Hágæða vökvaskiljun (HPLC) er lykilgreiningartækni sem notuð er á rannsóknarstofum á sviðum eins fjölbreytt og lyf, umhverfisvísindi og matvælaöryggi. Innan HPLC heimsins eru tveir meginflokkar: greiningar HPLC og undirbúning HPLC. Þó að báðar aðferðirnar noti svipaðar meginreglur til að aðgreina efnasambönd, eru þau notuð í mismunandi tilgangi og hafa mismunandi breytur í rekstri. Þetta blogg mun kanna muninn á greiningar- og undirbúnings HPLC, þar með talið tilgangi þeirra, umfangi rekstrar, búnaðar og forrita.

Langar að vita fullar upplýsingar um hettuglös HPLC, vinsamlegast athugaðu þessa grein: Alfræðiorðabók HPLC hettuglös

Að skilja greiningar HPLC

Skilgreining og tilgangur

Greiningar HPLC beinist fyrst og fremst að því að aðgreina og bera kennsl á efnasambönd í sýni. Aðalmarkmiðið er að fá eigindlegar og megindlegar upplýsingar um íhlutina sem eru til staðar í blöndu. Greiningar HPLC er oft notað fyrir:

Eigindleg greining: Að bera kennsl á hluti sýnisins.

Magngreining: Ákvörðun styrks tiltekins efnasambands í sýni.

Umfang rekstrar

Greiningar HPLC starfar í minni mælikvarða, sem venjulega felur í sér microliter sýnishorn. Rúmmál sem notað er er venjulega á 1 til 100 | il svið, sem gerir kleift að greina mörg sýni í einni keyrslu. Þessi litli mæli er tilvalinn fyrir venjubundnar prófanir og gæðaeftirlit.

Súlustærð og agnastærð

Súlurnar sem notaðar eru við greiningar HPLC eru venjulega litlar í þvermál, venjulega um 4,6 mm, og eru pakkaðir með litlum kyrrstæðum fasa agnum (3-5 μm). Þessi stilling gerir kleift að fá háan upplausn og skilvirkan aðskilnað efnasambands, sem hentar til ítarlegrar greiningar.

Greiningaraðferðir

Greiningar HPLC notar margvíslegar uppgötvunaraðferðir, þar með talið UV-sýnilegar, flúrljómun og massagreining. Val á skynjara fer eftir eðli greiniefnisins og sértækum kröfum greiningarinnar. Oft er notaður skynjari sem ekki er eyðileggjandi til að tryggja að hægt sé að greina sýnið án verulegs taps.

Langar að vita 50 svör um hettuglös HPLC, vinsamlegast athugaðu þessa grein: 50 Algengustu spurningarnar um hettuglös HPLC

Að skilja undirbúning HPLC

Skilgreining og tilgangur

Undirbúningur HPLC miðar aftur á móti að aðgreina og hreinsa sérstök efnasambönd frá blöndu. Meginmarkmiðið er að einangra nægilegt magn af markefnasambandinu til frekari greiningar eða notkunar. Undirbúningur

HPLC er almennt notað fyrir eftirfarandi forrit:

Samsett einangrun: Útdráttur og hreinsun sértækra efnasambanda fyrir rannsóknir eða iðnaðarforrit.

Undirbúningur sýnisins: Undirbúningur sýna til síðari greiningar eða samsetningar.

Umfang rekstrar

Undirbúningur HPLC er framkvæmdur í stærri skala en greiningar HPLC. Sýnishorn getur verið á bilinu nokkrar millilítra til nokkurra lítra, allt eftir væntanlegri afrakstri markefnasambandsins. Þessi stærri mælikvarði gerir kleift að safna nægu magni af hreinsuðu efni til frekari notkunar.

Súlustærð og agnastærð

Súlurnar sem notaðar eru við undirbúning HPLC eru verulega stærri, venjulega á bilinu 20 mm til 100 mm eða stærri í þvermál. Súlurnar eru pakkaðar með stærri kyrrstæðum fasa agnum (venjulega 10-20 pm) til að auka rennslishraða og rúma stærra sýnishorn. Þessi hönnun hjálpar til við að draga úr bakþrýstingi og ná fram skilvirkum aðskilnaði efnasambanda.

Greiningaraðferðir

Í undirbúningi HPLC geta uppgötvunaraðferðir verið frábrugðnar þeim sem notaðar eru við greiningar HPLC. Þrátt fyrir að skynjari sem ekki eyðileggi séu enn algengir, nota undirbúningskerfi oft skynjara sem geta safnað brotum út frá skolunarsnið. Þetta gerir kleift að einangra sérstök efnasambönd þegar þau skolast úr súlunni.

Langar að vita meira um beitingu litskiljunar hettuglös, vinsamlegast athugaðu þessa grein:Fimm hreinsunaraðferðir fyrir hettuglös HPLC

Lykilmunur á greiningar- og undirbúning HPLC

Lögun

Greiningar HPLC

Undirbúningur HPLC

Tilgangur

Eigindleg og megindleg greining

Einangrun og hreinsun efnasambanda

Umfang rekstrar

Lítil stíl (µl bindi)

Stórfelld (ml til l bindi)

Dálkavíddir

Minni þvermál (4,6 mm)

Stærri þvermál (20-100 mm)

Agnastærð

Minni agnir (3-5 µm)

Stærri agnir (10-20 µm)

Rennslishraði

Lægri rennslishraði (0,1-5 ml \ / mín.

Hærri rennslishraði (10-200 ml \ / mín.

Greiningaraðferðir

Ekki eyðileggjandi skynjari (UV, MS)

Brotasöfnun byggð á skolunarsniðinu

Velja á milli greiningar og undirbúnings HPLC

Þegar þú velur á milli greiningar og undirbúnings HPLC skaltu íhuga eftirfarandi þætti:

Tilgangur greiningar: Ákveðið hvort meginmarkmiðið er að greina efnasambönd með eigin raun og megindum eða einangra sérstök efnasambönd til frekari notkunar.

Magn sýnisins: Metið magn sýnisins sem til er. Ef lítið magn af sýni er tiltækt getur greiningar HPLC verið heppilegra. Aftur á móti, ef mikið magn af sýni er krafist, er undirbúning HPLC betri kostur.

Nauðsynlegur hreinleiki og ávöxtun: Hugleiddu nauðsynlegan hreinleika og afrakstur markefnasambandsins. Undirbúningur HPLC miðar að því að hámarka endurheimt tiltekins efnasambands en greiningar HPLC leggur áherslu á að veita nákvæmar upplýsingar um samsetningu sýnisins.

Auðlindir og búnaður: Metið fyrirliggjandi úrræði, þ.mt búnað og fjárhagsáætlun. Undirbúningur HPLC kerfi hafa tilhneigingu til að vera dýrari og þurfa meiri fjárfestingu í búnaði og rekstrarkostnaði.

Hefurðu áhuga á að ná tökum á undirbúningi HPLC sýnisins? Skoðaðu þessa grein:HPLC sýnishorn lausnir fyrir besta árangur.

Niðurstaða

Bæði greiningar- og undirbúnings HPLC eru dýrmæt tækni á sviði litskiljun og hver og einn hefur mismunandi notkun eftir þörfum vísindamanna og iðnaðar. Þó að greiningar HPLC sé tilvalið fyrir ítarlega greiningu og magngreining efnasambanda, er undirbúning HPLC nauðsynleg til að einangra og hreinsa sérstök efnasambönd fyrir frekari forrit. Að skilja muninn á þessum tveimur aðferðum mun hjálpa vísindamönnum að taka upplýstar ákvarðanir, hámarka vinnuflæði þeirra og fá nákvæmar og áreiðanlegar niðurstöður í greiningum þeirra. Þegar HPLC tækni heldur áfram að komast áfram, munu bæði greiningar- og undirbúningsaðferðir vera órjúfanlegur hluti af árangursríkum vísindarannsóknum af öllum gerðum.

Fyrri:

Hvert er hlutverk AutoSsampler hettuglös í LC-MS greiningu?

Næst:

Static vs. Dynamic Headspace GC: Að skilja muninn

Merki: Hplcanalysis HPLCVIALS HPLCSampleIntegrity HPLCVialSproblems HPLC-AutoSimpler-Vials

Fyrirspurn