Mae'r dewis rhwng cromatograffeg hylif perfformiad uchel (HPLC) ac electrofforesis capilari (CE) yn dibynnu ar yr anghenion dadansoddol unigol a'r amgylchedd cais penodol. Mae gan bob techneg ei fanteision a'i anfanteision ei hun ac felly mae'n addas ar gyfer gwahanol fathau o ddadansoddiad.

Datgloi cyfrinachau paratoi ffiol cromatograffeg cywir ar gyfer dadansoddiad cywir a dibynadwy mewn dim ond 6 cham syml. Darllenwch ymlaen i feistroli'r dechneg!6 Cam i baratoi ffiolau cromatograffeg i'w dadansoddi

Trosolwg o HPLC a CE

Cromatograffeg hylif perfformiad uchel (HPLC)

Hplcyn dechneg ddadansoddol a ddefnyddir yn helaeth sy'n gwahanu cydrannau mewn cymysgedd yn seiliedig ar eu rhyngweithio â chyfnod llonydd a chyfnod symudol. Mae'n arbennig o effeithiol ar gyfer dadansoddi moleciwlau bach, peptidau a phroteinau. Mae nodweddion allweddol HPLC yn cynnwys:

Sensitifrwydd a Therfynau Canfod: Yn gyffredinol, mae HPLC yn cynnig terfynau canfod is o'i gymharu â CE, gan ei wneud yn addas ar gyfer dadansoddi olrhain. Er enghraifft, mae astudiaethau wedi dangos y gall HPLC gyflawni terfynau canfod sy'n sylweddol is na rhai CE, yn enwedig wrth ddadansoddi matricsau cymhleth fel samplau biolegol.

Amlochredd: Gellir addasu HPLC ar gyfer gwahanol fathau o ddadansoddiadau, gan gynnwys cyfnod arferol, cam gwrthdroi, cyfnewid ïon, a chromatograffeg gwahardd maint. Mae'r amlochredd hwn yn caniatáu iddo gael ei ddefnyddio mewn meysydd amrywiol, gan gynnwys fferyllol, profi amgylcheddol a diogelwch bwyd.

Cyfrol Sampl: Yn nodweddiadol mae angen cyfeintiau sampl mwy ar HPLC o gymharu â CE, a all fod yn gyfyngiad mewn rhai cymwysiadau lle mae argaeledd sampl yn gyfyngedig.

Am wybod 50 ateb am ffiolau HPLC, gwiriwch yr erthygl hon:50 Cwestiynau a ofynnir amlaf ar ffiolau HPLC

Electrofforesis Capilari (CE)

Mae CE yn dechneg gwahanu sy'n defnyddio maes trydan i yrru dadansoddiadau gwefredig trwy gapilari wedi'i lenwi ag electrolyt. Mae'n arbennig o effeithiol ar gyfer gwahanu rhywogaethau ïonig ac mae'n cynnig sawl mantais:

Cyflymder ac effeithlonrwydd: Yn gyffredinol, mae CE yn darparu amseroedd dadansoddi cyflymach na HPLC oherwydd effeithlonrwydd uchel y broses wahanu. Mae diamedr bach y capilari yn caniatáu ar gyfer gwresogi ac oeri cyflym, gan arwain at amseroedd rhedeg byrrach.

Defnydd toddyddion is: Yn nodweddiadol mae CE yn defnyddio cryn dipyn yn llai o doddydd na HPLC, sy'n golygu ei fod yn opsiwn mwy cyfeillgar i'r amgylchedd. Mae'r nodwedd hon yn cyd -fynd yn dda ag egwyddorion cemeg werdd, sy'n gynyddol bwysig wrth ddatblygu dulliau dadansoddol.

Datrysiad Uchel: Gall CE gyflawni cydraniad uchel ar gyfer rhywogaethau sydd â chysylltiad agos, sy'n arbennig o fuddiol ar gyfer dadansoddi cymysgeddau cymhleth fel y rhai a geir mewn samplau biolegol.

Ffactorau sy'n dylanwadu ar y dewis rhwng HPLC a CE

1. Natur y dadansoddiadau

Mae'r dewis rhwng HPLC a CE yn aml yn dibynnu ar natur y dadansoddiadau sy'n cael eu hastudio. Mae HPLC yn fwy addas ar gyfer cyfansoddion mwy, di-ïonig, tra bod CE yn rhagori gyda moleciwlau bach, gwefredig. Er enghraifft, defnyddiwyd CE yn effeithiol ar gyfer dadansoddi amrywiadau haemoglobin, lle dangosodd allu uwch wrth nodi amrywiadau penodol na allai HPLC eu canfod.

2. Sensitifrwydd a therfynau canfod gofynnol

Os oes angen terfynau canfod isel iawn ar y dadansoddiad, efallai mai HPLC yw'r dewis a ffefrir. Dangoswyd ei fod yn cyflawni terfynau canfod is mewn amrywiol astudiaethau, gan ei gwneud yn ddelfrydol ar gyfer cymwysiadau fel profi cyffuriau a monitro amgylcheddol.

3. Paratoi a chymhlethdod sampl

Yn aml mae angen paratoi sampl mwy helaeth ar HPLC, a all fod yn anfantais mewn lleoliadau trwybwn uchel. Mewn cyferbyniad, gall CE symleiddio paratoi sampl, yn enwedig ar gyfer rhywogaethau ïonig, gan ganiatáu ar gyfer dadansoddiad cyflymach a llai o ddefnydd ymweithredydd. Mae hyn yn arbennig o fanteisiol mewn lleoliadau clinigol lle mae canlyniadau cyflym yn hanfodol.

4. Ystyriaethau Cost

Mae cost yn ffactor arwyddocaol arall. Er y gallai'r setup cychwynnol ar gyfer HPLC fod yn uwch oherwydd yr angen am offeryniaeth a cholofnau cymhleth, mae CE yn gyffredinol yn ysgwyddo costau gweithredu is oherwydd llai o toddyddion a chynhyrchu gwastraff. Mae hyn yn gwneud CE yn opsiwn deniadol ar gyfer labordai gyda'r nod o leihau treuliau gweithredol wrth gadw at reoliadau amgylcheddol.

5. Amser Datblygu Dull

Mae CE yn aml yn caniatáu ar gyfer datblygu dull cyflymach o'i gymharu â HPLC. Gall symlrwydd y setup CE a'r angen gostyngedig am optimeiddio helaeth arwain at amseroedd troi cyflymach ar gyfer dulliau dadansoddol newydd, sy'n hanfodol mewn amgylcheddau ymchwil deinamig.

Am wybod pam mae ffiolau cromatograffeg wydr yn well na ffiolau plastig, gwiriwch yr erthygl hon: Y 3 Rheswm Uchaf Pam Mae ffiolau cromatograffeg wydr yn well na ffiolau plastig

Nghasgliad

I grynhoi, dylai'r penderfyniad i ddefnyddio HPLC neu CE fod yn seiliedig ar werthusiad trylwyr o'r gofynion dadansoddol penodol, gan gynnwys natur y dadansoddwr, anghenion sensitifrwydd, cymhlethdod paratoi sampl, ystyriaethau cost, ac amser datblygu dulliau. Mae gan y ddwy dechneg eu manteision unigryw eu hunain ac weithiau gallant ategu ei gilydd, yn dibynnu ar y nodau dadansoddol. Bydd deall y ffactorau hyn yn helpu ymchwilwyr a dadansoddwyr i ddewis y dull mwyaf priodol ar gyfer eu cymhwysiad penodol.

Blaenorol:

Pa ddeunydd hidlo chwistrell sy'n cynnig yr effeithlonrwydd cadw gronynnau gorau？

Nesaf:

LCMS vs GCMS: Pa dechneg sydd orau ar gyfer eich ymchwil?

HPLC vs Electrofforesis Capilari: Pa rai i'w ddefnyddio?