HPLC sýnishorn af undirbúningi fyrir besta árangur

Fjögur skref fyrir undirbúning HPLC sýnisins

Skref 1. Greining á vatnslausnum

Skref 2. Undirbúningur staðla

Að undirbúa staðla fyrir auðkenningu og magngreiningu getur verið leiðinlegt og tímafrekt ferli. Það er erfitt að nota fast efni þannig að hægt er að nota fyrirfram skilgreint rúmmál leysiefnis og úrgangur vegna villu getur verið kostnaðarsamt - sérstaklega þegar þú vinnur með lyfjum. Aðrir þættir eins og hitastig flækja staðalframleiðslu enn frekar. Hitasveiflur breyta þéttleika leysisins og stuðla að stórkostlegum mismun á styrk.



Með því að nota jafnvægi sem gerir vigtunarnákvæmni allt að nokkrum aukastöfum og gera sjálfvirkan ferlið með því að tengja jafnvægið við leysisskammta tryggir hæstu nákvæmni. Notkun hugbúnaðar eins og YAPP16 skammta Q-App gerir kleift að gera sjálfvirka útreikninga og þyngdaraflseftirlit með mældum gildum. Að skjalfesta hitastig og þéttleika leysisins tryggir einnig mjög nákvæman styrk, sérstaklega þegar þeir undirbúa staðla á næstu dögum. Beinn gagnaflutningur frá YAPP16 vigtarforritinu í Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 litskiljun gagnakerfis (CDS) er valkostur fyrir pappírslaus gagna meðhöndlun með fullum gögnum.

Skref 3. komdu aftur að grunnatriðum með góðri pipetting

Of oft gleymast mikilvægi nákvæmrar og nákvæmrar pipetings og tekin sem sjálfsögðum hlut. Notendahæfileikastig og reynsla getur haft veruleg áhrif á viðkvæmar greiningar eins og HPLC. Að velja rétta pípettu getur dregið úr mannlegum mistökum og tilheyrandi kostnaði við sóun á leysi.



Vélrænar pípettur með hljóðstyrknum bjóða upp á einfalda lausn til að koma í veg fyrir slysni breytinga, en flóknari rafrænar pípettur útrýma breytileika notenda til að skila stöðugt nákvæmu magni. Pipettutoppurinn er einnig mikilvæg smáatriði sem þarf að hafa í huga fyrir HPLC greiningar. Lítil ráð um varðveislu er best þegar unnið er með leysiefni af mismunandi seigju, þar sem þau hámarka bata sýnisins. Sýnismengun getur einnig komið fram vegna útskolunar frá pípettu toppnum. Sem slík varðveita ráð með mikilli efnaþol.

Skref 4. síu fyrir nákvæmni og langlífi

Að gæta frekari varúðar við að sía sýni fyrir greiningu bætir áreiðanleika og getur lengt líftíma HPLC dálksins með því að koma í veg fyrir stífluáhrif. Sprautusíur eru einföld, hröð lausn til að sía sýni fyrir súlu litskiljun. Eins og með ráðleggingar um pípettu, þá eru leysir sem notaðir eru í HPLC nauðsynlegar síur til að koma í veg fyrir útskolun og mengun sýnisins.

Sellulósa himnur eru ónæmir fyrir dímetýlsúlfoxíði (DMSO), amíðum, ketónum, ester og eter efnasamböndum. Fyrir sérstaklega hörð leysiefni koma óhúðaðar polyethersulfone (PTFO) himnur í veg fyrir útskolun og mengun sýnisins. Sísýni verður mjög tímafrek þegar sýnishornafjöldi eykst. Fjölsýni síunareiningar, svo sem Claristep® síunarkerfið, geta unnið úr sýnum án sprautur og hraðskreiðar undirbúning sýnis án þess að fórna gæðum.

Fimm vandamál sem þú þarft að huga að！

1. Hver eru stærstu vandamálið með sýnishorni sem blasa við rannsóknarstofum?

Rannsóknarstofur eru undir auknum þrýstingi hvað varðar tíma og kostnað og fjalla oft ekki aðeins um mikinn fjölda sýna heldur einnig sýnishorn af mismunandi náttúru. Undirbúningur sýnisins er svæði þar sem lúmskur munur á sýnishornum eða undirbúningsaðferðum sýnisins og efni sem notuð er getur haft áhrif á niðurstöðurnar sem fengust. Að tryggja eindrægni milli efnanna í síunarbúnaðinum og leysinum getur lágmarkað vandamál; Til dæmis eru stig útdráttarsambanda sem gætu truflað greiningar á greiniefnum.

2. Hvað gerist þegar sýnishorn prep fer úrskeiðis?

Áður en greiningaraðstoð vökvaskiljun (HPLC) er greinandi afkastamikil, eru sýni framleidd með ýmsum aðferðum, sem allar geta haft áhrif á greiningarárangur með því að hafa áhrif á sýnið sem sprautað var í kerfið. Árangursrík sýnishorn getur leitt til minnkunar á dálkalífi, auknum þjónustukröfum fyrir íhluti, mögulegan niðurbrot tækjabúnaðar, minnkun á skilvirkni skilninga á skilningi og fjölföldun og mörgum öðrum vandamálum.

3. Við fyrstu sýn virðist síun eins og einfalt ferli ...

Þrátt fyrir að síun sé að því er virðist lítill hluti af stóru verkferli geta áhrif þess að velja rétta síu fyrir tiltekna umsókn verið veruleg. Til dæmis geta aðferðir sem fjarlægja ekki nægilegt svifryksefni leitt til þess að súlablokkun er. Óviðeigandi val á undirbúningstækjum sýnishorna gæti, undir vissum kringumstæðum, losað útdráttarsambönd í sýnið, bindið greiningar sem vekja áhuga eða kynnt villur með sýnistapi - öll hafa áhrif á gæði og fjölföldun niðurstaðna sem fram komu. Ef þú ert fullviss um að rekstrarvörur sía þinna stuðla ekki að villum sem krefjast endurvinnslu eða rannsókna á rótum, muntu spara peninga og veita þér hugarró.

4. Hver eru algengasta sýnishornið „mistakast“?

Rangt val á síuhimnu er eitt vandamál sem við sjáum mikið. Málefni geta birst sem óhefðbundnar tindar frá útdráttarvörum, sem geta truflað greiningar á greiningum sem vekja áhuga. Ósamrýmanleiki síumiðils með sýnishorni eða leysi hvað varðar efnaþol er ekki eingöngu takmarkað við upplausnaráhrif á síumiðilinn. Leysir geta valdið smá bólgu á fjölliða himnaefni þegar þau eru ekki að fullu samhæfð, sem aftur getur haft áhrif á afköst síu, sem leiðir til árangurslausrar hreinsunar á sýnunum. Ein leið til að taka á þessu máli er með því að velja himnu sem er í meginatriðum samhæfð bæði vatnskenndum og lífrænum leysum. Fyrir dæmigerða undirbúning HPLC sýnisins eru sprauta og sprautulausar síur sem innihalda endurnýjuð sellulósa himnur góður kostur vegna breiðs samhæfni þeirra.

Notkun síubúnaðar sem er stærri en þörf er á hljóðstyrknum er önnur algeng gildra. Notkun of stórra síubúnaðar þýðir að lítið magn sýnisins verður áfram í síunni, jafnvel eftir að varúðarráðstafanir eru gerðar til að reka út eins mikið og mögulegt er.

5. Hverjir eru kostir þess að taka síunarskrefið alvarlega?

Grundvallarmarkmið flestra rannsóknarstofa sem stunda greiningarpróf er að þróa stöðuga ferla sem renna stoðum undir stöðugar niðurstöður - og þurfa stöðuga síun. Val á síunarbúnaði með hægri svitaholastærð og varðveislueinkenni hjálpar til við að tryggja árangursríka fjarlægingu agna, en val á viðeigandi stærð og hönnun síueiningar getur hjálpað til við að lágmarka sýnishorn. Góð síun hjálpar einnig til við að vernda súluna og lengir mögulega líftíma bæði inndælingartækisins og súlunnar.

Niðurstaða

HPLC er dýrmæt tækni fyrir lífvísindi og lífeðlisfræðirannsóknir þar sem það skilar nákvæmum, endurtakanlegum árangri. Þessi nákvæmni fer eftir heiðarleika HPLC sýnisins og besta leiðin til að tryggja hágæða sýni er að byrja með bestu tækin. Með lausnum fyrir útfjólubláu vatn, venjuleg undirbúningur, pípettur, ábendingar og síur, greinir HPLC sýnishornið undirbúningslínu fyrir hvert smáatriði. Sjálfvirkar lausnir og hugbúnaður hjálpa einnig til við að hagræða undirbúningi sýnisins til að skila hreinum sýnum fyrir hreinar niðurstöður.

Fleiri umræður um HPLC sýnishornsleyfislausnir eru fagnaðar!