Viskas, ką reikia žinoti apie HPLC mėginių paruošimą

Mėginių paruošimas yra kritinis HPLC analizės žingsnis dėl daugelio priežasčių.

Sumažinkite trukdžius:Mėginiuose dažnai yra priemaišų ir matricos komponentų, kurie gali trukdyti aptikti tikslines analizes. Efektyvūs mėginių paruošimo būdai gali padėti pašalinti šias nepageidaujamas medžiagas ir pagerinti analitinį tikslumą.

Pagerinkite analitės atkūrimą:Tinkamas pasiruošimas pagerina analitės atkūrimą ir užtikrina, kad rezultatai atspindi tikrąją pradinio mėginio koncentraciją. Tai ypač svarbu atliekant pėdsakų analizę, kai analitai yra mažoje koncentracijoje.

Sustiprinta smailės forma:Tinkamai paruošti mėginiai padeda sudaryti simetriškas ir tiksliai apibrėžtas chromatogramos smailes. Tai yra būtina norint tiksliai įvertinti kiekybinį įvertinimą. Dėl netinkamo mėginio paruošimo gali būti didžiausias uodegas ir išplėtimas, o tai apsunkina duomenų aiškinimą.

Apsaugokite savo HPLC sistemą:Jūsų mėginio teršalai gali sugadinti stulpelius ir kitus jūsų HPLC sistemos komponentus, todėl padidėja priežiūros išlaidos ir prastovos. Tinkamas mėginio paruošimas sumažina sistemos užsikimšimo ir nusidėvėjimo riziką.

Pirmasis mėginio paruošimo žingsnis yra teisingai surinkti jūsų mėginį. Tai apima:

Naudokite švarius konteinerius:Norėdami išvengti užteršimo, visada naudokite švarias inertines talpyklas. Rekomenduojamos stiklinės ar aukštos kokybės plastikinės talpyklos.

Venkite užteršimo:Norėdami išvengti užteršimo nuo riebalų ir kitų šaltinių, naudokite pirštines ir švarius įrankius.

Tinkamas ženklinimas:Aiškiai pažymėkite mėginius, kad išvengtumėte maišymo ir užtikrintumėte atsekamumą.

Mėginio homogenizacija užtikrina homogeniškumą, o tai svarbu atkuriamiems rezultatams. Homogenizacijos metodai apima:

Mechaninis homogenizavimas: kietų arba pusiau kietų mėginių maišymas naudojant maišiklį ar homogenizatorių.

Ultragarso homogenizacija:Ultragarso tepimas dispersinėms dalelėms skysčio mėginyje.

Atsižvelgiant į numatomą analizės koncentraciją, mėginius gali reikėti praskiesti arba koncentruoti. Tai galima pasiekti:

Skiedimas:Praskieskite mėginį iki norimos koncentracijos, naudodami tą patį tirpiklį kaip ir mobilioji fazė.

Koncentracija:Analitai gali būti sukoncentruotos naudojant tokius metodus kaip garinimas ar kietos fazės ekstrahavimas (SPE).

Filtravimas yra būtinas norint pašalinti kietąsias medžiagas, kurios gali užkimšti HPLC stulpelius. Įprasti filtravimo metodai apima ：

Membranos filtravimas:Naudoti0,2 µm arba 0,45 µm filtraiNorėdami pašalinti daleles. Paprastai naudojami polietherizulfonas (PE) arba nailono filtrai.

Išankstinis rašymas:Mėginiams, kuriems yra didelis dalelių kiekis, prefiltracija per didesnį porų dydžio filtrą gali užkirsti kelią užsikimšimui.


50 Dažniausiai užduodami klausimai apie švirkštų filtrus, būtinai peržiūrėkite šį informatyvų straipsnį: „Švirkšto filtro“ tema 50 dažnai užduodami klausimai

Apsvarstykite galimybę stabilizuoti mėginį, kad būtų išvengta analitės skaidymo.

PH reguliavimas:PH koregavimas gali padėti stabilizuoti tam tikras analizes. Pvz., Rūgštiniams junginiams gali prireikti parūgštinti, kad būtų išvengta skilimo.

Priedai:Stabilizatorių ar konservantų pridėjimas gali padėti išlaikyti mėginio vientisumą saugojimo ir analizės metu.

Svarbu pasirinkti teisingą tirpiklį, kad ištirpintumėte mėginį ir užtikrintumėte suderinamumą su HPLC sistema. Apsvarstykite šiuos dalykus:

Tirpiklio poliškumas:Norėdami pasiekti visišką tirpimą, tirpiklis turi atitikti analitės poliškumą.

Mobiliųjų fazių suderinamumas: Naudokite tirpiklį, suderinamą su mobiliąja faze, kad sumažintumėte galimus trukdžius.

7. Standartų paruošimas

Kalibravimo standartų paruošimas yra būtinas norint kiekybiškai įvertinti analitę imtyje. Tai apima:

Kalibravimo kreivės paruošimas:Paruoškite žinomų analitės koncentracijų seriją, kad nustatytumėte kalibravimo kreivę kiekybiniam įvertinimui.

Naudokite tą patį tirpiklį:Norėdami išlaikyti konsistenciją, visada paruoškite savo standartus naudodami tą patį tirpiklį ir sąlygas kaip ir mėginiai.

Laikykitės standartinių eksploatavimo procedūrų (SOP):Nustatykite ir laikykitės SOP, kad būtų galima paruošti mėginius, kad būtų užtikrintas nuoseklumas ir atkuriamumas.

Naudokite aukštos kokybės reagentus ir tirpiklius:Norėdami sumažinti užteršimą, visada naudokite HPLC klasės tirpiklius ir didelio grynumo reagentus.

Laikykite savo darbo vietą švariai:Laikykite mėginio paruošimo plotą švarią ir sutvarkytą, kad sumažintumėte užteršimo riziką.

Dokumentuokite viską:Laikykite išsamius savo mėginių paruošimo procedūrų įrašus, įskaitant visus nukrypimus nuo standartinių protokolų.

Patvirtinkite metodus:Reguliariai patvirtinkite mėginių paruošimo metodus, kad jie užtikrintų patikimus ir atkuriamus rezultatus.

Prasta piko forma:Jei smailės yra plačios arba uodegos, tai gali reikšti nepilną tirpimą ar kietųjų dalelių buvimą. Įsitikinkite, kad jūsų mėginys yra kruopščiai sumaišytas ir filtruojamas.

„Ghost Peaks“:Vaiduoklių smailes gali sukelti nešvarumai tirpiklyje ar mėginyje, naudokite didelio grynumo tirpiklius ir įsitikinkite, kad visi stikliniai indai ir įranga yra švarūs.

Mažas jautrumas:Jei jautrumas yra mažas, apsvarstykite galimybę optimizuoti savo ekstrahavimo metodą arba padidinti savo analitės koncentraciją.

Stulpelio užsikimšimas:Dažnai užsikimšęs gali reikšti, kad jūsų mėginyje yra per daug kietųjų dalelių arba jis nėra tinkamai filtruojamas. Iš naujo įvertinkite savo filtravimo procesą ir apsvarstykite galimybę išankstinį filtravimą.

Nenuoseklūs rezultatai:Rezultatų kitimas gali kilti dėl nenuoseklaus mėginio paruošimo. Su standartizuokite visas procedūras ir įsitikinkite, kad mėginių ruošimo metu dalyvaujantys darbuotojai būtų tinkamai apmokyti.

Didėjant analitiniams poreikiams, laboratorijos naudojasi sudėtingesniais mėginių paruošimo metodais, kad pagerintų efektyvumą ir tikslumą:

SPE yra plačiai naudojama technika, leidžianti selektyviai išgauti analizę iš sudėtingų matricų. Tai apima skysto mėginio praėjimą per kietą adsorbuojančią medžiagą, kuri išlaiko tikslinę analitę, tuo pačiu leisdama praeiti nešvarumus.

LLE yra technika, skirianti analitus, atsižvelgiant į jų tirpumą dviejuose nesimaišomuose skysčiuose. Šis metodas yra efektyvus atskirti skirtingus poliškumus ir dažnai naudojamas aplinkos ir farmacijos analizėje.

„Quechers“ yra populiarus maisto ir aplinkos mėginių paruošimo būdas, sujungiantis ištraukimo ir valymo veiksmus į vieną procesą, todėl jis yra efektyvus ir ekonomiškai efektyvus.

Pralaidumą ir atkuriamumą galima žymiai pagerinti automatinėmis mėginių paruošimo sistemomis, kurios gali atlikti tokias užduotis kaip skiedimas, filtravimas ir SPE su minimalia žmogaus intervencija, taip sumažinant klaidų riziką.


Norite sužinoti daugiau apie HPLC mėginių paruošimą, patikrinkite šį straipsnį: HPLC mėginių paruošimo sprendimai geriausiems rezultatams

HPLC mėginių paruošimas yra kritinis žingsnis, kuris gali turėti didelę įtaką analitinių rezultatų tikslumui ir patikimumui. Vykdydamos geriausią praktiką, naudodamiesi tinkamais metodais ir spręsdami bendrąsias problemas, laboratorijos gali optimizuoti mėginių paruošimo procesą, pritaikydamos pažangias technikas ir technologijas, kai kyla analitinių poreikių. Automatizavimas dar labiau pagerins HPLC analizės efektyvumą ir efektyvumą. Tinkamas mėginio paruošimas ne tik pagerina rezultatų kokybę, bet ir apsaugo HPLC sistemą, užtikrinant ilgalaikį patikimumą ir našumą.