Analitinė ir parengiamoji HPLC: pagrindinių skirtumų supratimas
Žinios
kategorijas
UŽKLAUSIMAI

Kuo skiriasi analitinė ir preparatinė HPLC?

2024 m. rugpjūčio 30 d

Didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC) yra pagrindinė analizės technika, naudojama įvairių sričių, tokių kaip farmacija, aplinkos mokslai ir maisto sauga, laboratorijose. HPLC pasaulyje yra dvi pagrindinės kategorijos: analitinė HPLC ir preparatinė HPLC. Nors abiejuose metoduose naudojami panašūs junginių atskyrimo principai, jie naudojami skirtingiems tikslams ir turi skirtingus veikimo parametrus. Šiame tinklaraštyje bus nagrinėjami skirtumai tarp analitinės ir parengiamosios HPLC, įskaitant jų paskirtį, veikimo mastą, įrangą ir programas.

Jei norite sužinoti visą informaciją apie hplc buteliukus, peržiūrėkite šį straipsnį: HPLC buteliukų enciklopedija

Analitinio HPLC supratimas


Apibrėžimas ir tikslas

Analitinis HPLC pagrindinis dėmesys skiriamas junginių atskyrimui ir identifikavimui mėginyje. Pagrindinis tikslas – gauti kokybinę ir kiekybinę informaciją apie mišinyje esančius komponentus. Analitinis HPLC dažnai naudojamas:

Kokybinė analizė: imties komponentų nustatymas.

Kiekybinė analizė: konkretaus junginio koncentracijos mėginyje nustatymas.


Veikimo mastas

Analitinis HPLC veikia mažesniu mastu, paprastai apimantis mikrolitrų mėginių injekcijas. Paprastai naudojami tūriai yra nuo 1 iki 100 µL, todėl vienu bandymu galima analizuoti kelis mėginius. Ši maža skalė idealiai tinka įprastiniam testavimui ir kokybės kontrolei.


Stulpelio dydis ir dalelių dydis

Analitiniam HPLC naudojamos kolonėlės paprastai yra mažo skersmens, paprastai apie 4,6 mm, ir yra užpildytos mažomis stacionarios fazės dalelėmis (3–5 μm). Ši konfigūracija leidžia atlikti didelę skiriamąją gebą ir efektyviai atskirti junginius, tinkančius detaliai analizei.


Aptikimo metodai

Analitiniame HPLC naudojami įvairūs aptikimo metodai, įskaitant UV matomumą, fluorescenciją ir masės spektrometriją. Detektoriaus pasirinkimas priklauso nuo analitės pobūdžio ir specifinių analizės reikalavimų. Neardomieji detektoriai dažnai naudojami siekiant užtikrinti, kad mėginį būtų galima analizuoti be didelių nuostolių.

Norite sužinoti 50 atsakymų apie hplc buteliukus, peržiūrėkite šį straipsnį: 50 dažniausiai užduodamų klausimų apie HPLC buteliukus


Parengiamojo HPLC supratimas


Apibrėžimas ir tikslas

Kita vertus, parengiamuoju HPLC siekiama atskirti ir išvalyti konkrečius junginius iš mišinio. Pagrindinis tikslas yra izoliuoti pakankamą tikslinio junginio kiekį tolesnei analizei ar naudojimui. Paruošiamasis


HPLC dažniausiai naudojamas šioms programoms:

Junginių išskyrimas: specifinių junginių ekstrahavimas ir gryninimas moksliniams tyrimams arba pramoniniam naudojimui.

Mėginio paruošimas: mėginių paruošimas tolesnei analizei arba formulavimui.


Operacijų mastas

Paruošiamasis HPLC atliekamas didesniu mastu nei analitinė HPLC. Mėginio tūris gali svyruoti nuo kelių mililitrų iki kelių litrų, atsižvelgiant į numatomą tikslinio junginio išeigą. Dėl šio didesnio masto galima surinkti pakankamą kiekį išgrynintos medžiagos tolesniam naudojimui.


Stulpelio dydis ir dalelių dydis

Paruošiamajam HPLC naudojamos kolonėlės yra žymiai didesnės, paprastai jų skersmuo yra nuo 20 mm iki 100 mm arba didesnis. Kolonėlės yra užpildytos didesnėmis stacionarios fazės dalelėmis (paprastai 10-20 µm), kad padidėtų srautas ir tilptų didesni mėginio tūriai. Ši konstrukcija padeda sumažinti priešslėgį ir efektyviai atskirti junginius.


Aptikimo metodai

Atliekant preparato HPLC aptikimo metodai gali skirtis nuo naudojamų analitinėje HPLC. Nors neardomieji detektoriai vis dar yra įprasti, parengiamosiose sistemose dažnai naudojami detektoriai, galintys rinkti frakcijas pagal eliuavimo profilį. Tai leidžia išskirti specifinius junginius, kai jie eliuuoja iš kolonėlės.

Jei norite sužinoti daugiau apie chromatografijos buteliukų taikymą, peržiūrėkite šį straipsnį:Penki hplc buteliukų valymo būdai


Pagrindiniai analitinės ir parengiamosios HPLC skirtumai

Funkcija

Analitinė HPLC

Paruošiamasis HPLC

Tikslas

Kokybinė ir kiekybinė analizė

Junginių išskyrimas ir valymas

Veikimo mastas

Mažos apimties (µL tūriai)

Didelio masto (ml iki l tūrio)

Stulpelio matmenys

Mažesnis skersmuo (4,6 mm)

Didesnis skersmuo (20-100 mm)

Dalelių dydis

Mažesnės dalelės (3–5 µm)

Didesnės dalelės (10-20 µm)

Srauto normos

Mažesnis srautas (0,1–5 ml\/min.)

Didesnis srautas (10–200 ml\/min.)

Aptikimo metodai

Neardomieji detektoriai (UV, MS)

Frakcijų rinkimas pagal eliuavimo profilį


Pasirinkimas tarp analitinio ir paruošiamojo HPLC


Renkantis analitinį ir paruošiamąjį HPLC, atsižvelkite į šiuos veiksnius:

Analizės tikslas: nustatyti, ar pagrindinis tikslas yra kokybiškai ir kiekybiškai išanalizuoti junginius, ar išskirti konkrečius junginius tolesniam naudojimui.


Mėginio kiekis: įvertinkite turimą mėginio kiekį. Jei yra nedidelis mėginio kiekis, analitinė HPLC gali būti tinkamesnė. Ir atvirkščiai, jei reikalingas didelis mėginio kiekis, preparatinė HPLC yra geresnis pasirinkimas.


Reikalingas grynumas ir išeiga: Atsižvelkite į reikiamą tikslinio junginio grynumą ir išeigą. Paruošiamasis HPLC skirtas maksimaliai padidinti konkretaus junginio išgavimą, o analitinė HPLC skirta pateikti išsamią informaciją apie mėginio sudėtį.


Ištekliai ir įranga: įvertinkite turimus išteklius, įskaitant įrangą ir biudžetą. Parengiamos HPLC sistemos paprastai yra brangesnės ir reikalauja daugiau investicijų į įrangą ir eksploatavimo išlaidas.


Norite išmokti ruošti HPLC mėginį? Peržiūrėkite šį straipsnį:HPLC mėginių paruošimo sprendimai geriausiems rezultatams pasiekti.


Išvada

Tiek analitinė, tiek paruošiamoji HPLC yra vertingi metodai chromatografijos srityje ir kiekvienas jų naudojamas skirtingai, atsižvelgiant į tyrėjų ir pramonės poreikius. Nors analitinė HPLC idealiai tinka detaliai junginių analizei ir kiekybiniam įvertinimui, preparatinė HPLC yra būtina norint atskirti ir išvalyti specifinius junginius tolimesniam naudojimui. Šių dviejų metodų skirtumų supratimas padės mokslininkams priimti pagrįstus sprendimus, optimizuoti savo darbo eigą ir gauti tikslius bei patikimus analizės rezultatus. HPLC technologijai toliau tobulėjant, tiek analitiniai, tiek paruošiamieji metodai išliks neatsiejama sėkmingų visų rūšių mokslinių tyrimų dalis.

Užklausa