Alt hvad du har brug for at vide om HPLC -prøveforberedelse

Prøveforberedelse er et kritisk trin i HPLC -analyse af flere årsager.

Minimer interferenser:Prøver indeholder ofte urenheder og matrixkomponenter, der kan forstyrre påvisning af målanalytter. Effektive prøveforberedelsesteknikker kan hjælpe med at fjerne disse uønskede stoffer og forbedre analytisk nøjagtighed.

Forbedre analytgenvinding:Korrekt forberedelse forbedrer analytgenvinding og sikrer, at resultaterne afspejler den faktiske koncentration af den originale prøve. Dette er især vigtigt for sporanalyse, hvor analytter er til stede ved lave koncentrationer.

Forbedret topform:Korrekt forberedte prøver hjælper med at danne symmetriske og veldefinerede toppe i kromatogrammet. Dette er vigtigt for nøjagtig kvantificering. Forkert prøveforberedelse kan resultere i spidsbelastning og udvidelse, hvilket komplicerer datatolkning.

Beskyt dit HPLC -system:Forurenende stoffer i din prøve kan beskadige kolonner og andre komponenter i dit HPLC -system, hvilket fører til øgede vedligeholdelsesomkostninger og nedetid. Korrekt prøveforberedelse reducerer risikoen for tilstopning og slid på systemet.

Det første trin i prøveforberedelse er at opsamle din prøve korrekt. Dette inkluderer:

Brug rene containere:Brug altid rene, inerte containere for at undgå forurening. Glas eller plastbeholdere i høj kvalitet anbefales.

Undgå forurening:Brug handsker og rene værktøjer til at forhindre forurening fra talg og andre kilder.

Korrekt mærkning:Mærk tydeligvis prøver for at undgå mix-ups og sikre sporbarhed.

Prøvehomogenisering sikrer homogenitet, hvilket er vigtigt for reproducerbare resultater. Homogeniseringsteknikker inkluderer:

Mekanisk homogenisering: Blanding af faste eller halvfastede prøver ved hjælp af en omrører eller homogenisator.

Ultralydshomogenisering:Anvendelse af ultralyd til at sprede partikler i en flydende prøve.

Afhængig af den forventede koncentration af analytter kan prøver muligvis fortyndes eller koncentreres. Dette kan opnås af:

Fortynding:Fortynd prøven til den ønskede koncentration ved hjælp af det samme opløsningsmiddel som den mobile fase.

Koncentration:Analyser kan koncentreres ved anvendelse af teknikker såsom fordampning eller fastfaseekstraktion (SPE).

Filtrering er vigtig for at fjerne partikler, der kan tilstoppe HPLC -søjler. Almindelige filtreringsmetoder inkluderer ：

Membranfiltrering:Bruge0,2 um eller 0,45 um filtreat fjerne partikler. Typisk anvendes polyethersulfone (PES) eller nylonfiltre.

Forfiltrering:For prøver med højt partikelindhold kan præfiltrering gennem et større porestørrelsesfilter forhindre tilstopning.


50 Ofte stillede spørgsmål om sprøjtefiltre, sørg for at tjekke denne informative artikel: Emnet med "sprøjtefilter" 50 stillede ofte spørgsmål

Overvej at stabilisere din prøve for at forhindre nedbrydning af analytten.

pH -justering:Justering af pH kan hjælpe med at stabilisere visse analytter. For eksempel kan sure forbindelser kræve forsuring for at forhindre nedbrydning.

Tilsætningsstoffer:Tilsætning af stabilisatorer eller konserveringsmidler kan hjælpe med at opretholde prøveintegritet under opbevaring og analyse.

Det er vigtigt at vælge det korrekte opløsningsmiddel for at opløse din prøve og sikre kompatibilitet med dit HPLC -system. Overvej følgende:

Opløsningsmiddelpolaritet:For at opnå fuldstændig opløsning skal opløsningsmidlet matche analytens polaritet.

Kompatibilitet til mobil fase: Brug et opløsningsmiddel, der er kompatibelt med den mobile fase for at minimere potentielle interferenser.

7. Forberedelse af standarder

Fremstilling af kalibreringsstandarder er vigtig for at kvantificere en analyt i en prøve. Dette inkluderer:

Fremstilling af kalibreringskurve:Forbered en række kendte koncentrationer af analytten for at etablere en kalibreringskurve til kvantificering.

Brug det samme opløsningsmiddel:For at opretholde konsistens skal du altid forberede dine standarder ved hjælp af det samme opløsningsmiddel og betingelser som dine prøver.

Følg standard driftsprocedurer (SOP):Etabler og overhold til SOP'er for prøveforberedelse for at sikre konsistens og reproducerbarhed.

Brug reagenser og opløsningsmidler af høj kvalitet:Brug altid HPLC-kvalitet opløsningsmidler og reagenser med høj renhed for at minimere kontaminering.

Hold dit arbejdsområde rent:Hold dit prøveforberedelsesområde rent og organiseret for at reducere risikoen for forurening.

Dokumenter alt:Opbevar detaljerede poster over dine prøveforberedelsesprocedurer, herunder eventuelle afvigelser fra standardprotokoller.

Valider metoder:Valider regelmæssigt prøvepræparatmetoder for at sikre, at de giver pålidelige og reproducerbare resultater.

Dårlig topform:Hvis toppe er brede eller skræddersy, kan dette indikere ufuldstændig opløsning eller tilstedeværelsen af ​​partikler. Sørg for, at din prøve er grundigt blandet og filtreret.

Ghost Peaks:Ghost Peaks kan være forårsaget af urenheder i opløsningsmidlet eller prøven, bruge opløsningsmidler med høj renhed og sikre, at alt glasvarer og udstyr er rene.

Lav følsomhed:Hvis følsomheden er lav, skal du overveje at optimere din ekstraktionsmetode eller øge koncentrationen af ​​din analyt.

Søjle tilstopning:Hyppig tilstopning kan indikere, at din prøve indeholder for mange partikler eller ikke filtreres tilstrækkeligt. Evaluer din filtreringsproces igen og overveje præ-filtrering.

Inkonsekvente resultater:Variation i resultater kan stamme fra inkonsekvent prøveforberedelse. Standardiser alle procedurer, og sørg for, at personale involveret i prøveforberedelse er korrekt trænet.

Efterhånden som analytiske krav stiger, vedtager laboratorier mere avancerede prøveforberedelsesteknikker for at forbedre effektiviteten og nøjagtigheden:

SPE er en meget anvendt teknik, der muliggør selektiv ekstraktion af analytter fra komplekse matrixer. Det involverer at passere en flydende prøve gennem et fast adsorbentmateriale, der bevarer målanalytten, mens urenheder kan passere.

LLE er en teknik, der adskiller analytter baseret på deres opløselighed i to ikke -blandbare væsker. Denne metode er effektiv til at adskille forbindelser med forskellige polariteter og bruges ofte i miljømæssig og farmaceutisk analyse.

Quechers er en populær metode til tilberedning af mad- og miljøprøver, der kombinerer ekstraktions- og oprydningstrinnene i en proces, hvilket gør den effektiv og omkostningseffektiv.

Gennemstrømning og reproducerbarhed kan forbedres markant med automatiserede prøvepræparatsystemer, der kan udføre opgaver såsom fortynding, filtrering og SPE med minimal menneskelig indgriben og derved reducere risikoen for fejl.


Vil du vide mere om HPLC -prøveforberedelse. Kontroller denne artikel: HPLC -prøveforberedelsesløsninger til de bedste resultater

HPLC -prøveforberedelse er et kritisk trin, der kan påvirke nøjagtigheden og pålideligheden af ​​analytiske resultater. Ved at følge bedste praksis, ved hjælp af passende teknikker og imødekomme almindelige problemer, kan laboratorier optimere prøveforberedelsesprocessen ved at anvende avancerede teknikker og teknologier, når analytiske behov udvikler sig. Automation vil yderligere forbedre effektiviteten og effektiviteten af ​​HPLC -analyser. Korrekt prøveforberedelse forbedrer ikke kun kvaliteten af ​​resultaterne, men beskytter også HPLC-systemet, hvilket sikrer langsigtet pålidelighed og ydeevne.