Alles wat u moet weten over HPLC -monsterbereiding

Voorbereiding van het monster is om een ​​aantal redenen een cruciale stap in HPLC -analyse.

Minimaliseer interferenties:Monsters bevatten vaak onzuiverheden en matrixcomponenten die de detectie van doelanalyten kunnen verstoren. Effectieve monsterbereidingstechnieken kunnen helpen deze ongewenste stoffen te verwijderen en de analytische nauwkeurigheid te verbeteren.

Analytherstel verbeteren:De juiste voorbereiding verbetert het herstel van analyt en zorgt ervoor dat resultaten de werkelijke concentratie van het oorspronkelijke monster weerspiegelen. Dit is vooral belangrijk voor sporenanalyse waarbij analyten aanwezig zijn bij lage concentraties.

Verbeterde piekvorm:Goed voorbereide monsters helpen symmetrische en goed gedefinieerde pieken in het chromatogram te vormen. Dit is essentieel voor nauwkeurige kwantificering. Onjuiste monstervoorbereiding kan leiden tot piekstaart en verbreding, wat de interpretatie van gegevens bemoeilijkt.

Bescherm uw HPLC -systeem:Verontreinigingen in uw monster kunnen kolommen en andere componenten in uw HPLC -systeem beschadigen, wat leidt tot verhoogde onderhoudskosten en downtime. De juiste monsterbereiding vermindert het risico op verstopping en slijtage van het systeem.

De eerste stap in monsterbereiding is om uw monster correct te verzamelen. Dit omvat:

Gebruik schone containers:Gebruik altijd schone, inerte containers om besmetting te voorkomen. Glazen of hoogwaardige plastic containers worden aanbevolen.

Vermijd besmetting:Gebruik handschoenen en schoon gereedschap om te voorkomen dat besmetting door talg en andere bronnen is.

Juiste labeling:Label monsters duidelijk om mix-ups te voorkomen en traceerbaarheid te garanderen.

Monsterhomogenisatie zorgt voor homogeniteit, wat belangrijk is voor reproduceerbare resultaten. Homogenisatietechnieken omvatten:

Mechanische homogenisatie: het mengen van vaste of semi-vaste monsters met behulp van een roerder of homogenisator.

Ultrasone homogenisatie:Toepassing van echografie om deeltjes binnen een vloeibaar monster te verspreiden.

Afhankelijk van de verwachte concentratie van analyten moeten monsters mogelijk worden verdund of geconcentreerd worden verdund. Dit kan worden bereikt door:

Verdunning:Verdun het monster naar de gewenste concentratie met behulp van hetzelfde oplosmiddel als de mobiele fase.

Concentratie:Analyten kunnen worden geconcentreerd met behulp van technieken zoals verdamping of vaste fase -extractie (SPE).

Filtratie is essentieel om deeltjes te verwijderen die HPLC -kolommen kunnen verstoppen. Veel voorkomende filtermethoden zijn ：

Membraanfiltratie:Gebruik0,2 µm of 0,45 µm filtersom deeltjes te verwijderen. Typisch worden polyethersulfon (PES) of nylonfilters gebruikt.

Prefiltratie:Voor monsters met een hoog deeltjesgehalte kan prefiltratie door een groter poriegroottefilter verstopping voorkomen.


50 veelgestelde vragen over spuitfilters, zorg ervoor dat je dit informatieve artikel bekijkt: Het onderwerp van "spuitfilter" 50 veelgestelde vragen

Overweeg het stabiliseren van uw monster om afbraak van de analyt te voorkomen.

PH -aanpassing:Het aanpassen van de pH kan helpen bepaalde analyten te stabiliseren. Zure verbindingen kunnen bijvoorbeeld verzuring vereisen om afbraak te voorkomen.

Additieven:Het toevoegen van stabilisatoren of conserveermiddelen kan helpen bij het handhaven van de steekproefintegriteit tijdens opslag en analyse.

Het is belangrijk om het juiste oplosmiddel te selecteren om uw monster op te lossen en te zorgen voor compatibiliteit met uw HPLC -systeem. Overweeg het volgende:

Oplosmiddel polariteit:Om volledige oplossing te bereiken, moet het oplosmiddel overeenkomen met de polariteit van de analyt.

Compatibiliteit met mobiele fase: Gebruik een oplosmiddel dat compatibel is met de mobiele fase om potentiële interferenties te minimaliseren.

7. Voorbereiding van normen

Bereiding van kalibratienormen is essentieel om een ​​analyt in een monster te kwantificeren. Dit omvat:

Bereiding van kalibratiecurve:Bereid een reeks bekende concentraties van de analyt voor om een ​​kalibratiecurve op te zetten voor kwantificering.

Gebruik hetzelfde oplosmiddel:Om de consistentie te behouden, bereid je je normen altijd voor met hetzelfde oplosmiddel en voorwaarden als je monsters.

Volg standaard operationele procedures (SOP's):Stel en houd zich aan SOP's voor monsterbereiding om consistentie en reproduceerbaarheid te waarborgen.

Gebruik hoogwaardige reagentia en oplosmiddelen:Gebruik altijd HPLC-grade oplosmiddelen en hoge-zuiverheidsreagentia om verontreiniging te minimaliseren.

Houd uw werkruimte schoon:Houd uw monsterbereidingsgebied schoon en georganiseerd om het risico op besmetting te verminderen.

Alles documenteren:Houd gedetailleerde gegevens bij van uw monstervoorbereidingsprocedures, inclusief eventuele afwijkingen van standaardprotocollen.

Methoden valideren:Valideer regelmatig monsterbereidingsmethoden om ervoor te zorgen dat ze betrouwbare en reproduceerbare resultaten opleveren.

Slechte piekvorm:Als pieken breed of staart zijn, kan dit wijzen op onvolledige oplossing of de aanwezigheid van deeltjes. Zorg ervoor dat uw monster grondig wordt gemengd en gefilterd.

Ghost Peaks:Ghost-pieken kunnen worden veroorzaakt door onzuiverheden in het oplosmiddel of het monster, gebruiken hoge zuivere oplosmiddelen en zorgen ervoor dat alle glaswerk en apparatuur schoon zijn.

Lage gevoeligheid:Als de gevoeligheid laag is, overweeg dan om uw extractiemethode te optimaliseren of de concentratie van uw analyt te verhogen.

Kolom verstopt:Frequent verstopping kan erop wijzen dat uw monster te veel deeltjes bevat of niet voldoende wordt gefilterd. Evalueer uw filtratieproces opnieuw en overweeg pre-filtratie.

Inconsistente resultaten:Variatie in resultaten kan voortkomen uit inconsistente monsterbereiding. Standaardiseer alle procedures en zorg ervoor dat personeel dat betrokken is bij de voorbereiding van het monster correct is opgeleid.

Naarmate de analytische eisen toenemen, nemen laboratoria meer geavanceerde steekproefvoorbereidingstechnieken aan om de efficiëntie en nauwkeurigheid te verbeteren:

SPE is een veelgebruikte techniek die de selectieve extractie van analyten uit complexe matrices mogelijk maakt. Het gaat om het passeren van een vloeibaar monster door een vast adsorberend materiaal dat de doelanalt behoudt en tegelijkertijd onzuiverheden kan passeren.

LLE is een techniek die analyten scheidt op basis van hun oplosbaarheid in twee niet -mengbare vloeistoffen. Deze methode is effectief bij het scheiden van verbindingen met verschillende polariteiten en wordt vaak gebruikt in milieu- en farmaceutische analyse.

Quechers is een populaire methode voor het bereiden van voedsel- en omgevingsmonsters die de extractie- en opruimingsstappen in één proces combineren, waardoor het efficiënt en kosteneffectief is.

Doorvoer en reproduceerbaarheid kunnen aanzienlijk worden verbeterd door geautomatiseerde monsterbereidingssystemen, die taken kunnen uitvoeren zoals verdunning, filtratie en SPE met minimale menselijke interventie, waardoor het risico op fouten wordt verminderd.


Wilt u meer weten over HPLC -voorbeeldvoorbereiding, kijk dan op dit artikel: HPLC Sample Preparation Solutions voor de beste resultaten

HPLC -monsterbereiding is een cruciale stap die de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van analytische resultaten aanzienlijk kan beïnvloeden. Door best practices te volgen, met behulp van geschikte technieken en het aanpakken van gemeenschappelijke problemen, kunnen laboratoria het monsterbereidingsproces optimaliseren door geavanceerde technieken en technologieën toe te passen naarmate analytische behoeften evolueren. Automatisering zal de efficiëntie en effectiviteit van HPLC -analyses verder verbeteren. Juiste monsterbereiding verbetert niet alleen de kwaliteit van de resultaten, maar beschermt ook het HPLC-systeem, waardoor de betrouwbaarheid en prestaties op lange termijn worden gewaarborgd.