Soluciones de preparación de muestras de HPLC para los mejores resultados

Cuatro pasos para la preparación de la muestra de HPLC

Paso 1. Análisis de soluciones acuosas

Paso 2. Preparación de estándares

La preparación de los estándares para la identificación y cuantificación de compuestos puede ser un proceso tedioso y lento. Pesar con precisión un sólido para que se pueda usar un volumen predefinido de solvente es difícil, y el desperdicio debido al error puede ser costoso, especialmente cuando se trabaja con productos farmacéuticos. Otros factores, como la temperatura, complican aún más la preparación estándar. Las fluctuaciones de temperatura alteran la densidad del solvente y contribuyen a diferencias dramáticas en la concentración.



Uso de un equilibrio que permita una precisión de peso hasta varios decimales y automatizar el proceso vinculando el equilibrio con un dispensador de solvente garantiza la precisión más alta. El uso de software como la dosificación YAPP16 Q-APP permite cálculos automáticos y monitoreo gravimétrico de valores medidos. Documentar la temperatura y la densidad del solvente también garantiza concentraciones altamente precisas, especialmente al preparar los estándares en los días posteriores. La transferencia de datos directos desde la aplicación YAPP16 de pesaje al software Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Cromatography Data System (CDS) es una opción para el manejo de datos sin papel con integridad completa de datos.

Paso 3. Vuelve a lo básico con buena pipeteo

La importancia de la pipeteo precisa y precisa a menudo se pasa por alto y se da por sentado. El nivel de habilidad y la experiencia del usuario pueden tener implicaciones significativas para análisis sensibles como HPLC. Elegir la pipeta correcta puede reducir el error humano y los costos asociados de los solventes desperdiciados.



Las pipetas mecánicas con un bloqueo de volumen ofrecen una solución simple para prevenir cambios de volumen accidentales, mientras que las pipetas electrónicas más sofisticadas eliminan la variabilidad del usuario para ofrecer constantemente volúmenes precisos. La punta de la pipeta también es un detalle importante a considerar para los análisis de HPLC. Los consejos de baja retención son mejores cuando se trabajan con solventes de diferentes viscosidades, ya que maximizan la recuperación de la muestra. La contaminación de la muestra también puede ocurrir como resultado de la lixiviación de la punta de la pipeta. Como tal, las puntas con alta resistencia química conservan la integridad de la muestra.

Paso 4. Filtrar para precisión y longevidad

Tomar atención adicional para filtrar muestras antes del análisis mejora la confiabilidad y puede prolongar la vida útil de la columna HPLC evitando los efectos de obstrucción. Los filtros de jeringa son una solución simple y rápida para filtrar muestras antes de la cromatografía de columna. Al igual que con las puntas de la pipeta, los solventes utilizados en HPLC requieren filtros específicos para evitar la lixiviación y la contaminación de la muestra.

Las membranas de celulosa son resistentes al dimetil sulfóxido (DMSO), amidas, cetonas, éster y compuestos de éter. Para solventes especialmente duros, las membranas de polietersulfona sin recubrimiento (PTFO) evitan la lixiviación y la contaminación de la muestra. La filtración de muestra se lleva mucho tiempo cuando aumenta el número de muestra. Las unidades de filtración de múltiples muestras, como el sistema de filtración Claristep®, pueden procesar muestras sin jeringas y preparación de muestra de vía rápida sin sacrificar la calidad.

Cinco problemas a los que debe prestar atención！

1. ¿Cuáles son los problemas de preparación de muestras más grandes que enfrentan los laboratorios?

Los laboratorios están bajo una presión creciente en términos de tiempo y costo, a menudo tratando no solo con un alto número de muestras sino también muestras de diversas naturalezas. La preparación de la muestra es un área donde las diferencias sutiles entre los tipos de muestra o los métodos de preparación de muestras y los materiales utilizados pueden afectar los resultados obtenidos. Garantizar la compatibilidad entre los materiales en el dispositivo de filtración y el solvente puede minimizar los problemas; Por ejemplo, los niveles de compuestos extraíbles que podrían interferir con la detección de analitos.

2. ¿Qué sucede cuando la preparación de la muestra sale mal?

Antes de las aplicaciones analíticas de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), las muestras se preparan mediante una variedad de métodos, todos los cuales tienen el potencial de influir en los resultados analíticos al afectar la muestra inyectada en el sistema. La preparación ineficaz de la muestra puede conducir a una reducción en la vida útil de la columna, el aumento de los requisitos de servicio para los componentes, el tiempo de inactividad potencial de la instrumentación, la reducción de la eficiencia y la reproducibilidad de la separación cromatográfica, y muchos otros problemas.

3. A primera vista, la filtración parece un proceso simple ...

Aunque la filtración es una parte aparentemente pequeña de un gran flujo de trabajo, el impacto de elegir el filtro correcto para una aplicación dada puede ser sustancial. Por ejemplo, los métodos que no eliminan suficientes partículas pueden dar lugar al bloqueo de columnas. La elección inapropiada de los dispositivos de preparación de la muestra podría, bajo ciertas circunstancias, liberar compuestos extraíbles en la muestra, unir analitos de interés o introducir errores a través de la pérdida de muestras, todo influyendo en la calidad y la reproducibilidad de los resultados observados. Si confía en que sus consumibles de filtración no contribuyen a errores que requieren retrabajo o investigaciones de causa raíz, ahorrará dinero y se dará tranquilidad.

4. ¿Cuáles son los "fallas" de preparación de muestras más comunes?

La elección de membrana de filtro incorrecta es un problema que vemos mucho. Los problemas pueden aparecer como picos extraños de extractables, lo que puede interferir con la detección de los analitos de interés. La incompatibilidad de los medios de filtro con una muestra o solvente en términos de resistencia química no se limita únicamente a los efectos de disolución en los medios de filtro. Los solventes pueden causar una ligera hinchazón de los materiales de la membrana polimérica cuando no son completamente compatibles, lo que a su vez puede afectar el rendimiento de la filtración, lo que lleva a una limpieza ineficaz de muestras. Una forma de abordar este problema es eligiendo una membrana que sea ampliamente compatible con los solventes acuosos y orgánicos. Para la preparación típica de la muestra de HPLC, la jeringa y los filtros sin jering que contienen membranas de celulosa regeneradas son una buena opción debido a su amplia compatibilidad con solventes.

El uso de un dispositivo de filtro que es más grande de lo necesario para el volumen que se prepara es otra trampa común. El uso de dispositivos de filtro demasiado grandes significa que pequeñas cantidades de la muestra permanecerán en el filtro, incluso después de que se tomen precauciones para expulsar lo más posible.

5. ¿Cuáles son las ventajas de tomar en serio el paso de filtración?

Un objetivo fundamental de la mayoría de los laboratorios dedicados a las pruebas analíticas es desarrollar procesos consistentes que sustenten resultados consistentes, y que requieren un filtrado consistente. La selección de un dispositivo de filtración con el tamaño de poro correcto y las características de retención ayuda a garantizar una eliminación efectiva de partículas, mientras que la elección del tamaño y el diseño apropiados de la unidad de filtro puede ayudar a minimizar la pérdida de muestra. La buena filtración también ayuda a proteger la columna y potencialmente extiende la vida útil del inyector y la columna.

Conclusión

HPLC es una técnica valiosa para la ciencia de la vida y la investigación biofarmacéutica, ya que ofrece resultados precisos y reproducibles. Esta precisión depende de la integridad de la muestra de HPLC, y la mejor manera de garantizar muestras de alta calidad es comenzar con las mejores herramientas. Con soluciones para agua ultrapura, preparación estándar, pipetas, puntas y filtros, la línea de preparación de muestras de HPLC representa cada detalle. Las soluciones y software automatizados también ayudan a optimizar la preparación de muestras para entregar muestras limpias para obtener resultados limpios.

¡Más discusiones sobre las soluciones de preparación de muestras de HPLC son bienvenidas!