Kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC) adalah teknik analisis utama yang digunakan dalam makmal dalam bidang yang pelbagai seperti farmaseutikal, sains alam sekitar, dan keselamatan makanan. Di dalam dunia HPLC, terdapat dua kategori utama: HPLC analitik dan HPLC preparatif. Walaupun kedua -dua teknik menggunakan prinsip yang sama untuk memisahkan sebatian, ia digunakan untuk tujuan yang berbeza dan mempunyai parameter operasi yang berbeza. Blog ini akan meneroka perbezaan antara HPLC analitik dan preparatif, termasuk tujuan, skala operasi, peralatan, dan aplikasi mereka.
Ingin mengetahui maklumat penuh mengenai vial HPLC, sila periksa artikel ini: Ensiklopedia Vial HPLC
Memahami HPLC analitik
Definisi dan tujuan
HPLC analisis memberi tumpuan terutamanya kepada pemisahan dan mengenal pasti sebatian dalam sampel. Matlamat utama adalah untuk mendapatkan maklumat kualitatif dan kuantitatif mengenai komponen yang terdapat dalam campuran. HPLC analisis sering digunakan untuk:
Analisis kualitatif: Mengenal pasti komponen sampel.
Analisis kuantitatif: Menentukan kepekatan sebatian tertentu dalam sampel.
Skala operasi
HPLC analisis beroperasi pada skala yang lebih kecil, biasanya melibatkan suntikan sampel microliter. Jumlah yang digunakan biasanya dalam julat 1 hingga 100 μl, yang membolehkan beberapa sampel dianalisis dalam satu larian. Skala kecil ini sesuai untuk ujian rutin dan kawalan kualiti.
Saiz lajur dan saiz zarah
Lajur yang digunakan dalam HPLC analitik biasanya diameter kecil, biasanya sekitar 4.6 mm, dan dibungkus dengan zarah fasa pegun kecil (3-5 μm). Konfigurasi ini membolehkan resolusi tinggi dan pemisahan kompaun yang cekap, sesuai untuk analisis terperinci.
Kaedah pengesanan
HPLC analisis menggunakan pelbagai kaedah pengesanan, termasuk UV-Visible, Fluorescence, dan Spectrometry Massa. Pilihan pengesan bergantung kepada sifat analit dan keperluan khusus analisis. Pengesan yang tidak merosakkan sering digunakan untuk memastikan sampel dapat dianalisis tanpa kerugian yang besar.
Ingin mengetahui 50 jawapan mengenai vial HPLC, sila periksa artikel ini: 50 soalan paling kerap ditanya mengenai botol HPLC
Memahami HPLC persediaan
Definisi dan tujuan
HPLC preparatif, sebaliknya, bertujuan untuk memisahkan dan membersihkan sebatian tertentu dari campuran. Matlamat utama adalah untuk mengasingkan kuantiti yang mencukupi bagi kompaun sasaran untuk analisis atau penggunaan selanjutnya. Preparatif
HPLC biasanya digunakan untuk aplikasi berikut:
Pengasingan kompaun: Pengekstrakan dan pemurnian sebatian khusus untuk aplikasi penyelidikan atau perindustrian.
Penyediaan sampel: Penyediaan sampel untuk analisis atau perumusan berikutnya.
Skala operasi
HPLC preparatif dilakukan pada skala yang lebih besar daripada HPLC analisis. Jilid sampel boleh berkisar dari beberapa mililiter hingga beberapa liter, bergantung kepada hasil yang diharapkan dari kompaun sasaran. Skala yang lebih besar ini membolehkan kuantiti yang mencukupi bahan yang disucikan untuk dikumpulkan untuk kegunaan selanjutnya.
Saiz lajur dan saiz zarah
Lajur yang digunakan untuk HPLC preparatif jauh lebih besar, biasanya antara 20 mm hingga 100 mm atau lebih besar diameter. Lajur dibungkus dengan zarah fasa pegun yang lebih besar (biasanya 10-20 μm) untuk meningkatkan kadar aliran dan menampung jumlah sampel yang lebih besar. Reka bentuk ini membantu mengurangkan tekanan belakang dan mencapai pemisahan sebatian yang cekap.
Kaedah pengesanan
Dalam HPLC preparatif, kaedah pengesanan mungkin berbeza daripada yang digunakan dalam HPLC analisis. Walaupun pengesan yang tidak merosakkan masih biasa, sistem persediaan sering menggunakan pengesan yang mampu mengumpul pecahan berdasarkan profil elusi. Ini membolehkan sebatian khusus untuk diasingkan kerana mereka elute dari lajur.
Ingin mengetahui lebih lanjut mengenai aplikasi botol kromatografi, sila periksa artikel ini:Lima kaedah pembersihan untuk botol HPLC
Perbezaan utama antara HPLC analitik dan preparatif
|
Ciri
|
HPLC analisis
|
HPLC persediaan
|
|
Tujuan
|
Analisis kualitatif dan kuantitatif
|
Pengasingan dan pemurnian sebatian
|
|
Skala operasi
|
Skala kecil (μl volum)
|
Skala besar (ml hingga l volum)
|
|
Dimensi lajur
|
Diameter yang lebih kecil (4.6 mm)
|
Diameter yang lebih besar (20-100 mm)
|
|
Saiz zarah
|
Zarah yang lebih kecil (3-5 μm)
|
Zarah yang lebih besar (10-20 μm)
|
|
Kadar aliran
|
Kadar aliran yang lebih rendah (0.1-5 ml \ / min)
|
Kadar aliran yang lebih tinggi (10-200 ml \ / min)
|
|
Kaedah pengesanan
|
Pengesan tidak merosakkan (UV, MS)
|
Koleksi pecahan berdasarkan profil elusi
|
Memilih antara HPLC analitik dan preparatif
Apabila memilih antara HPLC analitik dan preparatif, pertimbangkan faktor berikut:
Tujuan analisis: Tentukan sama ada matlamat utama adalah untuk menganalisis sebatian secara kualitatif dan kuantitatif atau untuk mengasingkan sebatian khusus untuk kegunaan selanjutnya.
Jumlah sampel: Menilai jumlah sampel yang ada. Jika sedikit sampel tersedia, HPLC analitik mungkin lebih sesuai. Sebaliknya, jika sejumlah besar sampel diperlukan, HPLC preparatif adalah pilihan yang lebih baik.
Kesucian dan hasil yang diperlukan: Pertimbangkan kesucian dan hasil kompaun sasaran yang diperlukan. HPLC preparatif bertujuan untuk memaksimumkan pemulihan sebatian tertentu, sementara HPLC analisis memberi tumpuan kepada menyediakan maklumat terperinci mengenai komposisi sampel.
Sumber dan peralatan: Menilai sumber yang ada, termasuk peralatan dan belanjawan. Sistem HPLC preparatif cenderung lebih mahal dan memerlukan lebih banyak pelaburan dalam peralatan dan kos operasi.
Berminat untuk menguasai penyediaan sampel HPLC? Lihat artikel ini:Penyediaan Penyediaan Sampel HPLC untuk hasil terbaik.
Kesimpulan
Kedua -dua HPLC analitik dan preparatif adalah teknik yang berharga dalam bidang kromatografi, dan masing -masing mempunyai kegunaan yang berbeza bergantung kepada keperluan penyelidik dan industri. Walaupun HPLC analisis sesuai untuk analisis terperinci dan kuantifikasi sebatian, HPLC preparatif adalah penting untuk mengasingkan dan membersihkan sebatian khusus untuk aplikasi selanjutnya. Memahami perbezaan antara kedua -dua teknik ini akan membantu penyelidik membuat keputusan yang tepat, mengoptimumkan aliran kerja mereka, dan mendapatkan hasil yang tepat dan boleh dipercayai dalam analisis mereka. Memandangkan teknologi HPLC terus maju, kedua -dua kaedah analisis dan preparatif akan kekal sebagai sebahagian daripada penyelidikan saintifik yang berjaya.
Bahasa Inggeris
Cina
