Mae dewis y byffer cywir ar gyfer eich cam symudol HPLC yn hanfodol i gyflawni'r gwahaniad a'r dadansoddiad gorau posibl o'ch samplau. Mae byfferau yn helpu i gynnal pH sefydlog, sy'n hanfodol ar gyfer rheoli cyflwr ionization eich dadansoddiadau, gan effeithio ar eu hamser cadw a'u siâp brig. Isod mae trosolwg manwl o sut i ddewis y byffer gorau ar gyfer eich cais HPLC.

Ydych chi'n gwybod am baratoi sampl HPLC? Cliciwch yr erthygl hon i ddysgu mwy: “Popeth y mae angen i chi ei wybod am baratoi sampl HPLC”

Pwysigrwydd dewis byffer

Mae byffer yn ddatrysiad nad yw pH yn newid ar ôl ychwanegu ychydig bach o asid neu sylfaen. Yn seiliedig ar eu cyfansoddiad, gellir dosbarthu byfferau naill ai'n asidig neu'n sylfaenol. Mae effeithiolrwydd byffer yn cael ei bennu gan ei PKA, a ddylai yn ddelfrydol fod o fewn ± 1 pH uned i'r pH cam symudol a ddymunir ar gyfer y capasiti byffro gorau posibl.

Ffactorau allweddol i'w hystyried

Ystod 1.ph: Dylai pH y cyfnod symudol fod o leiaf 2 uned pH i ffwrdd o PKA y dadansoddwr. Mae hyn yn helpu i atal ionization dadansoddiadau asidig neu sylfaenol, gan wneud y mwyaf o gadw ar y golofn. Er enghraifft, os yw'r dadansoddwr yn asid gwan gyda PKA o 4.5, byddai defnyddio cyfnod symudol gyda pH tua 2.0 yn ei gadw mewn cyflwr heb ïoneiddio, gan wella cadw.

Math 2.Buffer: Mae byfferau cyffredin a ddefnyddir yn HPLC yn cynnwys:

Buffers Ffosffad: Yn effeithiol yn yr ystod pH o 2.0 i 8.0, defnyddir byfferau ffosffad yn helaeth oherwydd eu sefydlogrwydd a'u cydnawsedd â llawer o ddadansoddiadau. Maent yn arbennig o addas ar gyfer cymwysiadau LC-UV.

Byfferau asetad: Mae'r rhain hefyd yn boblogaidd ar gyfer profion LC-UV a gellir eu defnyddio mewn ystodau pH tebyg i byfferau ffosffad.

Byfferau cyfnewidiol: Ar gyfer cymwysiadau LC-MS, mae'n well gan byfferau cyfnewidiol fel fformad, asetad ac amoniwm bicarbonad oherwydd gellir eu tynnu'n hawdd yn ystod y broses sbectrometreg màs.

Crynodiad 3.Buffer: Mae crynodiad cychwynnol nodweddiadol ar gyfer byfferau yn HPLC rhwng 25-50 mm. Gall crynodiadau uwch wella siâp ac effeithlonrwydd brig ond gallant hefyd arwain at wlybaniaeth wrth eu cymysgu â thoddyddion organig. Fe'ch cynghorir i gadw'r crynodiad byffer o dan 25 mm er mwyn osgoi cymhlethdodau.

Purdeb 4.Chemical: Defnyddiwch byfferau gradd cromatograffig purdeb uchel bob amser i atal halogiad a sicrhau canlyniadau dibynadwy. Gall amhureddau arwain at ryngweithio annisgwyl ac amrywioldeb yn yr amseroedd cadw.

Effeithiau Tymheredd: Gall y tymheredd ddylanwadu ar pH toddiannau byffer. Mae'n bwysig paratoi a storio byfferau ar dymheredd cyson i gynnal eu heffeithiolrwydd.

Am wybod 50 ateb am ffiolau HPLC, gwiriwch yr erthygl hon: 50 Cwestiynau a ofynnir amlaf ar ffiolau HPLC

Awgrymiadau Ymarferol ar gyfer Paratoi Clustogi

Dull Paratoi: Gellir paratoi byfferau trwy gymysgu symiau cyhydedd eu cydrannau asidig a sylfaenol neu drwy ditradu toddiant sylfaenol ag asid. Ceisiwch osgoi addasu'r pH ar ôl ychwanegu toddyddion organig, oherwydd gall hyn arwain at ganlyniadau anghyson.

Datrysiadau Ffres: Paratowch atebion byffer ffres yn rheolaidd i leihau twf microbaidd a diraddio cydrannau, a all effeithio ar berfformiad cromatograffig.

Osgoi cyrydiad: Gall rhai byfferau, fel sitrad, gyrydu cydrannau dur gwrthstaen systemau HPLC. Sicrhewch fod y system yn fflysio yn drylwyr ar ôl defnyddio byfferau o'r fath i atal difrod.

Nghasgliad

Mae dewis y byffer cywir ar gyfer eich cam symudol HPLC yn hanfodol i sicrhau canlyniadau dibynadwy ac atgynyrchiol. Ystyriwch pH, math o byffer, crynodiad a phurdeb wrth ddewis. Trwy ddilyn y canllawiau hyn, gallwch wneud y gorau o'ch dull HPLC i wahanu a dadansoddi'ch samplau yn effeithiol.

Am wybod pris ffiolau HPLC, gwiriwch yr erthygl hon: Pris ffiolau HPLC: 50 Cwestiynau Mwyaf Cyffredin

Blaenorol:

Sut i ddefnyddio tiwbiau prawf COD yn iawn ar gyfer profi ansawdd dŵr?

Nesaf:

Sut i osgoi hidlydd arloesol mewn hidlwyr chwistrell