība. Dokumentēt šķīdinātāja temperatūru un blīvumu arī nodrošina ļoti precīzu koncentrāciju, it īpaši, ja turpmākajās dienās sagatavo standartus. Tiešā datu pārsūtīšana no YAPP16 svēršanas lietojumprogrammas uz Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Hromatogrāfijas datu sistēmas (CDS) programmatūra ir opcija, lai apstrādātu bezpapīru datu apstrādi ar pilnu datu integritāti.

3. solis. Atgriezieties pie pamatiem ar labu pipeti

Precīza un precīza pipetēšanas nozīme pārāk bieži tiek ignorēta un uzskatīta par pašsaprotamu. Lietotāju prasmju līmenim un pieredzei var būt būtiska ietekme uz jutīgām analīzēm, piemēram, HPLC. Pareizās pipetes izvēle var samazināt cilvēku kļūdas un ar to saistītās izšķērdēto šķīdinātāju izmaksas.



Mehāniskās pipetes ar skaļuma bloķēšanu piedāvā vienkāršu risinājumu nejaušu tilpuma izmaiņu novēršanai, savukārt sarežģītākas elektroniskās pipetes novērš lietotāja mainīgumu, lai konsekventi sniegtu precīzus apjomus. Pipetes gals ir arī svarīga detaļa, kas jāņem vērā HPLC analīzēs. Zemi aiztures padomi ir vislabākie, strādājot ar dažādu viskozitātes šķīdinātājiem, jo ​​tie palielina paraugu atjaunošanos. Paraugu piesārņojums var rasties arī izskalošanās rezultātā no pipetes gala. Tādējādi padomi ar augstu ķīmisko izturību saglabā parauga integritāti.

4. solis. Precizitātes un ilgmūžības filtrs

Papildu aprūpe paraugu filtrēšanai pirms analīzes uzlabo uzticamību un var pagarināt HPLC kolonnas kalpošanas laiku, novēršot aizsērēšanas efektus. Šļirces filtri ir vienkāršs, ātrs risinājums paraugu filtrēšanai pirms kolonnu hromatogrāfijas. Tāpat kā ar pipetes padomiem, HPLC izmantotie šķīdinātāji nepieciešami specifiski filtri, lai novērstu izskalošanos un paraugu piesārņojumu.

Celulozes membrānas ir izturīgas pret dimetilsulfoksīdu (DMSO), amīdiem, ketoniem, esteru un ētera savienojumiem. Īpaši skarbiem šķīdinātājiem nesaistītas polietersulfona (PTFO) membrānas novērš izskalošanos un parauga piesārņojumu. Parauga filtrēšana kļūst ļoti laikietilpīga, palielinoties parauga skaitam. Vairāku paraugu filtrēšanas vienības, piemēram, Claristep® filtrēšanas sistēma, var apstrādāt paraugus bez šļircēm un ātru parauga sagatavošanu, neupurējot kvalitāti.

Piecas problēmas, kas jums jāpievērš uzmanība！

1. Kādas ir lielākās paraugu sagatavošanas problēmas, ar kurām saskaras laboratorijas?

Laboratorijas tiek pakļautas pieaugošam spiedienam laika un izmaksu ziņā, bieži nodarbojoties ne tikai ar lielu daudzumu paraugu, bet arī ar atšķirīgu dabas paraugiem. Parauga sagatavošana ir joma, kurā smalkas atšķirības starp paraugu veidiem vai parauga sagatavošanas metodēm un izmantotajiem materiāliem var ietekmēt iegūtos rezultātus. Filtrēšanas ierīces un šķīdinātāja savietojamības nodrošināšana starp materiāliem var samazināt problēmas; Piemēram, ekstrahējamo savienojumu līmeņi, kas varētu traucēt analīta noteikšanu.

2. Kas notiek, kad parauga sagatavošana noiet greizi?

Pirms analītiskās augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas (HPLC) lietojumiem paraugus sagatavo ar dažādām metodēm, un tām visiem ir potenciāls ietekmēt analītiskos rezultātus, ietekmējot sistēmā ievadīto paraugu. Neefektīva parauga sagatavošana var samazināt kolonnu kalpošanas laiku, palielināt pakalpojumu prasības komponentiem, potenciālo instrumentu dīkstāvi, hromatogrāfiskās atdalīšanas efektivitātes un reproducējamības samazināšanos un daudzām citām problēmām.

3. No pirmā acu uzmetiena filtrēšana šķiet vienkāršs process ...

Lai arī filtrēšana ir šķietami maza lielas darbplūsmas sastāvdaļa, pareizā filtra izvēles ietekme uz konkrēto lietojumprogrammu var būt būtiska. Piemēram, metodes, kas nenoņem pietiekamas daļiņas, var izraisīt kolonnu bloķēšanu. Nepiemērota parauga sagatavošanas ierīču izvēle noteiktos apstākļos var izlaist ekstrahējamus savienojumus paraugā, saistīt interesējošo analītus vai ieviest kļūdas, izmantojot izlases zudumus - visi ietekmē novēroto rezultātu kvalitāti un reproducējamību. Ja esat pārliecināts, ka jūsu filtrācijas palīgmateriāli neveicina kļūdas, kurām nepieciešama pārstrāde vai sakņu cēloņu izmeklēšana, jūs ietaupīsit naudu un piešķirsit sev mieru.

4. Kādas ir visizplatītākās parauga sagatavošanās “neizdodas”?

Nepareiza filtra membrānas izvēle ir viena no problēmām, kuras mēs redzam daudz. Problēmas var parādīties kā ekstrahējamo izstrādājumu svešās virsotnes, kas var traucēt interešu analītu noteikšanu. Filtra barotnes nesaderība ar paraugu vai šķīdinātāju ķīmiskās pretestības izteiksmē nav ierobežota tikai ar izšķīšanas efektu filtra vidē. Šķīdinātāji var izraisīt nelielu polimēru membrānas materiālu pietūkumu, ja tie nav pilnībā saderīgi, un tas savukārt var ietekmēt filtrēšanas veiktspēju, izraisot neefektīvu paraugu tīrīšanu. Viens veids, kā risināt šo jautājumu, ir izvēlēties membrānu, kas ir plaši savietojama gan ar ūdens, gan organiskiem šķīdinātājiem. Tipiskai HPLC parauga sagatavošanai šļirces un bez šļircīgas filtri, kas satur reģenerētas celulozes membrānas, ir laba iespēja, jo to ir plaša šķīdinātāja savietojamība.

Vēl viena izplatīta kļūme ir filtra ierīces izmantošana, kas ir lielāka, nekā nepieciešama sagatavotajam skaļumam. Pārāk lielāku filtru ierīču izmantošana nozīmē, ka neliels parauga daudzums paliks filtrā, pat pēc tam, kad tiks veikti piesardzības pasākumi, lai pēc iespējas vairāk izvadītu.

5. Kādas ir priekšrocības, kas saistītas ar filtrēšanas soli nopietni?

Lielākajai daļai laboratoriju, kas nodarbojas ar analītisko pārbaudi, būtisks mērķis ir attīstīt konsekventus procesus, kas ir konsekventu rezultātu pamatā, un kuriem nepieciešama konsekventa filtrēšana. Filtrēšanas ierīces izvēle ar pareizo poru lielumu un aiztures raksturlielumiem palīdz nodrošināt efektīvu daļiņu noņemšanu, savukārt piemērota izmēra un filtra vienības dizaina izvēle var palīdzēt samazināt parauga zudumu. Laba filtrēšana arī palīdz aizsargāt kolonnu un potenciāli paplašina gan inžektora, gan kolonnas kalpošanas laiku.

Secinājums

HPLC ir vērtīgs dzīvības zinātnes un biofarmaceitisko pētījumu paņēmiens, jo tas sniedz precīzus, reproducējamus rezultātus. Šī precizitāte ir atkarīga no HPLC parauga integritātes, un labākais veids, kā nodrošināt augstas kvalitātes paraugus, ir sākt ar labākajiem rīkiem. Izmantojot šķīdumus ulapurīgam ūdenim, standarta sagatavošanai, pipetēm, padomiem un filtriem, HPLC parauga sagatavošanas līnija atspoguļo katru detaļu. Automatizēti risinājumi un programmatūra arī palīdz pilnveidot paraugu sagatavošanu, lai nodrošinātu tīrus paraugus tīriem rezultātiem.

Tiek gaidītas vairāk diskusiju par HPLC paraugu sagatavošanas risinājumiem!