HPLC Rešitve za pripravo vzorcev za najboljše rezultate

Štirje koraki za pripravo vzorca HPLC

1. korak. Analiza vodnih raztopin

2. korak. Priprava standardov

Priprava standardov za identifikacijo in količinsko določanje spojin je lahko mučen in zamuden postopek. Natančno tehtanje trdne snovi, tako da je mogoče uporabiti vnaprej določeno količino topila, je težko, odpadki zaradi napak pa so lahko dragi - zlasti pri delu s farmacevtskimi izdelki. Drugi dejavniki, kot je temperatura, še dodatno zapletejo standardno pripravo. Nihanja temperature spreminjajo gostoto topila in prispevajo k dramatičnim razlikam v koncentraciji.



Uporaba ravnotežja, ki omogoča tehtanje natančnosti do več decimalnih mest in avtomatizacijo postopka s povezovanjem ravnotežja z razpršilnikom topila zagotavlja najvišjo natančnost. Uporaba programske opreme, kot je odmerjanje YAPP16, omogoča samodejne izračune in gravimetrično spremljanje izmerjenih vrednosti. Dokumentiranje temperature in gostote topila zagotavlja tudi zelo natančne koncentracije, zlasti pri pripravi standardov v naslednjih dneh. Neposredni prenos podatkov iz tehtalne aplikacije YAPP16 na programsko opremo Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 7.2 kromatografije (CDS) je možnost za ravnanje s papirjem s celotno celovitostjo podatkov.

3. korak. Vrnite se na osnove z dobrim pipettingom

Pomen natančnega in natančnega pipetacije je prepogosto spregledan in jet za samoumevno. Stopnja spretnosti in izkušnje uporabnikov lahko imajo pomembne posledice za občutljive analize, kot je HPLC. Izbira prave pipete lahko zmanjša človeške napake in s tem povezane stroške zapravljenih topil.



Mehanske pipete z zaklepanjem glasnosti ponujajo preprosto rešitev za preprečevanje nenamernih sprememb glasnosti, medtem ko bolj izpopolnjene elektronske pipete odpravljajo spremenljivost uporabnikov, da dosledno zagotavljajo natančne količine. Nasvet za pipeto je tudi pomembna podrobnost, ki jo je treba upoštevati pri analizah HPLC. Nasveti za nizko zadrževanje so najboljši pri delu s topili različnih viskoznosti, saj maksimirajo okrevanje vzorcev. Kontaminacija vzorca se lahko pojavi tudi kot posledica izpita s konice pipete. Kot takšni nasveti z visoko celovitostjo vzorca kemične odpornosti.

4. korak. Filter za natančnost in dolgoživost

Dodatna skrb za filtriranje vzorcev pred analizo izboljša zanesljivost in lahko podaljša življenjsko dobo stolpca HPLC s preprečevanjem učinkov zamašitve. Filtri brizge so preprosta, hitra rešitev za filtriranje vzorcev pred kolonsko kromatografijo. Tako kot pri nasvetih pipete tudi topila, ki se uporabljajo v HPLC, zahtevajo posebne filtre, da preprečijo izpiranje in kontaminacijo vzorcev.

Celulozne membrane so odporne na dimetil sulfoksid (DMSO), amide, ketone, ester in eter. Za posebej ostra topila membrane brez poliethersulfona (PTFO) preprečujejo izpiranje in kontaminacijo vzorcev. Vzorčna filtracija postane zelo zamudna, ko se število vzorca poveča. Filtracijske enote z več vzorci, kot je filtracijski sistem Claristep®, lahko obdelajo vzorce brez brizg in hitro pripravljanje vzorcev, ne da bi pri tem žrtvovali kakovost.

Pet težav morate biti pozorni na！

1. Kateri so največji vzorčni problemi s pripravo, s katerimi se soočajo laboratoriji?

Laboratoriji so pod vedno večjim pritiskom glede na čas in stroške, pogosto pa se ukvarjajo ne le z velikim številom vzorcev, ampak tudi vzorcev različnih narav. Priprava vzorca je področje, kjer lahko subtilne razlike med vrstami vzorcev ali metodami priprave vzorca in uporabljenimi materiali vplivajo na dobljene rezultate. Zagotavljanje združljivosti med materiali v filtracijski napravi in ​​topilom lahko zmanjša težave; Na primer, ravni izvlečnih spojin, ki lahko ovirajo odkrivanje analita.

2. Kaj se zgodi, ko gre za vzorčno pripravo?

Pred analitično visokozmogljivo tekočo kromatografijo (HPLC) se vzorce pripravijo z različnimi metodami, ki lahko vplivajo na analitične rezultate, tako da vplivajo na vzorec, ki je vbrizgan v sistem. Neučinkovita priprava vzorca lahko privede do zmanjšanja življenjske dobe stolpcev, povečanih potreb po storitvah za komponente, potencialnega izpada instrumentacije, zmanjšanja učinkovitosti in obnovljivosti kromatografske ločitve ter številnih drugih težav.

3. Na prvi pogled se zdi filtracija kot preprost postopek ...

Čeprav je filtracija na videz majhen del velikega delovnega toka, je lahko vpliv izbire pravega filtra za dano aplikacijo znaten. Na primer, metode, ki ne odstranijo zadostnih delcev, lahko povzročijo blokiranje stolpcev. Neprimerna izbira naprav za pripravo vzorcev bi lahko v določenih okoliščinah sprostila izvlečne spojine v vzorec, vezali analize, ki vas zanimajo ali uvedejo napake z izgubo vzorca - vse vpliva na kakovost in obnovljivost opaženih rezultatov. Če ste prepričani, da vaš potrošni material filtracije ne prispeva k napakam, ki zahtevajo predelavo ali preiskave korenine, boste prihranili denar in si privoščili brezskrbnost.

4. Kateri so najpogostejši vzorčni pripravi "ne uspe"?

Nepravilna izbira filtra membrane je ena težava, ki jo vidimo veliko. Težave se lahko pojavijo kot zunanji vrhovi iz ekstraktable, kar lahko ovira odkrivanje zanimivih analitov. Nezdružljivost filtrirnih medijev z vzorcem ali topilom v smislu kemične odpornosti ni omejena samo na učinke raztapljanja na filtrirni mediji. Topila lahko povzročijo rahlo otekanje polimernih membranskih materialov, kadar niso popolnoma združljivi, kar lahko vpliva na delovanje filtracije, kar vodi do neučinkovitega čiščenja vzorcev. Eden od načinov za reševanje tega vprašanja je izbira membrane, ki je na splošno združljiva z vodnimi in organskimi topili. Za značilno pripravo vzorca HPLC so brizge in filtri brez brizg, ki vsebujejo regenerirane membrane celuloze, dobra možnost zaradi svoje široke združljivosti topila.

Uporaba filtrirne naprave, ki je večja, kot je potrebna za pripravo glasnosti, je še ena pogosta slaba. Uporaba preveč velikih filtrirnih naprav pomeni, da bodo majhne količine vzorca ostale v filtru, tudi potem, ko se sprejmejo previdnostni ukrepi, da čim bolj izpustijo.

5. Kakšne so prednosti, da resno sprejemate korak filtracije?

Temeljni cilj večine laboratorijev, ki se ukvarjajo z analitičnim testiranjem, je razviti dosledne procese, ki temeljijo na doslednih rezultatih - in ki zahtevajo dosledno filtriranje. Izbira filtracijske naprave z desno velikostjo por in značilnosti zadrževanja pomaga zagotoviti učinkovito odstranjevanje delcev, medtem ko lahko izbira ustrezne velikosti in zasnove filtrirne enote pomaga zmanjšati izgubo vzorca. Dobra filtracija pomaga tudi pri zaščiti stolpca in potencialno podaljša življenjsko dobo injektorja in stolpca.

Zaključek

HPLC je dragocena tehnika za znanost o življenju in biofarmacevtske raziskave, saj prinaša natančne, ponovljive rezultate. Ta natančnost je odvisna od celovitosti vzorca HPLC in najboljši način za zagotovitev kakovostnih vzorcev je začeti z najboljšimi orodji. Z rešitvami za ultravsko vodo, standardno pripravo, pipetami, nasveti in filtri za vsako podrobnost predstavlja linijo za pripravo vzorca HPLC. Avtomatizirane rešitve in programska oprema prav tako pomagajo pri poenostavitvi priprave vzorcev za dostavo čistih vzorcev za čiste rezultate.

Več razprav o rešitvah za pripravo vzorcev HPLC je dobrodošlo!