Soluții de pregătire a eșantionului HPLC pentru cele mai bune rezultate

Patru pași pentru pregătirea eșantionului HPLC

Pasul 1. Analiza soluțiilor apoase

Pasul 2. Pregătirea standardelor

Pregătirea standardelor pentru identificarea și cuantificarea compusului poate fi un proces obositor și consumator de timp. Cântarea precisă a unui solid, astfel încât poate fi utilizat un volum predefinit de solvent să fie dificil, iar deșeurile din cauza erorii pot fi costisitoare - mai ales atunci când lucrați cu farmaceutice. Alți factori, cum ar fi temperatura, complică și mai mult pregătirea standard. Fluctuațiile de temperatură modifică densitatea solventului și contribuie la diferențe dramatice de concentrație.



Utilizarea unui echilibru care permite o precizie de cântărire până la mai multe zecimale și automatizarea procesului prin conectarea echilibrului cu un distribuitor de solvent garantează cea mai mare precizie. Utilizarea unui software precum YAPP16 dozarea Q-APL permite calcule automate și monitorizarea gravimetrică a valorilor măsurate. Documentarea temperaturii și densității solventului asigură, de asemenea, concentrații extrem de precise, în special atunci când se pregătește standardele în zilele următoare. Transferul direct de date de la aplicația de cântărire YAPP16 către software -ul Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Sistem de date de cromatografie (CDS) este o opțiune pentru gestionarea datelor fără hârtie cu integritatea completă a datelor.

Pasul 3. Reveniți la elementele de bază cu o pipetare bună

Importanța pipetării precise și precise este prea des trecută cu vederea și luată de la sine. Nivelul și experiența utilizatorului pot avea implicații semnificative pentru analize sensibile precum HPLC. Alegerea pipetei potrivite poate reduce eroarea umană și costurile asociate ale solvenților irosiți.



Pipetele mecanice cu o blocare a volumului oferă o soluție simplă pentru prevenirea modificărilor de volum accidentale, în timp ce pipetele electronice mai sofisticate elimină variabilitatea utilizatorului pentru a oferi constant volume precise. Sfatul pipetei este, de asemenea, un detaliu important de luat în considerare pentru analizele HPLC. Sfaturile scăzute de retenție sunt cele mai bune atunci când lucrați cu solvenți de vâscozități diferite, deoarece maximizează recuperarea eșantionului. Contaminarea eșantionului poate apărea, de asemenea, ca urmare a scurgerii din vârful pipetei. Ca atare, sfaturi cu rezistență chimică ridicată păstrează integritatea probei.

Pasul 4. Filtru pentru precizie și longevitate

A lua îngrijiri suplimentare la eșantioanele de filtrare înainte de analiză îmbunătățește fiabilitatea și poate prelungi durata de viață a coloanei HPLC prin prevenirea efectelor înfundate. Filtrele de seringă sunt o soluție simplă, rapidă, pentru filtrarea probelor înainte de cromatografia pe coloană. Ca și în cazul sfaturilor de pipetă, solvenții folosiți în HPLC necesită filtre specifice pentru a preveni scurgerea și contaminarea eșantionului.

Membranele de celuloză sunt rezistente la dimetil sulfoxid (DMSO), amide, cetone, ester și compuși eter. Pentru solvenți mai ales dure, membranele polietersulfone (PTFO) neacoperite previn scurgerea și contaminarea eșantionului. Filtrarea eșantionului devine foarte mult timp atunci când numărul eșantionului crește. Unitățile de filtrare cu mai multe eșantioane, cum ar fi sistemul de filtrare Claristep®, pot prelucra probe fără seringi și pregătirea eșantionului rapid fără a sacrifica calitatea.

Cinci probleme pe care trebuie să le acordați atenție！

1. Care sunt cele mai mari probleme de pregătire a eșantionului cu care se confruntă laboratoarele?

Laboratoarele sunt sub presiune din ce în ce mai mare din punct de vedere al timpului și al costurilor, adesea trațând nu numai cu un număr mare de eșantioane, ci și eșantioane de naturi diferite. Pregătirea eșantionului este o zonă în care diferențele subtile între tipurile de eșantion sau metodele de pregătire a eșantionului și materialele utilizate pot afecta rezultatele obținute. Asigurarea compatibilității între materialele din dispozitivul de filtrare și solvent poate minimiza problemele; De exemplu, nivelurile de compuși extractibili care ar putea interfera cu detectarea analitelor.

2. Ce se întâmplă când prepararea eșantionului nu merge greșit?

Înainte de aplicațiile analitice de cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), eșantioanele sunt preparate printr-o varietate de metode, toate având potențialul de a influența rezultatele analitice prin afectarea eșantionului injectat în sistem. Pregătirea ineficientă a eșantionului poate duce la o reducere a duratei de viață a coloanelor, la cerințele de serviciu sporite pentru componente, timpul de oprire potențială de instrumentare, reducerea eficienței și reproductibilității de separare cromatografică și a multor alte probleme.

3. La prima vedere, filtrarea pare un proces simplu ...

Deși filtrarea este o parte aparent mică a unui flux mare de lucru, impactul alegerii filtrului potrivit pentru o anumită aplicație poate fi substanțial. De exemplu, metodele care nu elimină suficientă particule pot duce la blocarea coloanelor. Alegerea necorespunzătoare a dispozitivelor de preparare a eșantionului ar putea, în anumite circumstanțe, să elibereze compuși extractibili în eșantion, să lege analii de interes sau să introducă erori prin pierderea eșantionului - toate influențând calitatea și reproductibilitatea rezultatelor observate. Dacă sunteți sigur că consumabilele dvs. de filtrare nu contribuie la erori care necesită reelaborare sau investigații pentru cauză rădăcină, veți economisi bani și vă veți oferi liniște sufletească.

4. Care sunt cele mai frecvente preparate de eșantion „eșuează”?

Alegerea incorectă a membranei de filtrare este o problemă pe care o vedem foarte mult. Problemele pot apărea ca vârfuri străine din extractabile, care pot interfera cu detectarea analitelor de interes. Incompatibilitatea mediilor de filtrare cu un eșantion sau solvent în ceea ce privește rezistența chimică nu se limitează doar la efectele de dizolvare asupra mediilor de filtrare. Solvenții pot provoca o umflare ușoară a materialelor cu membrană polimerică atunci când nu sunt complet compatibile, ceea ce la rândul său poate afecta performanța de filtrare, ceea ce duce la curățarea ineficientă a probelor. O modalitate de a aborda această problemă este prin alegerea unei membrane care este în general compatibilă atât cu solvenții apoși, cât și cu cele organice. Pentru prepararea tipică a eșantionului HPLC, filtrele de seringă și sering fără sering care conțin membrane de celuloză regenerate sunt o opțiune bună datorită compatibilității lor largi de solvent.

Utilizarea unui dispozitiv de filtru care este mai mare decât este necesar pentru volumul pregătit este o altă capcană comună. Utilizarea dispozitivelor de filtrare prea mari înseamnă că cantitățile mici din eșantion vor rămâne în filtru, chiar și după ce sunt luate măsuri de precauție pentru a expulza cât mai mult.

5. Care sunt avantajele luate în serios pasul de filtrare?

Un obiectiv fundamental al majorității laboratoarelor angajate în testarea analitică este dezvoltarea de procese consistente care stau la baza rezultatelor consistente - și care necesită o filtrare constantă. Selectarea unui dispozitiv de filtrare cu dimensiunea poriului și caracteristicile potrivite de retenție ajută la asigurarea eficientă a particulelor, în timp ce alegerea dimensiunii și proiectării adecvate a unității de filtrare poate ajuta la reducerea pierderii eșantionului. O bună filtrare ajută, de asemenea, la protejarea coloanei și extinde potențial durata de viață atât a injectorului, cât și a coloanei.

Concluzie

HPLC este o tehnică valoroasă pentru știința vieții și cercetarea biofarmaceutică, deoarece oferă rezultate exacte și reproductibile. Această precizie depinde de integritatea eșantionului HPLC, iar cea mai bună modalitate de a vă asigura probe de înaltă calitate este să începeți cu cele mai bune instrumente. Cu soluții pentru apă ultrapură, preparare standard, pipete, sfaturi și filtre, linia de preparare a eșantionului HPLC reprezintă fiecare detaliu. Soluțiile automate și software -ul ajută, de asemenea, la eficientizarea pregătirii eșantionului pentru a furniza probe curate pentru rezultate curate.

Mai multe discuții despre soluțiile de pregătire a eșantionului HPLC sunt binevenite!