30. august 2024
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) er en nøgleanalytisk teknik, der bruges i laboratorier i felter så forskellige som farmaceutiske midler, miljøvidenskaber og fødevaresikkerhed. Inden for HPLC -verdenen er der to hovedkategorier: analytisk HPLC og forberedende HPLC. Mens begge teknikker bruger lignende principper til at adskille forbindelser, bruges de til forskellige formål og har forskellige driftsparametre. Denne blog vil undersøge forskellene mellem analytisk og forberedende HPLC, herunder deres formål, driftsskala, udstyr og applikationer.
Vil du vide fuld information om HPLC -hætteglas, skal du kontrollere denne artikel: Encyclopedia of HPLC hætteglas
Forståelse af analytisk HPLC
Definition og formål
Analytisk HPLC fokuserer primært på at adskille og identificere forbindelser i en prøve. Det primære mål er at opnå kvalitativ og kvantitativ information om de komponenter, der er til stede i en blanding. Analytisk HPLC bruges ofte til:
Kvalitativ analyse: Identificering af komponenterne i en prøve.
Kvantitativ analyse: Bestemmelse af koncentrationen af en specifik forbindelse i en prøve.
Driftsskala
Analytisk HPLC fungerer i mindre skala, der typisk involverer mikroliter -prøveinjektioner. De anvendte volumener er generelt i området 1 til 100 µl, hvilket gør det muligt at analysere flere prøver i et enkelt løb. Denne lille skala er ideel til rutinemæssig test og kvalitetskontrol.
Kolonstørrelse og partikelstørrelse
Søjlerne anvendt i analytisk HPLC er normalt små i diameter, typisk omkring 4,6 mm, og er fyldt med små stationære fasepartikler (3-5 um). Denne konfiguration giver mulighed for høj opløsning og effektiv sammensat adskillelse, der er egnet til detaljeret analyse.
Detektionsmetoder
Analytisk HPLC anvender en række detektionsmetoder, herunder UV-synlig, fluorescens og massespektrometri. Valget af detektor afhænger af analytens art og de specifikke krav til analysen. Ikke-destruktive detektorer bruges ofte til at sikre, at prøven kan analyseres uden signifikant tab.
Vil du vide 50 svar om HPLC -hætteglas. Kontroller denne artikel: 50 hyppigst stillede spørgsmål om HPLC hætteglas
Forståelse af forberedende HPLC
Definition og formål
Forberedende HPLC sigter på den anden side at adskille og rense specifikke forbindelser fra en blanding. Hovedmålet er at isolere tilstrækkelige mængder af målforbindelsen til yderligere analyse eller anvendelse. Forberedende
HPLC bruges ofte til følgende applikationer:
Forbindelsesisolering: Ekstraktion og oprensning af specifikke forbindelser til forskning eller industrielle anvendelser.
Prøveforberedelse: Fremstilling af prøver til efterfølgende analyse eller formulering.
Driftsskala
Præparativ HPLC udføres i større skala end analytisk HPLC. Prøvevolumener kan variere fra et par milliliter til flere liter, afhængigt af det forventede udbytte af målforbindelsen. Denne større skala gør det muligt at indsamle tilstrækkelige mængder renset materiale til yderligere anvendelse.
Kolonstørrelse og partikelstørrelse
Søjlerne, der bruges til præparativ HPLC, er signifikant større, typisk spænder fra 20 mm til 100 mm eller større i diameter. Søjlerne er fyldt med større stationære fasepartikler (typisk 10-20 um) for at øge strømningshastighederne og rumme større prøvevolumener. Dette design hjælper med at reducere rygtrykket og opnå effektiv adskillelse af forbindelser.
Detektionsmetoder
I forberedende HPLC kan detektionsmetoder afvige fra dem, der anvendes i analytisk HPLC. Mens ikke-destruktive detektorer stadig er almindelige, bruger præparative systemer ofte detektorer, der er i stand til at indsamle fraktioner baseret på en elueringsprofil. Dette gør det muligt at isolere specifikke forbindelser, når de elueres fra søjlen.
Vil du vide mere om anvendelsen af kromatografihætteglas. Kontroller denne artikel:Fem rengøringsmetoder til HPLC -hætteglas
Nøgleforskelle mellem analytisk og forberedende HPLC
|
Funktion
|
Analytisk HPLC
|
Preparativ HPLC
|
|
Formål
|
Kvalitativ og kvantitativ analyse
|
Isolering og oprensning af forbindelser
|
|
Driftsskala
|
Lille skala (µl volumener)
|
Storskala (ml til l mængder)
|
|
Kolonne dimensioner
|
Mindre diameter (4,6 mm)
|
Større diameter (20-100 mm)
|
|
Partikelstørrelse
|
Mindre partikler (3-5 um)
|
Større partikler (10-20 um)
|
|
Strømningshastigheder
|
Lavere strømningshastigheder (0,1-5 ml \ / min)
|
Højere strømningshastigheder (10-200 ml \ / min)
|
|
Detektionsmetoder
|
Ikke-destruktive detektorer (UV, MS)
|
Fraktionskollektion baseret på elueringsprofil
|
Valg af analytisk og forberedende HPLC
Når du vælger mellem analytisk og forberedende HPLC, skal du overveje følgende faktorer:
Formål med analyse: Bestem, om det primære mål er at kvalitativt og kvantitativt analysere forbindelser eller at isolere specifikke forbindelser til yderligere anvendelse.
Mængde af prøve: Evaluer mængden af tilgængelig prøve. Hvis en lille mængde prøve er tilgængelig, kan analytisk HPLC muligvis være mere passende. Omvendt, hvis der kræves en stor mængde prøve, er forberedende HPLC et bedre valg.
Påkrævet renhed og udbytte: Overvej den krævede renhed og udbytte af målforbindelsen. Preparative HPLC sigter mod at maksimere genvindingen af en specifik forbindelse, mens analytisk HPLC fokuserer på at give detaljerede oplysninger om sammensætningen af prøven.
Ressourcer og udstyr: Evaluer tilgængelige ressourcer, herunder udstyr og budget. Forberedende HPLC -systemer har en tendens til at være dyrere og kræver flere investeringer i udstyr og driftsomkostninger.
Er du interesseret i at mestre HPLC -prøveforberedelse? Tjek denne artikel:HPLC -prøveforberedelsesløsninger for de bedste resultater.
Konklusion
Både analytiske og forberedende HPLC er værdifulde teknikker inden for kromatografi, og hver har forskellige anvendelser afhængigt af forskere og industri behov. Mens analytisk HPLC er ideel til detaljeret analyse og kvantificering af forbindelser, er præparativ HPLC vigtig til at isolere og rense specifikke forbindelser til yderligere anvendelser. At forstå forskellene mellem disse to teknikker vil hjælpe forskere med at tage informerede beslutninger, optimere deres arbejdsgange og opnå nøjagtige og pålidelige resultater i deres analyser. Efterhånden som HPLC -teknologi fortsætter med at gå videre, vil både analytiske og forberedende metoder forblive en integreret del af vellykket videnskabelig forskning af alle slags.
Engelsk
Kinesisk
