Все, що потрібно знати про підготовку зразків ВЕРХ

Підготовка зразка є критичним кроком в аналізі ВЕРХ з ряду причин.

Мінімізувати втручання:Зразки часто містять домішки та матричні компоненти, які можуть перешкоджати виявленню цільових аналітиків. Ефективні методи підготовки зразків можуть допомогти видалити ці небажані речовини та підвищити аналітичну точність.

Поліпшення відновлення аналіту:Правильна підготовка покращує відновлення аналіту та гарантує, що результати відображають фактичну концентрацію початкової вибірки. Це особливо важливо для аналізу слідів, де аналіти присутні в низьких концентраціях.

Посилена форма піку:Правильно підготовлені зразки допомагають утворювати симетричні та чітко визначені піки в хроматограмі. Це важливо для точного кількісного визначення. Неправильна підготовка зразків може призвести до пікового хвоста та розширення, що ускладнює інтерпретацію даних.

Захистіть вашу систему ВЕРХ:Забруднення у вашому зразку можуть пошкодити стовпці та інші компоненти у вашій системі ВЕРХ, що призводить до збільшення витрат на обслуговування та простою. Правильна підготовка зразків знижує ризик засмічення системи та зносу.

Перший крок у підготовці зразка - це правильно зібрати зразок. Сюди входить:

Використовуйте чисті контейнери:Завжди використовуйте чисті, інертні контейнери, щоб уникнути забруднення. Рекомендуються скляні або високоякісні пластикові контейнери.

Уникайте забруднення:Використовуйте рукавички та чисті інструменти, щоб запобігти забрудненню від шкірних та інших джерел.

Правильне маркування:Очевидно, що позначте зразки, щоб уникнути змішань та забезпечити відстеження.

Гомогенізація зразка забезпечує однорідність, що важливо для відтворюваних результатів. Методи гомогенізації включають:

Механічна гомогенізація: змішування твердих або напівсолених зразків за допомогою мішалки або гомогенізатора.

Ультразвукова гомогенізація:Застосування ультразвуку до дисперсних частинок у зразку рідини.

Залежно від очікуваної концентрації аналітиків, зразки, можливо, потребують розведення або концентрування. Цього можна досягти:

Розведення:Розведіть зразок до потрібної концентрації, використовуючи той самий розчинник, що і мобільна фаза.

Концентрація:Аналіти можуть бути сконцентровані за допомогою таких методів, як випаровування або вилучення твердих фаз (SPE).

Фільтрація є важливою для видалення твердих матеріалів, які можуть засмічувати стовпці ВЕРХ. Загальні методи фільтрації включають:

Мембранна фільтрація:Використання0,2 мкм або 0,45 мкм фільтрівдля видалення частинок. Зазвичай використовуються поліетельфон (PES) або нейлонові фільтри.

Префільтрація:Для зразків з високим вмістом частинок, передфільтрація через більший фільтр розмірів пор може запобігти засміченню.


50 Часті запитання про фільтри шприца, обов’язково перегляньте цю інформативну статтю: Тема "шприц -фільтра" 50 часто задаються питання

Подумайте про стабілізацію зразка, щоб запобігти деградації аналіту.

коригування pH:Налаштування pH може допомогти стабілізувати певних аналітиків. Наприклад, кислі сполуки можуть потребувати кислоти для запобігання деградації.

Добавки:Додавання стабілізаторів або консервантів може допомогти підтримувати цілісність зразка під час зберігання та аналізу.

Важливо вибрати правильний розчинник для розчинення зразка та забезпечення сумісності з вашою системою ВЕРХ. Розглянемо наступне:

Полярність розчинника:Щоб досягти повного розчинення, розчинник повинен відповідати полярності аналіту.

Сумісність мобільної фази: Використовуйте розчинник, сумісний з мобільною фазою, щоб мінімізувати потенційні перешкоди.

7. Підготовка стандартів

Підготовка стандартів калібрування має важливе значення для кількісного визначення аналіту у вибірці. Сюди входить:

Підготовка калібрувальної кривої:Підготуйте ряд відомих концентрацій аналіту, щоб встановити криву калібрування для кількісного визначення.

Використовуйте той самий розчинник:Щоб підтримувати послідовність, завжди готуйте свої стандарти, використовуючи той самий розчинник та умови, що і ваші зразки.

Дотримуйтесь стандартних операційних процедур (СОП):Встановіть та дотримуйтесь СОП для підготовки зразків для забезпечення послідовності та відтворюваності.

Використовуйте якісні реагенти та розчинники:Завжди використовуйте розчинники HPLC та реагенти з високою чистотою для мінімізації забруднення.

Зберігайте свою робочу область чистою:Зберігайте область підготовки зразків чистою та організованою для зменшення ризику забруднення.

Документуйте все:Зберігайте детальні записи про ваші зразки процедур підготовки, включаючи будь -які відхилення від стандартних протоколів.

Валідувати методи:Регулярно перевірте методи підготовки зразків, щоб забезпечити надійні та відтворювані результати.

Погана форма піку:Якщо вершини широкі або хвости, це може вказувати на неповне розчинення або наявність частинок. Переконайтесь, що ваш зразок ретельно змішується та фільтрується.

Привиди піків:Піки Ghost можуть бути викликані домішками в розчиннику або зразку, використовують розчинники з високою чистотою та забезпечують чисте чисте посуд та обладнання.

Низька чутливість:Якщо чутливість низька, подумайте про оптимізацію методу вилучення або збільшення концентрації вашого аналіту.

Залишення стовпців:Часте засмічення може вказувати на те, що ваш зразок містить занадто багато частинок або не відфільтрується адекватно. Переоцініть процес фільтрації та розгляньте попередню фільтрацію.

Непослідовні результати:Варіація результатів може випливати з непослідовної підготовки зразків. Стандартизувати всі процедури та забезпечити належну підготовку персоналу, який бере участь у підготовці зразків.

Зі збільшенням аналітичних вимог лабораторії застосовують більш розвинені методи підготовки зразків для підвищення ефективності та точності:

SPE - це широко використовувана методика, яка дозволяє селективному вилученню аналітиків із складних матриць. Він передбачає проходження рідкого зразка через твердий адсорбентний матеріал, який зберігає цільовий аналіт, дозволяючи домішкам пройти.

LLE - це методика, яка відокремлює аналіти на основі їх розчинності у двох неверних рідинах. Цей метод ефективний для розділення сполук з різними полярностями і часто використовується в екологічному та фармацевтичному аналізі.

Quechers-це популярний метод приготування їжі та навколишнього середовища зразків, який поєднує в собі кроки вилучення та очищення в один процес, що робить його ефективним та економічно ефективним.

Пропускна здатність та відтворюваність можна значно покращити за допомогою автоматизованих систем підготовки зразків, які можуть виконувати такі завдання, як розведення, фільтрація та SPE з мінімальним втручанням людини, тим самим зменшуючи ризик помилок.


Хочете дізнатися більше про підготовку зразків HPLC, будь ласка, перевірте цю статтю: Рішення для підготовки зразків ВЕРХ для найкращих результатів

Підготовка зразка ВЕРХ - це критичний крок, який може суттєво вплинути на точність та надійність аналітичних результатів. Дотримуючись найкращих практик, використовуючи відповідні методи та вирішуючи загальні проблеми, лабораторії можуть оптимізувати процес підготовки зразків, застосовуючи передові методи та технології в міру розвитку аналітичних потреб. Автоматизація додатково підвищить ефективність та ефективність аналізів ВЕРХ. Правильна підготовка зразка не тільки покращує якість результатів, але й захищає систему ВЕРХ, забезпечуючи довгострокову надійність та продуктивність.