Mae paratoi sampl yn gam hanfodol yn y broses sbectrometreg màs cromatograffeg hylif (LC-MS), gan ddylanwadu ar gywirdeb a dibynadwyedd canlyniadau dadansoddol. Prif bwrpas paratoi sampl yw tynnu, puro a chanolbwyntio dadansoddiadau o fatricsau cymhleth, gan sicrhau eu bod yn gydnaws â dadansoddiad LC-MS. Mae'r cam hwn yn hanfodol i ddileu ymyrraeth bosibl a allai effeithio ar ansawdd data. Mae paratoi sampl yn iawn yn gwella sensitifrwydd a phenodoldeb y dadansoddiad, sy'n hanfodol ar gyfer cymwysiadau mewn amrywiol feysydd megis proteinomeg, metaboledd, dadansoddiad fferyllol, a phrofion amgylcheddol.

Amcanion allweddol paratoi sampl:

Tynnu ymyrraeth: Dileu sylweddau a allai ymyrryd â chanfod dadansoddiadau targed.

Crynodiad y dadansoddiadau: Cynyddu crynodiad y dadansoddiadau i wella terfynau canfod.

Cydnawsedd: Paratowch samplau mewn ffordd y gellir eu dadansoddi'n effeithiol gan systemau LC-MS.

Am wybod mwy am baratoi sampl HPLC, gwiriwch yr erthygl hon: Datrysiadau paratoi sampl HPLC ar gyfer y canlyniadau gorau

Technegau cyffredin wrth baratoi sampl LC-MS

Defnyddir sawl techneg yn gyffredin wrth baratoi sampl LC-MS. Mae gan bob dull ei fanteision ei hun ac fe'i dewisir yn seiliedig ar ofynion penodol y dadansoddiad.

1. Echdynnu Cyfnod Solid (SPE)

Defnyddir SPE yn helaeth ar gyfer ynysu dadansoddiadau oddi wrth samplau hylifol. Mae'r dechneg hon yn cynnwys pasio sampl trwy gyfnod llonydd solet sy'n cadw'r dadansoddiadau targed yn ddetholus wrth ganiatáu i gydrannau eraill fynd drwodd. Mae SPE yn arbennig o effeithiol ar gyfer matricsau cymhleth fel gwaed neu wrin ac mae'n cynnig sawl budd:

Cyfraddau adfer uchel: Mae SPE fel arfer yn cynhyrchu cyfraddau adfer uwch o'i gymharu ag echdynnu hylif-hylif.

Cydnawsedd Awtomeiddio: Gellir awtomeiddio'r dull yn hawdd, gan wella trwybwn ac effeithlonrwydd.

2. dyodiad protein

Mae dyodiad protein yn ddull syml ond effeithiol ar gyfer tynnu proteinau o samplau biolegol. Mae'r dechneg hon yn arbennig o bwysig wrth ddadansoddi samplau â chynnwys protein uchel, fel plasma neu serwm. Trwy waddodi proteinau, mae'r dull hwn yn symleiddio'r matrics ac yn lleihau ymyrraeth mewn dadansoddiadau dilynol.

Cyflym ac effeithlon: Mae'n caniatáu ar gyfer prosesu samplau yn gyflym wrth gynnal cyfraddau adfer da.

3. Echdynnu hylif-hylif (LLE)

Mae LLE yn gwahanu dadansoddiadau yn seiliedig ar eu hydoddedd mewn dau hylif na ellir ei drin - cyfnod dyfrllyd yn nodweddiadol a thoddydd organig. Mae'r dechneg hon yn ddefnyddiol ar gyfer echdynnu cyfansoddion nad ydynt yn begynol neu gymedrol begynol o fatricsau dyfrllyd cymhleth.

Cais Amlbwrpas: Gellir addasu LLE ar gyfer cyfeintiau a mathau sampl amrywiol, gan ei gwneud yn addas ar gyfer ystod eang o gymwysiadau.

4. deilliad

Mae deilliad yn cynnwys addasu dadansoddiadau yn gemegol i wella eu canfyddadwyedd mewn dadansoddiad LC-MS. Mae'r broses hon yn gwella priodweddau fel anwadalrwydd ac effeithlonrwydd ionization, gan ei gwneud yn arbennig o ddefnyddiol ar gyfer cyfansoddion â chanfyddadwyedd cynhenid isel.

Gwell sensitifrwydd: Gall deilliad gynyddu sensitifrwydd a detholusrwydd dadansoddiadau yn sylweddol ar gyfer dosbarthiadau cyfansawdd penodol fel asidau amino neu steroidau.

Am wybod mwy am gymwysiadau ffiolau cromatograffeg, gwiriwch yr erthygl hon: 15 Cymhwyso ffiolau cromatograffeg mewn gwahanol feysydd

Ffactorau sy'n dylanwadu ar ddetholiad dull paratoi sampl

Mae angen ystyried sawl ffactor ar ddewis y dechneg paratoi sampl briodol:

Cemeg Dadansoddol: Mae deall polaredd, gwefr a sefydlogrwydd dadansoddiadau yn hanfodol.

Cyfaint a chymhlethdod sampl: Gall cyfyngiadau cyfaint a chymhlethdod y matrics sampl bennu pa ddulliau sy'n ymarferol.

Gofynion Sensitifrwydd: Efallai y bydd gan wahanol gymwysiadau anghenion sensitifrwydd amrywiol sy'n dylanwadu ar ddewis dulliau.

Adnoddau Labordy: Gall argaeledd offer ar gyfer awtomeiddio neu brosesu â llaw effeithio ar y dewis o dechneg.

Arferion gorau ar gyfer paratoi sampl yn effeithiol

Er mwyn sicrhau'r canlyniadau gorau posibl mewn dadansoddiad LC-MS, mae'n hanfodol cadw at arferion gorau wrth baratoi sampl:

Safoni: Datblygu protocolau safonedig i sicrhau cysondeb ar draws dadansoddiadau.

Dilysu: Dilysu dulliau yn rheolaidd i gadarnhau eu dibynadwyedd a'u cywirdeb.

Lleihau Trin Sampl: Lleihau nifer y triniaethau i atal colled neu halogiad.

Defnyddiwch Adweithyddion Ansawdd: Defnyddiwch adweithyddion o ansawdd uchel er mwyn osgoi cyflwyno amhureddau i samplau.

Gweithdrefnau Dogfen: Cadwch gofnodion manwl o'r holl weithdrefnau i hwyluso datrys problemau ac optimeiddio dulliau.

Nghasgliad

Mae paratoi sampl yn effeithiol yn sylfaenol i ddadansoddiad LC-MS llwyddiannus. Trwy ddeall technegau amrywiol fel SPE, dyodiad protein, LLE, a deilliad, gall dadansoddwyr ddewis y dull mwyaf priodol ar gyfer eu gofynion penodol. At hynny, bydd dilyn arferion gorau yn gwella ansawdd data ac yn sicrhau canlyniadau dibynadwy ar gyfer gwahanol gymwysiadau mewn ymchwil a lleoliadau diwydiant.

I gloi, gall meistroli technegau paratoi sampl nid yn unig wella perfformiad dadansoddol, ond hefyd gwneud cyfraniadau sylweddol at ddatblygiadau mewn meysydd fel diagnosteg glinigol, datblygu cyffuriau, a monitro amgylcheddol.

Datgloi cyfrinachau paratoi ffiol cromatograffeg cywir ar gyfer dadansoddiad cywir a dibynadwy mewn dim ond 6 cham syml.Darllenwch ymlaen i feistroli'r dechneg! 6 Cam i baratoi ffiolau cromatograffeg i'w dadansoddi

Blaenorol:

LCMS vs GCMS: Pa dechneg sydd orau ar gyfer eich ymchwil?

Nesaf:

Beth yw ffiol TOC a'i bwysigrwydd mewn cromatograffeg?