Riešenia prípravy vzorky HPLC pre najlepšie výsledky

Štyri kroky pre prípravu vzorky HPLC

Krok 1. Analýza vodných roztokov

Krok 2. Príprava štandardov

Príprava štandardov na identifikáciu a kvantifikáciu zloženia môže byť únavným a časovo náročným procesom. Presné zváženie tuhej látky, aby sa mohol použiť preddefinovaný objem rozpúšťadla, je ťažký a odpad z dôvodu chýb môže byť nákladný - najmä pri práci s farmaceutickými výrobkami. Ostatné faktory, ako napríklad teplota, ďalej komplikujú štandardnú prípravu. Kolísanie teploty menia hustotu rozpúšťadla a prispievajú k dramatickým rozdielom v koncentrácii.



Použitie rovnováhy, ktorá umožňuje presnosť váženia až na niekoľko desatinných miest a automatizáciu procesu prepojením rovnováhy s dávkovačom rozpúšťadla zaručuje najvyššiu presnosť. Používanie softvéru, ako je napríklad dávkovanie Q-App YAPP16, umožňuje automatické výpočty a gravimetrické monitorovanie nameraných hodnôt. Dokumentácia teploty a hustoty rozpúšťadla tiež zaisťuje vysoko presné koncentrácie, najmä pri príprave noriem v nasledujúcich dňoch. Priamy prenos údajov zo softvéru Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatograph Data System (CDS) je voľbou pre manipuláciu s bez papierom s úplnou integritou údajov.

Krok 3. Vráťte sa k základom s dobrým pipetovaním

Dôležitosť presného a presného pipetovania je príliš často prehliadaná a považovaná za samozrejmosť. Úroveň a skúsenosti používateľov môžu mať významné dôsledky pre citlivé analýzy, ako je HPLC. Výber správnej pipety môže znížiť ľudskú chybu a súvisiace náklady na zbytočné rozpúšťadlá.



Mechanické pipety s objemovým zámkom ponúkajú jednoduché riešenie na zabránenie náhodným zmenám objemu, zatiaľ čo sofistikovanejšie elektronické pipety eliminujú variabilitu používateľa, aby dôsledne dodávali presné objemy. Špička pipety je tiež dôležitým detailom, ktorý je potrebné zvážiť pri analýzach HPLC. Nízke retenčné tipy sú najlepšie pri práci s rozpúšťadlami rôznych viskozít, pretože maximalizujú zotavenie vzorky. Kontaminácia vzorky sa môže vyskytnúť aj v dôsledku vylúhovania z špičky pipety. Ako také, tipy s vysokou chemickou rezistenciou zachovávajú integritu vzorky.

Krok 4. Filter pre presnosť a dlhovekosť

Dodatočná starostlivosť o vzorky filtrovania pred analýzou zlepšuje spoľahlivosť a môže predĺžiť životnosť kolóny HPLC tým, že zabraňuje účinkom upchávania. Filtre striekačky sú jednoduchým a rýchlym roztokom pre filtrovanie vzoriek pred stĺpcovou chromatografiou. Rovnako ako pri špičkách pipety, rozpúšťadlá používané v HPLC si vyžadujú konkrétne filtre, aby sa zabránilo vylúhovaniu a kontaminácii vzorky.

Celulózové membrány sú rezistentné na dimetylsulfoxid (DMSO), amidy, ketóny, esterov a éterové zlúčeniny. V prípade najmä drsných rozpúšťadiel membrány nepotiahnutého polythersulfónu (PTFO) bránia vylúhovanie a kontamináciu vzoriek. Filtrácia vzorky sa stáva veľmi časovo náročnou, keď sa zvýši počet vzorky. Filtračné jednotky s viacerými vzorkami, ako napríklad filtračný systém Claristep®, môžu spracovať vzorky bez injekčných striekačiek a rýchlej prípravy vzoriek bez obetovania kvality.

Päť problémov, ktoré musíte venovať pozornosti！

1. Aké sú najväčšie problémy s prípravou vzoriek, ktorým čelia laboratóriá?

Laboratóriá sú pod rastúcim tlakom, pokiaľ ide o čas a náklady, často sa zaoberajú nielen vysoký počet vzoriek, ale aj vzorky rôznych povahy. Príprava vzorky je oblasť, kde jemné rozdiely medzi typmi vzoriek alebo metódami prípravy vzorky a použitými materiálmi môžu ovplyvniť získané výsledky. Zabezpečenie kompatibility medzi materiálmi vo filtračnom zariadení a rozpúšťadlom môže minimalizovať problémy; Napríklad hladiny extrahovateľných zlúčenín, ktoré by mohli interferovať s detekciou analytov.

2. Čo sa stane, keď sa príprava vzorky pokazí?

Pred analytickým vysoko výkonným kvapalinovým chromatografiou (HPLC) sa vzorky pripravujú rôznymi metódami, z ktorých všetky majú potenciál ovplyvniť analytické výsledky ovplyvnením vzorky vstrekovanej do systému. Neefektívna príprava vzorky môže viesť k zníženiu životnosti stĺpcov, zvýšeniu služieb požiadaviek na komponenty, potenciálne prestoje prístrojového vybavenia, zníženie účinnosti a reprodukovateľnosti chromatografickej separácie a mnohých ďalších problémov.

3. Na prvý pohľad sa filtrácia javí ako jednoduchý proces ...

Aj keď je filtrácia zdanlivo malá časť veľkého pracovného postupu, vplyv výberu správneho filtra pre danú aplikáciu môže byť podstatný. Napríklad metódy, ktoré neodstraňujú dostatočné množstvo častíc, môžu mať za následok blokovanie kolóny. Nevhodný výber zariadení na prípravu vzorky by za určitých okolností mohol za určitých okolností uvoľniť extrahovateľné zlúčeniny do vzorky, viazať analyty, ktoré sú predmetom záujmu alebo zaviesť chyby stratou vzorky - všetky ovplyvňujúce kvalitu a reprodukovateľnosť pozorovaných výsledkov. Ak ste si istí, že spotrebný materiál filtrácie neprispieva k chybám, ktoré si vyžadujú prepracovanie alebo vyšetrovanie koreňových príčin, ušetríte peniaze a dáte si pokoj.

4. Aké sú najbežnejšie vzorky prípravy „zlyhania“?

Nesprávna voľba membrány filtra je jedným z problémov, ktorý vidíme veľa. Problémy sa môžu javiť ako cudzie vrcholy z extraktov, ktoré môžu interferovať s detekciou analytov, ktoré sú predmetom záujmu. Nekompatibilita filtračného média so vzorkou alebo rozpúšťadlom z hľadiska chemického odporu sa neobmedzuje iba na účinky rozpúšťania na filtračnom médiu. Rozpúšťadlá môžu spôsobiť mierny opuch polymérnych membránových materiálov, keď nie sú úplne kompatibilné, čo môže zase ovplyvniť výkonnosť filtrácie, čo vedie k neúčinnému vyčisteniu vzoriek. Jedným zo spôsobov, ako vyriešiť tento problém, je výber membrány, ktorá je všeobecne kompatibilná s vodnými aj organickými rozpúšťadlami. Pre typickú prípravu vzorky HPLC sú injekčné striekačky a injekčné striekačky obsahujúce regenerované celulózové membrány dobrou voľbou kvôli ich širokej kompatibilite s rozpúšťadlom.

Použitie filtračného zariadenia, ktoré je väčšie, ako je potrebné na pripravený objem, je ďalším bežným úskaliam. Použitie príliš veľkých filtračných zariadení znamená, že malé množstvá vzorky zostanú vo filtri, a to aj po prijatí preventívnych opatrení na čo najviac.

5. Aké sú výhody, keď vezmete krok filtrácie vážne?

Základným cieľom väčšiny laboratórií zapojených do analytického testovania je vývoj konzistentných procesov, ktoré podporujú konzistentné výsledky - a ktoré si vyžadujú konzistentné filtrovanie. Výber filtračného zariadenia so správnou veľkosťou a charakteristikami retencie pórov pomáha zabezpečiť efektívne odstránenie častíc, zatiaľ čo výber vhodnej veľkosti a návrh filtračnej jednotky môže pomôcť minimalizovať stratu vzorky. Dobrá filtrácia tiež pomáha chrániť stĺpec a potenciálne predlžuje životnosť injektora aj stĺpca.

Záver

HPLC je cenná technika pre vedu o živote a biofarmaceutický výskum, pretože prináša presné a reprodukovateľné výsledky. Táto presnosť závisí od integrity vzorky HPLC a najlepším spôsobom, ako zabezpečiť kvalitné vzorky, je začať s najlepšími nástrojmi. Vďaka roztokom pre ultrapúrovú vodu, štandardnú prípravu, pipety, špičky a filtre účtuje vedenie vzorky HPLC pre každý detail. Automatizované riešenia a softvér tiež pomáhajú zefektívniť prípravu vzoriek na dodanie čistých vzoriek pre čisté výsledky.

Viac diskusií o riešeniach prípravy vzoriek HPLC sú vítané!