HPLC prøveforberedelsesløsninger for best resultat

Fire trinn for HPLC prøveforberedelse

Trinn 1. Analyse av vandige oppløsninger

Trinn 2. Utarbeidelse av standarder

Å utarbeide standarder for identifisering og kvantifisering av sammensatt kan være en kjedelig og tidkrevende prosess. Det er vanskelig å veie et fast stoff nøyaktig slik at et forhåndsdefinert volum av løsningsmiddel kan brukes, og avfall på grunn av feil kan være kostbart - spesielt når du arbeider med legemidler. Andre faktorer som temperatur kompliserer standardforberedelse ytterligere. Temperatursvingninger endrer løsningsmiddeletettheten og bidrar til dramatiske forskjeller i konsentrasjon.



Å bruke en balanse som muliggjør en veiingsnøyaktighet opp til flere desimaler og automatisering av prosessen ved å koble balansen til et løsningsmiddeldispenser garanterer den høyeste presisjonen. Ved å bruke programvare som YAPP16 dosering Q-APP muliggjør automatiske beregninger og gravimetrisk overvåking av målte verdier. Å dokumentere temperaturen og tettheten til løsningsmidlet sikrer også svært nøyaktige konsentrasjoner, spesielt når du utarbeider standarder på påfølgende dager. Direkte dataoverføring fra YAPP16 veieapplikasjonen til Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) -programvare er et alternativ for papirløs datahåndtering med full dataintegritet.

Trinn 3. Kom tilbake til det grunnleggende med god pipetting

Betydningen av nøyaktig og presis pipettering blir for ofte oversett og tatt for gitt. Brukerferdighetsnivået og erfaringen kan ha betydelige implikasjoner for sensitive analyser som HPLC. Å velge riktig pipette kan redusere menneskelig feil og de tilhørende kostnadene for bortkastede løsningsmidler.



Mekaniske pipetter med volumlås tilbyr en enkel løsning for å forhindre tilfeldige volumendringer, mens mer sofistikerte elektroniske pipetter eliminerer brukervariabiliteten for konsekvent å levere presise volumer. Pipettspissen er også en viktig detalj å vurdere for HPLC -analyser. Tips med lav oppbevaring er best når du jobber med løsningsmidler med forskjellige viskositeter, da de maksimerer utvinning av prøven. Prøveforurensning kan også oppstå som et resultat av utvasking fra pipettspissen. Som sådan bevar tips med høy kjemisk resistens integritet.

Trinn 4. Filter for nøyaktighet og lang levetid

Å ta ekstra forsiktighet for å filtrere prøver før analyse forbedrer påliteligheten og kan forlenge levetiden til HPLC -kolonnen ved å forhindre tilstoppingseffekter. Sprøytefiltre er en enkel, rask løsning for å filtrere prøver før kolonnekromatografi. Som med pipettspisser, krever løsningsmidlene som brukes i HPLC spesifikke filtre for å forhindre utvasking og prøvekontaminering.

Cellulosemembraner er resistente mot dimetylsulfoksyd (DMSO), amider, ketoner, ester og eterforbindelser. For spesielt tøffe løsningsmidler forhindrer ikke -belagte polyethersulfone (PTFO) membraner utvasking og prøvekontaminering. Prøvefiltrering blir veldig tidkrevende når prøvetallet øker. Filtreringsenheter med flere prøve, for eksempel Claristep®-filtreringssystemet, kan behandle prøver uten sprøyter og hurtigspor-prøveforberedelse uten å ofre kvalitet.

Fem problemer du trenger å ta hensyn til！

1. Hva er de største prøveforberedelsesproblemene som laboratorier står overfor?

Laboratorier er under økende press når det gjelder tid og kostnader, og handler ofte ikke bare med høyt antall prøver, men også prøver av varierende natur. Prøveforberedelse er et område der subtile forskjeller mellom prøvetyper eller prøveforberedelsesmetoder og materialer som brukes, kan påvirke resultatene som er oppnådd. Å sikre kompatibilitet mellom materialene i filtreringsenheten og løsningsmidlet kan minimere problemer; For eksempel nivåene av ekstraherbare forbindelser som kan forstyrre analytdeteksjon.

2. Hva skjer når prøveforberedelse går galt?

Før analytiske høyytelsesvæskekromatografi (HPLC) applikasjoner, blir prøver fremstilt ved en rekke metoder, som alle har potensial til å påvirke analytiske resultater ved å påvirke prøven som er injisert i systemet. Ineffektiv prøveforberedelse kan føre til reduksjon i kolonnens levetid, økte tjenestekrav for komponenter, potensiell driftsstans for instrumentering, reduksjon i kromatografisk separasjonseffektivitet og reproduserbarhet og mange andre problemer.

3. Ved første øyekast virker filtrering som en enkel prosess ...

Selv om filtrering er en tilsynelatende liten del av en stor arbeidsflyt, kan virkningen av å velge riktig filter for en gitt applikasjon være betydelig. For eksempel kan metoder som ikke fjerner tilstrekkelig svevestøv, føre til kolonneblokkering. Upassende valg av prøveforberedelsesenheter kan under visse omstendigheter frigjøre ekstraherbare forbindelser i prøven, binde analyser av interesse eller innføre feil gjennom prøvetap - alt påvirker kvaliteten og reproduserbarheten til de observerte resultatene. Hvis du er trygg på at forbruksvarer med filtrering ikke bidrar til feil som krever omarbeid eller etterforskning av rotårsaken, vil du spare penger og gi deg selv trygghet.

4. Hva er den vanligste prøveforberedelsen ‘mislykkes’?

Feil filtermembranvalg er ett problem vi ser mye. Problemer kan fremstå som fremmede topper fra utvinnbare stoffer, noe som kan forstyrre påvisning av analyser av interesse. Inkompatibiliteten til filtermedier med en prøve eller løsningsmiddel når det gjelder kjemisk motstand er ikke bare begrenset til oppløsningseffekter på filtermediet. Oppløsningsmidler kan forårsake svak hevelse av polymermembranmaterialer når de ikke er fullt kompatible, noe som igjen kan påvirke filtreringsytelsen, noe som fører til ineffektiv opprydding av prøver. En måte å løse dette problemet er ved å velge en membran som er stort sett kompatibel med både vandige og organiske løsningsmidler. For typisk HPLC -prøveforberedelse er sprøyte- og sprøyteløse filtre som inneholder regenererte cellulosemembraner et godt alternativ på grunn av deres brede løsningsmiddelkompatibilitet.

Bruken av en filterenhet som er større enn nødvendig for at volumet blir utarbeidet er en annen vanlig fallgruve. Bruken av for store filterenheter betyr at små mengder av prøven vil forbli i filteret, selv etter at det er tatt forholdsregler for å utvise så mye som mulig.

5. Hva er fordelene ved å ta filtreringstrinnet på alvor?

Et grunnleggende mål for de fleste laboratorier som er engasjert i analytisk testing, er å utvikle konsistente prosesser som understøtter konsistente resultater - og som krever jevn filtrering. Valget av en filtreringsanordning med riktig porestørrelse og retensjonsegenskaper bidrar til å sikre effektiv partikkelfjerning, mens valget av passende størrelse og utforming av filterenhet kan bidra til å minimere tapet av prøvene. God filtrering hjelper også til å beskytte kolonnen og utvider potensielt levetiden til både injektoren og kolonnen.

Konklusjon

HPLC er en verdifull teknikk for livsvitenskap og biofarmasøytisk forskning da den leverer nøyaktige, reproduserbare resultater. Denne nøyaktigheten avhenger av integriteten til HPLC-prøven, og den beste måten å sikre at prøver av høy kvalitet er å starte med de beste verktøyene. Med løsninger for ultrapurvann, standardforberedelse, pipetter, tips og filtre, står HPLC -prøveforberedelseslinjen for hver detalj. Automatiserte løsninger og programvare er også med på å effektivisere prøveforberedelse for å levere rene prøver for rene resultater.

Flere diskusjoner om HPLC -prøveforberedelsesløsninger er velkomne!