Soluciones de preparación de muestras de HPLC para obtener mejores resultados

Cuatro pasos para la preparación de muestras de HPLC

Paso 1. ANÁLISIS DE SOLUCIONES ACUOSAS

Paso 2. Preparación de Estándares

La preparación de estándares para la identificación y cuantificación de compuestos puede ser un proceso tedioso y que requiere mucho tiempo. Pesar con precisión un sólido para poder utilizar un volumen predefinido de disolvente es difícil, y el desperdicio debido a errores puede ser costoso, especialmente cuando se trabaja con productos farmacéuticos. Otros factores, como la temperatura, complican aún más la preparación estándar. Las fluctuaciones de temperatura alteran la densidad del disolvente y contribuyen a diferencias dramáticas en la concentración.



El uso de una balanza que permite una precisión de pesaje de hasta varios decimales y la automatización del proceso vinculando la balanza a un dispensador de disolvente garantiza la máxima precisión. El uso de software como YAPP16 Dosing Q-App permite realizar cálculos automáticos y un seguimiento gravimétrico de los valores medidos. La documentación de la temperatura y la densidad del disolvente también garantiza concentraciones muy precisas, especialmente al preparar estándares en los días siguientes. La transferencia directa de datos desde la aplicación de pesaje YAPP16 al software del sistema de datos de cromatografía (CDS) Thermo Scientific™ Chromeleon™ 7.2 es una opción para el manejo de datos sin papel con total integridad.

Paso 3. VUELVA A LO BÁSICO CON UN BUEN PIPETADO

Con demasiada frecuencia se pasa por alto y se da por sentada la importancia de un pipeteo exacto y preciso. El nivel de habilidad y la experiencia del usuario pueden tener implicaciones importantes para análisis sensibles como HPLC. Elegir la pipeta adecuada puede reducir el error humano y los costes asociados al desperdicio de disolventes.



Las pipetas mecánicas con bloqueo de volumen ofrecen una solución sencilla para evitar cambios accidentales de volumen, mientras que las pipetas electrónicas más sofisticadas eliminan la variabilidad del usuario para ofrecer volúmenes precisos de forma constante. La punta de la pipeta también es un detalle importante a considerar para los análisis de HPLC. Las puntas de baja retención son mejores cuando se trabaja con disolventes de diferentes viscosidades, ya que maximizan la recuperación de la muestra. La contaminación de la muestra también puede ocurrir como resultado de la lixiviación de la punta de la pipeta. Como tal, las puntas con alta resistencia química preservan la integridad de la muestra.

Paso 4. FILTRAR POR PRECISIÓN Y LONGEVIDAD

Tener especial cuidado al filtrar las muestras antes del análisis mejora la confiabilidad y puede prolongar la vida útil de la columna de HPLC al evitar los efectos de obstrucción. Los filtros de jeringa son una solución sencilla y rápida para filtrar muestras antes de la cromatografía en columna. Al igual que con las puntas de pipeta, los disolventes utilizados en HPLC necesitan filtros específicos para evitar la lixiviación y la contaminación de las muestras.

Las membranas de celulosa son resistentes al dimetilsulfóxido (DMSO), amidas, cetonas, ésteres y compuestos de éter. Para disolventes especialmente fuertes, las membranas de polietersulfona (PTFO) sin recubrimiento evitan la lixiviación y la contaminación de las muestras. La filtración de muestras requiere mucho tiempo cuando aumenta el número de muestras. Las unidades de filtración de muestras múltiples, como el sistema de filtración Claristep®, pueden procesar muestras sin jeringas y acelerar la preparación de muestras sin sacrificar la calidad.

¡Cinco problemas a los que debes prestar atención!

1. ¿Cuáles son los mayores problemas de preparación de muestras que enfrentan los laboratorios?

Los laboratorios están sometidos a una presión cada vez mayor en términos de tiempo y costo, y a menudo tratan no sólo con un gran número de muestras sino también con muestras de diversa naturaleza. La preparación de muestras es un área donde las diferencias sutiles entre los tipos de muestras o los métodos y materiales de preparación de muestras utilizados pueden afectar los resultados obtenidos. Garantizar la compatibilidad entre los materiales del dispositivo de filtración y el disolvente puede minimizar los problemas; por ejemplo, los niveles de compuestos extraíbles que podrían interferir con la detección de analitos.

2. ¿Qué sucede cuando la preparación de la muestra sale mal?

Antes de las aplicaciones analíticas de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), las muestras se preparan mediante una variedad de métodos, todos los cuales tienen el potencial de influir en los resultados analíticos al afectar la muestra inyectada en el sistema. La preparación ineficaz de muestras puede provocar una reducción de la vida útil de la columna, mayores requisitos de servicio para los componentes, posibles tiempos de inactividad de la instrumentación, reducción de la eficiencia y reproducibilidad de la separación cromatográfica y muchos otros problemas.

3. A primera vista, la filtración parece un proceso sencillo...

Aunque la filtración es una parte aparentemente pequeña de un gran flujo de trabajo, el impacto de elegir el filtro adecuado para una aplicación determinada puede ser sustancial. Por ejemplo, los métodos que no eliminan suficientes partículas pueden provocar el bloqueo de la columna. La elección inadecuada de dispositivos de preparación de muestras podría, en determinadas circunstancias, liberar compuestos extraíbles en la muestra, unir analitos de interés o introducir errores por pérdida de muestra, todo lo cual influye en la calidad y reproducibilidad de los resultados observados. Si está seguro de que sus consumibles de filtración no contribuyen a errores que requieran reelaboración o investigaciones de la causa raíz, ahorrará dinero y tendrá tranquilidad.

4. ¿Cuáles son los "fallos" más comunes en la preparación de muestras?

La elección incorrecta de la membrana del filtro es un problema que vemos con frecuencia. Los problemas pueden aparecer como picos extraños de los extraíbles, que pueden interferir con la detección de los analitos de interés. La incompatibilidad de los medios filtrantes con una muestra o disolvente en términos de resistencia química no se limita únicamente a los efectos de disolución en los medios filtrantes. Los disolventes pueden provocar una ligera hinchazón de los materiales de las membranas poliméricas cuando no son totalmente compatibles, lo que a su vez puede afectar el rendimiento de la filtración y provocar una limpieza ineficaz de las muestras. Una forma de abordar este problema es elegir una membrana que sea ampliamente compatible con disolventes acuosos y orgánicos. Para la preparación típica de muestras de HPLC, los filtros con jeringa y sin jeringa que contienen membranas de celulosa regenerada son una buena opción debido a su amplia compatibilidad con solventes.

El uso de un dispositivo de filtrado que sea más grande de lo necesario para el volumen que se está preparando es otro error común. El uso de dispositivos de filtrado demasiado grandes significa que pequeñas cantidades de muestra permanecerán en el filtro, incluso después de que se tomen precauciones para expulsar la mayor cantidad posible.

5. ¿Cuáles son las ventajas de tomarse en serio el paso de la filtración?

Un objetivo fundamental de la mayoría de los laboratorios que realizan pruebas analíticas es desarrollar procesos consistentes que respalden resultados consistentes y que requieran un filtrado consistente. La selección de un dispositivo de filtración con el tamaño de poro y las características de retención correctos ayuda a garantizar una eliminación eficaz de las partículas, mientras que la elección del tamaño y diseño adecuados de la unidad de filtrado puede ayudar a minimizar la pérdida de muestra. Una buena filtración también ayuda a proteger la columna y potencialmente extiende la vida útil tanto del inyector como de la columna.

Conclusión

La HPLC es una técnica valiosa para la investigación biofarmacéutica y de ciencias biológicas, ya que ofrece resultados precisos y reproducibles. Esta precisión depende de la integridad de la muestra de HPLC y la mejor manera de garantizar muestras de alta calidad es comenzar con las mejores herramientas. Con soluciones para agua ultrapura, preparación estándar, pipetas, puntas y filtros, la línea de preparación de muestras de HPLC tiene en cuenta cada detalle. Las soluciones y el software automatizados también ayudan a optimizar la preparación de muestras para entregar muestras limpias y obtener resultados limpios.

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