Popeth y mae angen i chi ei wybod am baratoi sampl HPLC

Mae paratoi sampl yn gam hanfodol mewn dadansoddiad HPLC am nifer o resymau.

Lleihau ymyrraeth:Mae samplau yn aml yn cynnwys amhureddau a chydrannau matrics a all ymyrryd â chanfod dadansoddiadau targed. Gall technegau paratoi sampl effeithiol helpu i gael gwared ar y sylweddau diangen hyn a gwella cywirdeb dadansoddol.

Gwella Adferiad Dadansoddwr:Mae paratoi priodol yn gwella adferiad dadansoddwr ac yn sicrhau bod y canlyniadau'n adlewyrchu crynodiad gwirioneddol y sampl wreiddiol. Mae hyn yn arbennig o bwysig ar gyfer dadansoddi olrhain lle mae dadansoddiadau'n bresennol mewn crynodiadau isel.

Gwell siâp brig:Mae samplau a baratowyd yn iawn yn helpu i ffurfio copaon cymesur a diffiniedig yn dda yn y cromatogram. Mae hyn yn hanfodol ar gyfer meintioli'n gywir. Gall paratoi sampl amhriodol arwain at gynffon brig ac ehangu, sy'n cymhlethu dehongli data.

Amddiffyn Eich System HPLC:Gall halogion yn eich sampl niweidio colofnau a chydrannau eraill yn eich system HPLC, gan arwain at gostau cynnal a chadw uwch ac amser segur. Mae paratoi sampl yn iawn yn lleihau'r risg o glocsio a gwisgo system.

Y cam cyntaf wrth baratoi sampl yw casglu'ch sampl yn gywir. Mae hyn yn cynnwys:

Defnyddiwch gynwysyddion glân:Defnyddiwch gynwysyddion glân, anadweithiol bob amser i osgoi halogi. Argymhellir cynwysyddion plastig gwydr neu o ansawdd uchel.

Osgoi halogi:Defnyddiwch fenig ac offer glanhau i atal halogiad rhag sebwm a ffynonellau eraill.

Labelu cywir:Labelwch samplau yn glir i osgoi cymysgu a sicrhau olrhain.

Mae homogeneiddio sampl yn sicrhau homogenedd, sy'n bwysig ar gyfer canlyniadau atgynyrchiol. Mae technegau homogeneiddio yn cynnwys:

Homogeneiddio mecanyddol: Cymysgu samplau solet neu led-solid gan ddefnyddio stirrer neu homogenizer.

Homogeneiddio ultrasonic:Cymhwyso uwchsain i wasgaru gronynnau o fewn sampl hylif.

Yn dibynnu ar y crynodiad disgwyliedig o ddadansoddiadau, efallai y bydd angen gwanhau neu ganolbwyntio samplau. Gellir cyflawni hyn trwy:

Gwanhau:Gwanhewch y sampl i'r crynodiad a ddymunir gan ddefnyddio'r un toddydd â'r cyfnod symudol.

Crynodiad:Gellir canolbwyntio dadansoddiadau gan ddefnyddio technegau fel anweddu neu echdynnu cyfnod solet (SPE).

Mae hidlo yn hanfodol i gael gwared ar fater gronynnol a all glocsio colofnau HPLC. Mae dulliau hidlo cyffredin yn cynnwys ：

Hidlo pilen:HarferwchHidlwyr 0.2µm neu 0.45µmi gael gwared ar ronynnau. Yn nodweddiadol defnyddir hidlwyr polyethersulfone (PES) neu neilon.

Prefiltration:Ar gyfer samplau sydd â chynnwys gronynnau uchel, gall rhagflaenu trwy hidlydd maint mandwll mwy atal clocsio.


50 Cwestiynau Cyffredin Am Hidlau Chwistrellau, gwnewch yn siŵr eich bod yn edrych ar yr erthygl addysgiadol hon: Pwnc "hidlydd chwistrell” 50 Cwestiynau Cyffredin

Ystyriwch sefydlogi'ch sampl i atal diraddio'r dadansoddwr.

Addasiad pH:Gall addasu'r pH helpu i sefydlogi rhai dadansoddiadau. Er enghraifft, efallai y bydd angen asideiddio cyfansoddion asidig i atal diraddio.

Ychwanegion:Gall ychwanegu sefydlogwyr neu gadwolion helpu i gynnal cyfanrwydd sampl yn ystod y storfa a dadansoddi.

Mae'n bwysig dewis y toddydd cywir i doddi'ch sampl a sicrhau cydnawsedd â'ch system HPLC. Ystyriwch y canlynol:

Polaredd Toddyddion:Er mwyn diddymu'n llwyr, rhaid i'r toddydd gyd -fynd â pholaredd y dadansoddwr.

Cydnawsedd Cyfnod Symudol: Defnyddiwch doddydd sy'n gydnaws â'r cam symudol i leihau ymyrraeth bosibl.

7. Paratoi Safonau

Mae paratoi safonau graddnodi yn hanfodol i feintioli dadansoddwr mewn sampl. Mae hyn yn cynnwys:

Paratoi Cromlin Graddnodi:Paratowch gyfres o grynodiadau hysbys o'r dadansoddwr i sefydlu cromlin raddnodi i'w meintioli.

Defnyddiwch yr un toddydd:Er mwyn cynnal cysondeb, paratowch eich safonau bob amser gan ddefnyddio'r un toddydd ac amodau â'ch samplau.

Dilynwch Weithdrefnau Gweithredu Safonol (SOPs):Sefydlu a chadw at SOPs ar gyfer paratoi sampl i sicrhau cysondeb ac atgynyrchioldeb.

Defnyddio adweithyddion a thoddyddion o ansawdd uchel:Defnyddiwch doddyddion gradd HPLC ac adweithyddion purdeb uchel bob amser i leihau halogiad.

Cadwch eich gweithle yn lân:Cadwch eich ardal baratoi sampl yn lân ac yn drefnus i leihau'r risg o halogi.

Dogfennu popeth:Cadwch gofnodion manwl o'ch gweithdrefnau paratoi sampl, gan gynnwys unrhyw wyriadau oddi wrth brotocolau safonol.

Dilysu Dulliau:Dilysu dulliau paratoi sampl yn rheolaidd i sicrhau eu bod yn darparu canlyniadau dibynadwy ac atgynyrchiol.

Siâp brig gwael:Os yw copaon yn eang neu'n gynffon, gall hyn ddynodi diddymiad anghyflawn neu bresenoldeb gronynnau. Sicrhewch fod eich sampl wedi'i chymysgu a'i hidlo'n drylwyr.

Copaon Ghost:Gall copaon ysbrydion gael eu hachosi gan amhureddau yn y toddydd neu'r sampl, defnyddio toddyddion purdeb uchel a sicrhau bod yr holl lestri gwydr ac offer yn lân.

Sensitifrwydd Isel:Os yw sensitifrwydd yn isel, ystyriwch optimeiddio'ch dull echdynnu neu gynyddu crynodiad eich dadansoddwr.

Clocsio colofn:Gall clocsio aml nodi bod eich sampl yn cynnwys gormod o ronynnau neu nad yw'n cael ei hidlo'n ddigonol. Ail-werthuso'ch proses hidlo ac ystyried cyn-hidlo.

Canlyniadau anghyson:Gall amrywiad mewn canlyniadau ddeillio o baratoi sampl anghyson. Safonwch yr holl weithdrefnau a sicrhau bod personél sy'n ymwneud â pharatoi sampl wedi'u hyfforddi'n iawn.

Wrth i ofynion dadansoddol gynyddu, mae labordai yn mabwysiadu technegau paratoi sampl mwy datblygedig i wella effeithlonrwydd a chywirdeb:

Mae SPE yn dechneg a ddefnyddir yn helaeth sy'n caniatáu ar gyfer echdynnu dadansoddiadau o fatricsau cymhleth yn ddetholus. Mae'n cynnwys pasio sampl hylif trwy ddeunydd adsorbent solet sy'n cadw'r dadansoddwr targed wrth ganiatáu i amhureddau basio trwyddo.

Mae Lle yn dechneg sy'n gwahanu dadansoddiadau yn seiliedig ar eu hydoddedd mewn dau hylif na ellir ei drin. Mae'r dull hwn yn effeithiol wrth wahanu cyfansoddion â gwahanol bolaredd ac fe'i defnyddir yn aml mewn dadansoddiad amgylcheddol a fferyllol.

Mae Quechers yn ddull poblogaidd ar gyfer paratoi samplau bwyd ac amgylcheddol sy'n cyfuno'r camau echdynnu a glanhau i mewn i un broses, gan ei gwneud yn effeithlon ac yn gost-effeithiol.

Gellir gwella trwybwn ac atgynyrchioldeb yn sylweddol trwy systemau paratoi sampl awtomataidd, a all gyflawni tasgau fel gwanhau, hidlo, a SPE heb fawr o ymyrraeth ddynol, a thrwy hynny leihau'r risg o wallau.


Am wybod mwy am baratoi sampl HPLC, gwiriwch yr erthygl hon: Datrysiadau paratoi sampl HPLC ar gyfer y canlyniadau gorau

Mae paratoi sampl HPLC yn gam hanfodol a all effeithio'n sylweddol ar gywirdeb a dibynadwyedd canlyniadau dadansoddol. Trwy ddilyn arferion gorau, defnyddio technegau priodol, a mynd i'r afael â phroblemau cyffredin, gall labordai wneud y gorau o'r broses baratoi sampl trwy fabwysiadu technegau a thechnolegau uwch wrth i anghenion dadansoddol esblygu. Bydd awtomeiddio yn gwella ymhellach effeithlonrwydd ac effeithiolrwydd dadansoddiadau HPLC. Mae paratoi sampl yn iawn nid yn unig yn gwella ansawdd y canlyniadau, ond hefyd yn amddiffyn y system HPLC, gan sicrhau dibynadwyedd a pherfformiad tymor hir.