La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est une technique analytique clé utilisée dans les laboratoires dans des domaines aussi divers que les produits pharmaceutiques, les sciences de l'environnement et la sécurité alimentaire. Dans le monde HPLC, il existe deux catégories principales: le HPLC analytique et le HPLC préparatif. Bien que les deux techniques utilisent des principes similaires pour séparer les composés, ils sont utilisés à des fins différentes et ont des paramètres de fonctionnement différents. Ce blog explorera les différences entre le HPLC analytique et préparatif, y compris leur objectif, leur échelle de fonctionnement, son équipement et leur applications.
Vous voulez connaître l'infor complet sur les flacons HPLC, veuillez consulter cet article: Encyclopédie des flacons HPLC
Comprendre HPLC analytique
Définition et but
Le HPLC analytique se concentre principalement sur la séparation et l'identification des composés dans un échantillon. L'objectif principal est d'obtenir des informations qualitatives et quantitatives sur les composants présents dans un mélange. Le HPLC analytique est souvent utilisé pour:
Analyse qualitative: identification des composantes d'un échantillon.
Analyse quantitative: déterminer la concentration d'un composé spécifique dans un échantillon.
Échelle de fonctionnement
Le HPLC analytique fonctionne à plus petite échelle, impliquant généralement des injections d'échantillon de microliter. Les volumes utilisés se trouvent généralement dans la plage de 1 à 100 µl, ce qui permet d'analyser plusieurs échantillons en un seul exécution. Cette petite échelle est idéale pour les tests de routine et le contrôle de la qualité.
Taille de la colonne et taille des particules
Les colonnes utilisées dans le HPLC analytique sont généralement de faible diamètre, généralement autour de 4,6 mm, et sont remplies de petites particules de phase stationnaire (3-5 μm). Cette configuration permet une résolution élevée et une séparation des composés efficaces, adaptée à une analyse détaillée.
Méthodes de détection
Le HPLC analytique utilise une variété de méthodes de détection, notamment les UV-visible, la fluorescence et la spectrométrie de masse. Le choix du détecteur dépend de la nature de l'analyte et des exigences spécifiques de l'analyse. Des détecteurs non destructeurs sont souvent utilisés pour s'assurer que l'échantillon peut être analysé sans perte significative.
Vous voulez connaître 50 réponses sur les flacons HPLC, veuillez consulter cet article: 50 questions les plus fréquemment posées sur les flacons HPLC
Comprendre le HPLC préparatif
Définition et but
Le HPLC préparatif, en revanche, vise à séparer et à purifier des composés spécifiques d'un mélange. L'objectif principal est d'isoler des quantités suffisantes du composé cible pour une analyse ou une utilisation plus approfondie. Préparatif
HPLC est couramment utilisé pour les applications suivantes:
Isolement des composés: extraction et purification de composés spécifiques pour la recherche ou les applications industrielles.
Préparation des échantillons: préparation d'échantillons pour une analyse ou une formulation ultérieure.
Échelle d'opérations
Le HPLC préparatif est effectué à plus grande échelle que le HPLC analytique. Les volumes d'échantillons peuvent aller de quelques millilitres à plusieurs litres, selon le rendement attendu du composé cible. Cette plus grande échelle permet de collecter des quantités suffisantes de matériau purifié pour une utilisation ultérieure.
Taille de la colonne et taille des particules
Les colonnes utilisées pour le HPLC préparatoire sont significativement plus grandes, allant généralement de 20 mm à 100 mm ou plus de diamètre. Les colonnes sont remplies de particules de phase stationnaire plus grandes (généralement 10-20 µm) pour augmenter les débits et accueillir des volumes d'échantillons plus grands. Cette conception aide à réduire la pression du dos et à réaliser une séparation efficace des composés.
Méthodes de détection
Dans le HPLC préparatif, les méthodes de détection peuvent différer de celles utilisées dans le HPLC analytique. Bien que les détecteurs non destructeurs soient toujours courants, les systèmes préparatifs utilisent souvent des détecteurs capables de collecter des fractions basées sur un profil d'élution. Cela permet à des composés spécifiques d'être isolés lorsqu'ils s'éteignent de la colonne.
Vous voulez en savoir plus sur l'application des flacons de chromatographie, veuillez consulter cet article:Cinq méthodes de nettoyage pour les flacons HPLC
Différences clés entre le HPLC analytique et préparatif
|
Fonctionnalité
|
HPLC analytique
|
HPLC préparatif
|
|
But
|
Analyse qualitative et quantitative
|
Isolement et purification des composés
|
|
Échelle de fonctionnement
|
Petite échelle (volumes µl)
|
Grande échelle (volumes ml à l)
|
|
Dimensions de la colonne
|
Plus petit diamètre (4,6 mm)
|
Plus grand diamètre (20-100 mm)
|
|
Taille des particules
|
Particules plus petites (3-5 µm)
|
Particules plus grandes (10-20 µm)
|
|
Débit
|
Débit inférieur (0,1-5 ml \ / min)
|
Débit plus élevé (10-200 ml \ / min)
|
|
Méthodes de détection
|
Détecteurs non destructifs (UV, MS)
|
Collection de fraction basée sur le profil d'élution
|
Choisir entre HPLC analytique et préparatif
Lors du choix entre le HPLC analytique et préparatif, considérez les facteurs suivants:
Objectif de l'analyse: Déterminer si l'objectif principal est d'analyser les composés qualitativement et quantitativement ou d'isoler des composés spécifiques pour une utilisation ultérieure.
Quantité d'échantillon: évaluer la quantité d'échantillon disponible. Si une petite quantité d'échantillon est disponible, le HPLC analytique peut être plus approprié. Inversement, si une grande quantité d'échantillon est requise, le HPLC préparatif est un meilleur choix.
Pureté et rendement requis: considérez la pureté et le rendement requis du composé cible. Le HPLC préparatif vise à maximiser la récupération d'un composé spécifique, tandis que le HPLC analytique se concentre sur la fourniture d'informations détaillées sur la composition de l'échantillon.
Ressources et équipements: évaluer les ressources disponibles, y compris l'équipement et le budget. Les systèmes HPLC préparatifs ont tendance à être plus chers et nécessitent plus d'investissement dans l'équipement et les coûts d'exploitation.
Vous souhaitez maîtriser la préparation des échantillons HPLC? Consultez cet article:Solutions de préparation des échantillons HPLC pour de meilleurs résultats.
Conclusion
Le HPLC analytique et préparatif est des techniques précieuses dans le domaine de la chromatographie, et chacune a des utilisations différentes en fonction des besoins des chercheurs et de l'industrie. Bien que le HPLC analytique soit idéal pour l'analyse détaillée et la quantification des composés, le HPLC préparatif est essentiel pour isoler et purifier des composés spécifiques pour d'autres applications. Comprendre les différences entre ces deux techniques aidera les chercheurs à prendre des décisions éclairées, à optimiser leurs flux de travail et à obtenir des résultats précis et fiables dans leurs analyses. Alors que la technologie HPLC continue de progresser, les méthodes analytiques et préparatives resteront une partie intégrante des recherches scientifiques réussies de toutes sortes.
Anglais
Chinois
