Giải pháp chuẩn bị mẫu HPLC cho kết quả tốt nhất

Bốn bước để chuẩn bị mẫu HPLC

Bước 1. Phân tích các giải pháp nước

Bước 2. Chuẩn bị các tiêu chuẩn

Chuẩn bị các tiêu chuẩn để xác định và định lượng hợp chất có thể là một quá trình tẻ nhạt và tốn thời gian. Cân bằng chính xác một chất rắn để có thể sử dụng một khối lượng dung môi được xác định trước là khó khăn và chất thải do lỗi có thể tốn kém, đặc biệt là khi làm việc với dược phẩm. Các yếu tố khác như nhiệt độ làm phức tạp thêm chuẩn bị tiêu chuẩn. Biến động nhiệt độ làm thay đổi mật độ dung môi và góp phần vào sự khác biệt mạnh mẽ về nồng độ.



Sử dụng cân bằng cho phép độ chính xác cân lên đến một số vị trí thập phân và tự động hóa quá trình bằng cách liên kết số dư với bộ phân phối dung môi đảm bảo độ chính xác cao nhất. Sử dụng phần mềm như Yapp16 dùng Q-APP cho phép tính toán tự động và giám sát trọng lực các giá trị đo được. Tài liệu về nhiệt độ và mật độ của dung môi cũng đảm bảo nồng độ chính xác cao, đặc biệt là khi chuẩn bị các tiêu chuẩn vào những ngày tiếp theo. Chuyển dữ liệu trực tiếp từ ứng dụng cân Yapp16 sang phần mềm Hệ thống sắc ký (CDS) của Thermo Khoa học ™ là một tùy chọn để xử lý dữ liệu không có giấy tờ với tính toàn vẹn dữ liệu đầy đủ.

Bước 3. Quay trở lại những điều cơ bản với đường ống tốt

Tầm quan trọng của đường ống chính xác và chính xác thường bị bỏ qua và được coi là điều hiển nhiên. Mức độ kỹ năng và kinh nghiệm của người dùng có thể có ý nghĩa quan trọng đối với các phân tích nhạy cảm như HPLC. Chọn đúng pipet có thể làm giảm lỗi của con người và các chi phí liên quan đến các dung môi lãng phí.



Các pipet cơ học với khóa âm lượng cung cấp một giải pháp đơn giản để ngăn chặn sự thay đổi khối lượng tình cờ, trong khi các pipet điện tử tinh vi hơn loại bỏ sự thay đổi của người dùng để cung cấp một cách nhất quán khối lượng chính xác. Đầu pipet cũng là một chi tiết quan trọng để xem xét cho các phân tích HPLC. Các mẹo duy trì thấp là tốt nhất khi làm việc với các dung môi có độ nhớt khác nhau, vì chúng tối đa hóa sự phục hồi mẫu. Ô nhiễm mẫu cũng có thể xảy ra là kết quả của việc lọc từ đầu pipet. Như vậy, các mẹo có điện trở hóa học cao bảo tồn tính toàn vẹn mẫu.

Bước 4. Lọc cho độ chính xác và tuổi thọ

Chăm sóc bổ sung để lọc các mẫu trước khi phân tích cải thiện độ tin cậy và có thể kéo dài tuổi thọ của cột HPLC bằng cách ngăn chặn các hiệu ứng tắc nghẽn. Bộ lọc ống tiêm là một giải pháp đơn giản, nhanh chóng để lọc các mẫu trước khi sắc ký cột. Cũng như các đầu pipet, các dung môi được sử dụng trong HPLC đòi hỏi các bộ lọc cụ thể để ngăn ngừa sự rò rỉ và ô nhiễm mẫu.

Màng cellulose có khả năng kháng dimethyl sulfoxide (DMSO), amit, ketone, ester và các hợp chất ether. Đối với các dung môi đặc biệt khắc nghiệt, màng polyethersulfone (PTFO) không tráng phủ ngăn ngừa sự lọc nước và ô nhiễm mẫu. Lọc mẫu trở nên rất tốn thời gian khi số mẫu tăng. Các đơn vị lọc đa mẫu, chẳng hạn như hệ thống lọc Claristep®, có thể xử lý các mẫu mà không cần ống tiêm và chuẩn bị mẫu theo dõi nhanh mà không làm giảm chất lượng.

Năm vấn đề bạn cần chú ý đến！

1. Các vấn đề chuẩn bị mẫu lớn nhất phải đối mặt với phòng thí nghiệm là gì?

Các phòng thí nghiệm đang chịu áp lực ngày càng tăng về thời gian và chi phí, thường không chỉ xử lý số lượng mẫu cao mà còn các mẫu có bản chất khác nhau. Chuẩn bị mẫu là một khu vực nơi sự khác biệt tinh tế giữa các loại mẫu hoặc phương pháp chuẩn bị mẫu và vật liệu được sử dụng có thể ảnh hưởng đến kết quả thu được. Đảm bảo khả năng tương thích giữa các vật liệu trong thiết bị lọc và dung môi có thể giảm thiểu các vấn đề; Ví dụ, mức độ của các hợp chất có thể chiết có thể can thiệp vào phát hiện chất phân tích.

2. Điều gì xảy ra khi chuẩn bị mẫu đi sai?

Trước các ứng dụng sắc ký lỏng hiệu suất cao phân tích (HPLC), các mẫu được điều chế bằng nhiều phương pháp, tất cả đều có khả năng ảnh hưởng đến kết quả phân tích bằng cách ảnh hưởng đến mẫu được tiêm vào hệ thống. Chuẩn bị mẫu không hiệu quả có thể dẫn đến giảm tuổi thọ cột, tăng yêu cầu dịch vụ đối với các thành phần, thời gian ngừng hoạt động tiềm năng của thiết bị, giảm hiệu quả phân tách sắc ký và khả năng tái tạo, và nhiều vấn đề khác.

3. Thoạt nhìn, lọc có vẻ như là một quá trình đơn giản ...

Mặc dù lọc là một phần dường như nhỏ của quy trình làm việc lớn, tác động của việc chọn bộ lọc phù hợp cho một ứng dụng nhất định có thể là đáng kể. Ví dụ, các phương pháp không loại bỏ đủ vật chất hạt có thể dẫn đến chặn cột. Trong một số trường hợp, sự lựa chọn không phù hợp của các thiết bị chuẩn bị mẫu có thể giải phóng các hợp chất chiết xuất vào mẫu, liên kết các phân tích quan tâm hoặc đưa ra lỗi thông qua mất mẫu - tất cả đều ảnh hưởng đến chất lượng và khả năng tái tạo của kết quả. Nếu bạn tự tin rằng vật phẩm lọc của bạn không đóng góp cho các lỗi yêu cầu điều tra lại hoặc điều tra nguyên nhân gốc, bạn sẽ tiết kiệm tiền và cho mình sự an tâm.

4. Chuẩn bị mẫu phổ biến nhất ‘Fails là gì?

Lựa chọn màng bộ lọc không chính xác là một vấn đề chúng ta thấy rất nhiều. Các vấn đề có thể xuất hiện dưới dạng các đỉnh bên ngoài từ các trích xuất, có thể can thiệp vào việc phát hiện các chất phân tích quan tâm. Sự không tương thích của môi trường lọc với một mẫu hoặc dung môi về khả năng kháng hóa học không chỉ giới hạn ở các hiệu ứng hòa tan trên môi trường lọc. Dung môi có thể gây ra sưng nhẹ các vật liệu màng polymer khi không tương thích hoàn toàn, từ đó có thể ảnh hưởng đến hiệu suất lọc, dẫn đến việc làm sạch các mẫu không hiệu quả. Một cách để giải quyết vấn đề này là chọn một màng tương thích rộng rãi với cả dung môi nước và hữu cơ. Để chuẩn bị mẫu HPLC điển hình, ống tiêm và bộ lọc không có ống tiêm có chứa màng cellulose được tái sinh là một lựa chọn tốt vì khả năng tương thích dung môi rộng của chúng.

Việc sử dụng một thiết bị lọc lớn hơn mức cần thiết cho âm lượng được chuẩn bị là một cạm bẫy phổ biến khác. Việc sử dụng các thiết bị bộ lọc quá lớn có nghĩa là một lượng nhỏ mẫu sẽ vẫn còn trong bộ lọc, ngay cả sau khi các biện pháp phòng ngừa được thực hiện để trục xuất càng nhiều càng tốt.

5. Những lợi thế của việc thực hiện bước lọc nghiêm trọng là gì?

Mục tiêu cơ bản của hầu hết các phòng thí nghiệm tham gia thử nghiệm phân tích là phát triển các quy trình nhất quán làm nền tảng cho kết quả nhất quán - và yêu cầu lọc nhất quán. Việc lựa chọn một thiết bị lọc với kích thước lỗ rỗng và đặc tính duy trì phù hợp giúp đảm bảo loại bỏ các hạt hiệu quả, trong khi việc lựa chọn kích thước và thiết kế phù hợp của đơn vị lọc có thể giúp giảm thiểu mất mẫu. Lọc tốt cũng giúp bảo vệ cột và có khả năng mở rộng tuổi thọ của cả kim phun và cột.

Phần kết luận

HPLC là một kỹ thuật có giá trị cho nghiên cứu khoa học đời sống và sinh học vì nó mang lại kết quả chính xác, có thể tái tạo. Độ chính xác này phụ thuộc vào tính toàn vẹn của mẫu HPLC và cách tốt nhất để đảm bảo các mẫu chất lượng cao là bắt đầu với các công cụ tốt nhất. Với các giải pháp cho nước siêu tinh khiết, chuẩn bị tiêu chuẩn, pipet, mẹo và bộ lọc, dòng chuẩn bị mẫu HPLC chiếm từng chi tiết. Các giải pháp và phần mềm tự động cũng giúp hợp lý hóa việc chuẩn bị mẫu để cung cấp các mẫu sạch để có kết quả sạch.

Nhiều cuộc thảo luận về các giải pháp chuẩn bị mẫu HPLC được hoan nghênh!