Rozwiązania przygotowania próbki HPLC dla najlepszych wyników

Cztery etapy przygotowania próbki HPLC

Krok 1. Analiza roztworów wodnych

Krok 2. Przygotowanie standardów

Przygotowanie standardów do identyfikacji i kwantyfikacji złożonych może być żmudnym i czasochłonnym procesem. Dokładnie ważące ciało stałe, aby mogła być stosowana predefiniowana objętość rozpuszczalnika, jest trudna, a odpady z powodu błędu mogą być kosztowne - szczególnie podczas pracy z farmaceutykami. Inne czynniki, takie jak temperatura, dodatkowo komplikują standardowe przygotowanie. Fluktuacje temperatury zmieniają gęstość rozpuszczalnika i przyczyniają się do dramatycznych różnic w stężeniu.



Korzystanie z równowagi, która umożliwia dokładność ważenia do kilku miejsc dziesiętnych i automatyzację procesu poprzez połączenie salda z dozownikiem rozpuszczalnika gwarantuje najwyższą precyzję. Korzystanie z oprogramowania, takiego jak YAPP16 Dawkowanie Q-APP umożliwia automatyczne obliczenia i monitorowanie grawimetryczne zmierzonych wartości. Dokumentowanie temperatury i gęstości rozpuszczalnika zapewnia również bardzo dokładne stężenia, szczególnie przy przygotowaniu standardów w kolejne dni. Bezpośrednie transfer danych z aplikacji do ważenia YAPP16 do oprogramowania Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 System danych (CDS) jest opcją obsługi danych bez papieru z pełną integralnością danych.

Krok 3. Wróć do podstaw z dobrą pipetą

Znaczenie dokładnego i precyzyjnego pipetowania jest zbyt często pomijane i uważane za coś oczywistego. Poziom umiejętności i doświadczenie użytkownika mogą mieć znaczący implikacje dla wrażliwych analiz, takich jak HPLC. Wybór odpowiedniej pipety może zmniejszyć błąd ludzki i powiązane koszty zmarnowanych rozpuszczalników.



Mechaniczne pipety z blokadą głośności stanowią proste rozwiązanie do zapobiegania przypadkowym zmianom głośności, podczas gdy bardziej wyrafinowane elektroniczne pipety eliminują zmienność użytkownika, aby konsekwentnie dostarczać precyzyjne objętości. Wskazówka pipety jest również ważnym szczegółem do rozważenia dla analiz HPLC. Wskazówki dotyczące niskich retencji są najlepsze podczas pracy z rozpuszczalnikami o różnych lepkościach, ponieważ maksymalizują odzyskiwanie próbek. Zanieczyszczenie próbki może również wystąpić w wyniku wymywania z końcówki pipety. Jako takie, wskazówki z wysoką odpornością chemiczną zachowują integralność próbki.

Krok 4. Filtr dla dokładności i długowieczności

Dokonanie dodatkowej staranności filtrowania próbek przed analizą poprawia niezawodność i może przedłużyć żywotność kolumny HPLC, zapobiegając zatkaniu efektów. Filtry strzykawki są prostym, szybkim rozwiązaniem do filtrowania próbek przed chromatografią kolumnową. Podobnie jak w przypadku końcówek pipet, rozpuszczalniki stosowane w HPLC wymagają określonych filtrów, aby zapobiec wymywaniu i zanieczyszczeniu próbki.

Membrany celulozowe są odporne na dimetylosulfotlenku (DMSO), amidów, ketonów, estrowych i eterowych związków. W przypadku szczególnie ostrych rozpuszczalników niepowlekane błony polietalne (PTFO) zapobiegają wymywaniu i zanieczyszczeniu próbek. Filtracja próbki staje się bardzo czasochłonna, gdy wzrośnie liczba próbki. Jednostki filtracyjne z wieloma próbkami, takie jak system filtracji Claristep®, mogą przetwarzać próbki bez strzykawek i przygotowania próbek szybkiego, bez poświęcania jakości.

Pięć problemów, na które musisz zwrócić uwagę！

1. Jakie są największe problemy z przygotowaniem próbek, przed którymi stoją laboratoria?

Laboratoria są pod rosnącą presją pod względem czasu i kosztów, często zajmując się nie tylko dużej liczby próbek, ale także próbek o różnej naturze. Przygotowanie próbki jest obszarem, w którym subtelne różnice między typami próbek lub metodami przygotowania próbki i zastosowane materiały mogą wpłynąć na uzyskane wyniki. Zapewnienie kompatybilności między materiałami w urządzeniu filtracyjnym a rozpuszczalnikiem może zminimalizować problemy; Na przykład poziomy ekstrahowalnych związków, które mogą zakłócać wykrywanie analitów.

2. Co się stanie, gdy przygotowanie próbki pójdzie nie tak?

Przed zastosowaniem analitycznego wysokowydajnego chromatografii cieczowej (HPLC) próbki przygotowuje się próbkami różnych metod, z których wszystkie mogą wpływać na wyniki analityczne poprzez wpływ na próbkę wstrzykniętą do systemu. Nieefektywne przygotowanie próbek może prowadzić do zmniejszenia żywotności kolumn, zwiększonych wymagań serwisowych dla komponentów, potencjalnego przestoju oprzyrządowania, zmniejszenia wydajności i odtwarzalności separacji chromatograficznej oraz wielu innych problemów.

3. Na pierwszy rzut oka filtracja wydaje się prostym procesem ...

Chociaż filtracja jest pozornie niewielką częścią dużego przepływu pracy, wpływ wyboru odpowiedniego filtra dla danej aplikacji może być znaczny. Na przykład metody, które nie usuwają wystarczającej ilości cząstek stałych, mogą powodować blokowanie kolumn. Niewłaściwy wybór urządzeń do przygotowania próbki może, w pewnych okolicznościach, uwalniają ekstrahowalne związki do próbki, wiązać anality interesujące lub wprowadzać błędy poprzez utratę próbki - wszystkie wpływające na jakość i odtwarzalność obserwowanych wyników. Jeśli masz pewność, że Twoje materiały eksploatacyjne filtracji nie przyczyniają się do błędów wymagających przeróbki lub dochodzeń w zakresie przyczyny, zaoszczędzisz pieniądze i dasz sobie spokój.

4. Jakie są najczęstsze próbki „upadają”?

Niepoprawny wybór membrany filtra to jeden problem, który często widzimy. Problemy mogą pojawiać się jako obce piki z wyciągów, które mogą zakłócać wykrywanie interesujących analitów. Niezgodność pożywki filtracyjnej z próbką lub rozpuszczalnikiem pod względem odporności chemicznej nie ogranicza się wyłącznie do efektów rozpuszczania na pożywce filtracyjne. Rozpuszczalniki mogą powodować niewielkie obrzęk polimerowych materiałów błonowych, gdy nie jest w pełni kompatybilne, co z kolei może wpływać na wydajność filtracji, prowadząc do nieskutecznego oczyszczania próbek. Jednym ze sposobów rozwiązania tego problemu jest wybór membrany, która jest zasadniczo kompatybilna zarówno z rozpuszczalnikami wodnymi, jak i organicznymi. Dla typowego przygotowania próbki HPLC strzykawka i filtry bez strzykawki zawierające regenerowane błony celulozowe są dobrą opcją ze względu na ich szeroką kompatybilność rozpuszczalnika.

Zastosowanie urządzenia filtracyjnego, które jest większe niż potrzebne do przygotowanej głośności, jest kolejnym powszechnym pułapką. Zastosowanie zbyt dużych urządzeń filtracyjnych oznacza, że ​​niewielkie ilości próbki pozostaną w filtrze, nawet po podjęciu środków ostrożności w celu wydalenia w jak największym stopniu.

5. Jakie są zalety poważnego traktowania kroku filtracji?

Podstawowym celem większości laboratoriów zaangażowanych w testy analityczne jest opracowanie spójnych procesów, które leżą u podstaw spójnych wyników - i które wymagają spójnego filtrowania. Wybór urządzenia filtracyjnego o właściwej wielkości porów i charakterystyce retencji pomaga zapewnić skuteczne usuwanie cząstek stałych, podczas gdy wybór odpowiedniego rozmiaru i konstrukcji jednostki filtracyjnej może pomóc zminimalizować utratę próbki. Dobra filtracja pomaga również chronić kolumnę i potencjalnie rozszerza żywotność zarówno wtryskiwacza, jak i kolumny.

Wniosek

HPLC jest cenną techniką nauki o życiu i badań biofarmaceutycznych, ponieważ zapewnia dokładne, powtarzalne wyniki. Ta dokładność zależy od integralności próbki HPLC, a najlepszym sposobem na zapewnienie wysokiej jakości próbek jest rozpoczęcie od najlepszych narzędzi. Dzięki roztworom ultraurowej wody, standardowej przygotowania, pipet, końcówek i filtrów, linia przygotowania próbki HPLC uwzględnia każdy szczegół. Zautomatyzowane rozwiązania i oprogramowanie pomagają również usprawnić przygotowanie próbki w celu dostarczania czystych próbek w celu uzyskania czystych wyników.

Z zadowoleniem przyjmuje się więcej dyskusji na temat roztworów przygotowania próbek HPLC!