Zgjidhjet e përgatitjes së mostrës HPLC për rezultate më të mira

Katër hapa për përgatitjen e mostrës HPLC

Hapi 1. Analiza e zgjidhjeve ujore

Hapi 2. Përgatitja e standardeve

Përgatitja e standardeve për identifikimin dhe kuantifikimin e përbërë mund të jetë një proces i lodhshëm dhe kërkon kohë. Peshimi i saktë i një të ngurtë në mënyrë që një vëllim i paracaktuar i tretësit të mund të përdoret është i vështirë, dhe mbeturinat për shkak të gabimit mund të jenë të kushtueshme - veçanërisht kur punoni me farmaceutikë. Faktorë të tjerë të tillë si temperatura komplikojnë më tej përgatitjen standarde. Luhatjet e temperaturës ndryshojnë densitetin e tretësit dhe kontribuojnë në ndryshime dramatike në përqendrim.



Përdorimi i një ekuilibri që mundëson një saktësi peshimi deri në disa vende dhjetore dhe automatizimin e procesit duke lidhur ekuilibrin me një shpërndarës tretës garanton saktësinë më të lartë. Përdorimi i softuerit të tillë si dozimi i YAPP16 Q-APP mundëson llogaritjet automatike dhe monitorimin gravimetrik të vlerave të matura. Dokumentimi i temperaturës dhe densitetit të tretësit siguron gjithashtu përqendrime shumë të sakta, veçanërisht kur përgatitni standarde në ditët pasuese. Transferimi i drejtpërdrejtë i të dhënave nga aplikacioni i peshimit YAPP16 në softuerin Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Sistemi i të Dhënave të të Dhënave të Kromatografisë (CDS) është një mundësi për trajtimin e të dhënave pa letër me integritet të plotë të të dhënave.

Hapi 3. Kthehuni te bazat me pipetë të mirë

Rëndësia e tubave të saktë dhe të saktë shpesh anashkalohet dhe merret si e mirëqenë. Niveli dhe përvoja e aftësive të përdoruesit mund të kenë implikime të rëndësishme për analiza të ndjeshme si HPLC. Zgjedhja e pipetës së duhur mund të zvogëlojë gabimin e njeriut dhe kostot e shoqëruara të tretësve të tretur.



Pipetë mekanike me një bllokim vëllimi ofrojnë një zgjidhje të thjeshtë për parandalimin e ndryshimeve aksidentale të vëllimit, ndërsa pipetë elektronike më të sofistikuara eliminojnë ndryshueshmërinë e përdoruesit për të dhënë vazhdimisht vëllime të sakta. Maja e pipetës është gjithashtu një detaj i rëndësishëm për t'u marrë parasysh për analizat HPLC. Këshilla të ulëta të mbajtjes janë më të mirat kur punoni me tretës të viskoziteteve të ndryshme, pasi ato maksimizojnë rikuperimin e mostrës. Ndotja e mostrës gjithashtu mund të ndodhë si rezultat i rrjedhjes nga maja e pipetës. Si e tillë, këshilla me rezistencë të lartë kimike ruajnë integritetin e mostrës.

Hapi 4. Filter për saktësi dhe jetëgjatësi

Kujdesi shtesë për të filtruar mostrat para analizës përmirëson besueshmërinë dhe mund të zgjasë jetën e kolonës HPLC duke parandaluar efektet e bllokimit. Filtrat e shiringave janë një zgjidhje e thjeshtë, e shpejtë për mostrat e filtrimit para kromatografisë së kolonës. Ashtu si me këshillat e pipetës, tretësit e përdorur në HPLC kërkojnë filtra specifikë për të parandaluar ndarjen dhe ndotjen e mostrës.

Membranat e celulozës janë rezistente ndaj dimetil sulfoksidit (DMSO), amideve, ketoneve, esterit dhe komponimeve eter. Për tretësirë ​​veçanërisht të ashpër, membranat e Polyethersulfone (PTFO) të pa veshura parandalojnë rrjedhjen dhe ndotjen e mostrës. Filtrimi i mostrës bëhet shumë kohë kur rritet numri i mostrës. Njësitë e filtrimit me shumë kampione, siç është sistemi i filtrimit ClarisTEp®, mund të përpunojnë mostra pa shiringa dhe përgatitje të shpejtë të mostrës pa sakrifikuar cilësinë.

Pesë probleme që ju duhet t'i kushtoni vëmendje

1. Cilat janë problemet më të mëdha të përgatitjes së mostrës me të cilat përballen laboratorët?

Laboratorët janë nën presion në rritje për sa i përket kohës dhe kostos, shpesh që merren jo vetëm me një numër të madh të mostrave, por edhe mostra të natyrave të ndryshme. Përgatitja e mostrës është një zonë ku ndryshimet delikate midis llojeve të mostrës ose metodave të përgatitjes së mostrës dhe materialeve të përdorura mund të ndikojnë në rezultatet e marra. Sigurimi i pajtueshmërisë midis materialeve në pajisjen e filtrimit dhe tretësit mund të minimizojë çështjet; Për shembull, nivelet e komponimeve të ekstraktueshme që mund të ndërhyjnë në zbulimin e analitit.

2. Happensfarë ndodh kur përgatitja e mostrës shkon keq?

Para aplikimeve analitike të performancës së lartë të kromatografisë së lëngshme (HPLC), mostrat përgatiten me një larmi metodash, të gjitha këto kanë potencialin për të ndikuar në rezultatet analitike duke ndikuar në mostrën e injektuar në sistem. Përgatitja joefektive e mostrës mund të çojë në një ulje të jetës së kolonës, rritjen e kërkesave të shërbimit për përbërësit, joproduktive të mundshme të instrumentimit, uljen e efikasitetit të ndarjes kromatografike dhe riprodhueshmërisë dhe shumë probleme të tjera.

3 Në shikim të parë, filtrimi duket si një proces i thjeshtë ...

Megjithëse filtrimi është një pjesë në dukje e vogël e një fluksi të madh pune, ndikimi i zgjedhjes së filtrit të duhur për një aplikim të caktuar mund të jetë i konsiderueshëm. Për shembull, metodat që nuk heqin lëndë të mjaftueshme të grimcave mund të rezultojnë në bllokimin e kolonës. Zgjedhja e papërshtatshme e pajisjeve të përgatitjes së mostrës mund, në rrethana të caktuara, të lëshojë komponime të ekstraktueshme në mostër, të lidhte analitët e interesit ose të prezantojë gabime përmes humbjes së mostrës - të gjitha ndikojnë në cilësinë dhe riprodhueshmërinë e rezultateve të vëzhguara. Nëse jeni të sigurt se harxhimet tuaja të filtrimit nuk po kontribuojnë në gabime që kërkojnë ripërpunim ose hetime të shkakut rrënjësor, do të kurseni para dhe do t'i jepni vetes paqe mendore.

4 Cilat janë përgatitjet më të zakonshme të mostrës ‘dështojnë’?

Zgjedhja e pasaktë e membranës së filtrit është një problem që ne shohim shumë. Ështjet mund të shfaqen si maja të jashtme nga ekstraktet, të cilat mund të ndërhyjnë në zbulimin e analitëve të interesit. Papajtueshmëria e mediave të filtrit me një mostër ose tretës për sa i përket rezistencës kimike nuk është e kufizuar vetëm në efektet e shpërbërjes në median e filtrit. Tretësirat mund të shkaktojnë ënjtje të lehtë të materialeve të membranës polimer kur nuk janë plotësisht të pajtueshme, e cila nga ana tjetër mund të ndikojë në performancën e filtrimit, duke çuar në pastrimin joefektiv të mostrave. Një mënyrë për të adresuar këtë çështje është duke zgjedhur një membranë që është gjerësisht e pajtueshme me tretësit ujorë dhe organikë. Për përgatitjen tipike të mostrës HPLC, filtrat e shiringës dhe pa shirita që përmbajnë membrana të rigjeneruara të celulozës janë një mundësi e mirë për shkak të pajtueshmërisë së tyre të gjerë të tretësit.

Përdorimi i një pajisje filtri që është më e madhe se sa duhet për vëllimin që përgatitet është një tjetër kurvë e zakonshme. Përdorimi i pajisjeve shumë të mëdha të filtrit do të thotë që sasi të vogla të mostrës do të mbeten në filtër, edhe pasi të merren masa paraprake për të dëbuar sa më shumë që të jetë e mundur.

5. Cilat janë avantazhet e ndërmarrjes seriozisht të hapit të filtrimit?

Një qëllim themelor i shumicës së laboratorëve të angazhuar në testimin analitik është të zhvillojnë procese të qëndrueshme që mbështesin rezultate të qëndrueshme - dhe që kërkojnë filtrim të vazhdueshëm. Përzgjedhja e një pajisjeje filtrimi me madhësinë e duhur të poreve dhe karakteristikat e mbajtjes ndihmon në sigurimin e heqjes efektive të grimcave, ndërsa zgjedhja e madhësisë së përshtatshme dhe modelimit të njësisë së filtrit mund të ndihmojë në minimizimin e humbjes së mostrës. Filtrimi i mirë gjithashtu ndihmon në mbrojtjen e kolonës dhe potencialisht zgjat jetën e injektorit dhe kolonës.

Përfundim

HPLC është një teknikë e vlefshme për shkencën e jetës dhe hulumtimin biofarmik pasi jep rezultate të sakta, të riprodhueshme. Kjo saktësi varet nga integriteti i mostrës HPLC, dhe mënyra më e mirë për të siguruar mostra me cilësi të lartë është të filloni me mjetet më të mira. Me zgjidhje për ujë ultrapure, përgatitje standarde, pipete, këshilla dhe filtra, linja e përgatitjes së mostrës HPLC llogarit për çdo detaj. Zgjidhjet dhe softueri i automatizuar gjithashtu ndihmojnë në rregullimin e përgatitjes së mostrës për të ofruar mostra të pastra për rezultate të pastra.

Më shumë diskutime në lidhje me zgjidhjet e përgatitjes së mostrës HPLC janë të mirëseardhura!