30. srpna 2024
Vysoce výkonná kapalinová chromatografie (HPLC) je klíčová analytická technika používaná v laboratořích v oborech tak rozmanitá jako léčiva, environmentální vědy a bezpečnost potravin. Ve světě HPLC existují dvě hlavní kategorie: analytický HPLC a přípravné HPLC. Zatímco obě techniky používají podobné principy k oddělení sloučenin, používají se pro různé účely a mají různé provozní parametry. Tento blog prozkoumá rozdíly mezi analytickými a přípravnými HPLC, včetně jejich účelu, rozsahu provozu, zařízení a aplikací.
Chcete vědět plné Infor o lahvičkách HPLC, zkontrolujte prosím tento článek: Encyklopedie HPLC lahviček
Pochopení analytického HPLC
Definice a účel
Analytická HPLC se zaměřuje především na oddělení a identifikaci sloučenin ve vzorku. Primárním cílem je získat kvalitativní a kvantitativní informace o komponentách přítomných ve směsi. Analytický HPLC se často používá:
Kvalitativní analýza: Identifikace složek vzorku.
Kvantitativní analýza: Stanovení koncentrace specifické sloučeniny ve vzorku.
Měřítko provozu
Analytický HPLC pracuje v menším měřítku, obvykle zahrnuje injekce vzorku mikrolitru. Použité objemy jsou obecně v rozsahu 1 až 100 ul, což umožňuje analýzu více vzorků v jednom běhu. Toto malé měřítko je ideální pro rutinní testování a kontrolu kvality.
Velikost sloupce a velikost částic
Sloupce používané v analytické HPLC mají obvykle malé průměr, obvykle kolem 4,6 mm a jsou plné malých stacionárních fázových částic (3-5 μm). Tato konfigurace umožňuje vysoké rozlišení a efektivní separaci sloučenin, vhodné pro podrobnou analýzu.
Metody detekce
Analytická HPLC využívá řadu detekčních metod, včetně UV viditelné, fluorescence a hmotnostní spektrometrie. Volba detektoru závisí na povaze analytu a specifických požadavcích analýzy. Nedestruktivní detektory se často používají k zajištění analýzy vzorku bez významné ztráty.
Chcete vědět 50 odpovědí na lahvičky HPLC, zkontrolujte tento článek: 50 nejčastěji kladených otázek na lahvičky HPLC
Pochopení přípravného HPLC
Definice a účel
Cílem přípravného HPLC je na druhé straně oddělit a čistit specifické sloučeniny od směsi. Hlavním cílem je izolovat dostatečné množství cílové sloučeniny pro další analýzu nebo použití. Přípravný
HPLC se běžně používá pro následující aplikace:
Izolace sloučeniny: Extrakce a čištění specifických sloučenin pro výzkum nebo průmyslové aplikace.
Příprava vzorku: Příprava vzorků pro následnou analýzu nebo formulaci.
Rozsah operací
Preparativní HPLC se provádí ve větším měřítku než analytický HPLC. Objemy vzorku se mohou pohybovat od několika mililitrů po několik litrů, v závislosti na očekávaném výnosu cílové sloučeniny. Toto větší měřítko umožňuje shromažďování dostatečného množství čištěného materiálu pro další použití.
Velikost sloupce a velikost částic
Sloupy použité pro preparativní HPLC jsou výrazně větší, obvykle se pohybují od průměru 20 mm do 100 mm nebo větší. Kolony jsou plné větších stacionárních fázových částic (obvykle 10-20 um), aby se zvýšily průtoky a přizpůsobily větší objemy vzorku. Tento design pomáhá snižovat zpětný tlak a dosáhnout účinného oddělení sloučenin.
Metody detekce
V přípravné HPLC se metody detekce mohou lišit od metod používaných v analytickém HPLC. Zatímco nedestruktivní detektory jsou stále běžné, přípravné systémy často používají detektory, které jsou schopny sbírat zlomky založené na elučním profilu. To umožňuje izolovat specifické sloučeniny, když se elují ze sloupce.
Chcete se dozvědět více o aplikaci chromatografických lahviček, zkontrolujte tento článek:Pět metod čištění pro lahvičky HPLC
Klíčové rozdíly mezi analytickými a přípravnými HPLC
|
Funkce
|
Analytický HPLC
|
Preparativní HPLC
|
|
Účel
|
Kvalitativní a kvantitativní analýza
|
Izolace a čištění sloučenin
|
|
Měřítko provozu
|
Drobné (µl objemy)
|
Velké měřítko (ML až L svazky)
|
|
Rozměry sloupce
|
Menší průměr (4,6 mm)
|
Větší průměr (20-100 mm)
|
|
Velikost částic
|
Menší částice (3-5 µm)
|
Větší částice (10-20 µm)
|
|
Průtoky
|
Nižší průtoky (0,1-5 ml \ / min)
|
Vyšší průtoky (10-200 ml \ / min)
|
|
Metody detekce
|
Nedestruktivní detektory (UV, MS)
|
Sběr frakce založený na profilu Elution
|
Výběr mezi analytickým a přípravným HPLC
Při výběru mezi analytickým a přípravným HPLC zvažte následující faktory:
Účel analýzy: Zjistěte, zda je primárním cílem kvalitativně a kvantitativně analyzovat sloučeniny nebo izolovat specifické sloučeniny pro další použití.
Množství vzorku: Vyhodnoťte množství dostupného vzorku. Pokud je k dispozici malé množství vzorku, může být vhodnější analytický HPLC. Naopak, pokud je vyžadováno velké množství vzorku, je přípravná HPLC lepší volbou.
Požadovaná čistota a výnos: Zvažte požadovanou čistotu a výnos cílové sloučeniny. Cílem přípravného HPLC je maximalizovat zotavení konkrétní sloučeniny, zatímco analytický HPLC se zaměřuje na poskytnutí podrobných informací o složení vzorku.
Zdroje a vybavení: Vyhodnoťte dostupné zdroje, včetně vybavení a rozpočtu. Přípravní systémy HPLC mají tendenci být dražší a vyžadují více investic do vybavení a provozních nákladů.
Máte zájem o zvládnutí přípravy vzorku HPLC? Podívejte se na tento článek:Řešení přípravy vzorku HPLC pro nejlepší výsledky.
Závěr
Analytická i přípravná HPLC jsou cenné techniky v oblasti chromatografie a každá má odlišná použití v závislosti na potřebách vědců a průmyslu. Zatímco analytický HPLC je ideální pro podrobnou analýzu a kvantifikaci sloučenin, přípravná HPLC je nezbytná pro izolaci a čištění specifických sloučenin pro další aplikace. Pochopení rozdílů mezi těmito dvěma technikami pomůže vědcům přijímat informovaná rozhodnutí, optimalizovat jejich pracovní postupy a získat přesné a spolehlivé výsledky v jejich analýzách. Vzhledem k tomu, že technologie HPLC neustále postupuje, analytické i přípravé metody zůstanou nedílnou součástí úspěšného vědeckého výzkumu všeho druhu.
angličtina
čínština
