Soluções de preparação de amostras de HPLC para obter melhores resultados

Quatro etapas para a preparação da amostra de HPLC

Etapa 1. Análise de soluções aquosas

Etapa 2. Preparação de padrões

A preparação de padrões para identificação e quantificação composta pode ser um processo tedioso e demorado. Pesar com precisão um sólido para que um volume predefinido de solvente possa ser usado é difícil e o desperdício devido a erro pode ser caro - especialmente ao trabalhar com produtos farmacêuticos. Outros fatores, como a temperatura, complicam ainda mais a preparação padrão. As flutuações de temperatura alteram a densidade do solvente e contribuem para diferenças dramáticas na concentração.



O uso de um equilíbrio que permite uma precisão de pesagem até vários locais decimais e automatizando o processo, vinculando o saldo a um dispensador de solvente, garante a maior precisão. O uso de software como o YAPP16 Dosagem Q-App permite cálculos automáticos e monitoramento gravimétrico de valores medidos. A documentação da temperatura e da densidade do solvente também garante concentrações altamente precisas, especialmente ao preparar padrões nos dias subsequentes. A transferência direta de dados do aplicativo YAPP16 para o software Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Sistema de Dados de Cromatografia (CDS) é uma opção para manuseio de dados sem papel com integridade de dados completa.

Etapa 3. Volte ao básico com boa pipetagem

A importância da pipetagem precisa e precisa é frequentemente esquecida e tomada como certa. O nível de habilidade e a experiência do usuário podem ter implicações significativas para análises sensíveis como o HPLC. A escolha da pipeta certa pode reduzir o erro humano e os custos associados de solventes desperdiçados.



As pipetas mecânicas com um bloqueio de volume oferecem uma solução simples para impedir alterações acidentais de volume, enquanto as pipetas eletrônicas mais sofisticadas eliminam a variabilidade do usuário para fornecer volumes precisos consistentemente. A ponta da pipeta também é um detalhe importante a ser considerado para análises de HPLC. Dicas de baixa retenção são melhores ao trabalhar com solventes de diferentes viscosidades, pois maximizam a recuperação da amostra. A contaminação da amostra também pode ocorrer como resultado da lixiviação da ponta da pipeta. Como tal, dicas com alta resistência química preservam a integridade da amostra.

Etapa 4. Filtro para precisão e longevidade

Tomar cuidados adicionais para filtrar amostras antes da análise melhora a confiabilidade e pode prolongar a vida útil da coluna HPLC, impedindo os efeitos do entupimento. Os filtros de seringa são uma solução simples e rápida para filtrar amostras antes da cromatografia em coluna. Como nas dicas de pipeta, os solventes usados ​​no HPLC exigem filtros específicos para evitar a lixiviação e a contaminação da amostra.

As membranas de celulose são resistentes a dimetilsulfóxido (DMSO), amidas, cetonas, éster e compostos de éter. Para solventes especialmente severos, as membranas não revestidas de poliethersulfona (PTFO) impedem a lixiviação e a contaminação da amostra. A filtração da amostra se torna muito demorada quando o número da amostra aumenta. As unidades de filtragem de várias amostras, como o sistema de filtração Claristep®, podem processar amostras sem seringas e preparação rápida da amostra sem sacrificar a qualidade.

Cinco problemas que você precisa para prestar atenção a！

1. Quais são os maiores problemas de preparação de amostra que os laboratórios enfrentam?

Os laboratórios estão sob crescente pressão em termos de tempo e custo, geralmente lidando não apenas com um grande número de amostras, mas também amostras de naturezas variadas. A preparação da amostra é uma área em que diferenças sutis entre os tipos de amostra ou os métodos de preparação da amostra e materiais utilizados podem afetar os resultados obtidos. Garantir a compatibilidade entre os materiais no dispositivo de filtração e o solvente pode minimizar os problemas; Por exemplo, os níveis de compostos extraíveis que podem interferir na detecção de analito.

2. O que acontece quando a preparação da amostra dá errado?

Antes das aplicações analíticas de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), as amostras são preparadas por vários métodos, todos os quais têm o potencial de influenciar os resultados analíticos, afetando a amostra injetada no sistema. A preparação ineficaz da amostra pode levar a uma redução na vida útil da coluna, aumento dos requisitos de serviço para componentes, tempo de inatividade potencial de instrumentação, redução na eficiência e reprodutibilidade da separação cromatográfica e muitos outros problemas.

3. À primeira vista, a filtração parece um processo simples ...

Embora a filtração seja uma parte aparentemente pequena de um grande fluxo de trabalho, o impacto da escolha do filtro certo para um determinado aplicativo pode ser substancial. Por exemplo, métodos que não removem matéria de partículas suficientes podem resultar em bloqueio de colunas. A escolha inadequada de dispositivos de preparação de amostras poderia, em determinadas circunstâncias, liberar compostos extraáveis ​​na amostra, vincular analitos de interesse ou introduzir erros através da perda de amostra - todos influenciando a qualidade e a reprodutibilidade dos resultados observados. Se você está confiante de que seus consumíveis de filtragem não estão contribuindo para erros que exigem investigações de retrabalho ou raízes, você economizará dinheiro e se dará tranqüilidade.

4. Quais são a preparação de amostra mais comum 'falha'?

A escolha incorreta da membrana do filtro é um problema que vemos muito. Os problemas podem aparecer como picos estranhos de extraíveis, que podem interferir na detecção dos analitos de interesse. A incompatibilidade do meio de filtro com uma amostra ou solvente em termos de resistência química não se limita apenas aos efeitos de dissolução no meio de filtro. Os solventes podem causar um leve inchaço dos materiais da membrana polimérica quando não é totalmente compatível, o que, por sua vez, pode afetar o desempenho da filtração, levando à limpeza ineficaz das amostras. Uma maneira de resolver esse problema é escolher uma membrana amplamente compatível com solventes aquosos e orgânicos. Para a preparação típica da amostra de HPLC, os filtros de seringa e semese contendo membranas de celulose regeneradas são uma boa opção devido à sua ampla compatibilidade de solvente.

O uso de um dispositivo de filtro maior do que o necessário para o volume que está sendo preparado é outra armadilha comum. O uso de dispositivos de filtro muito grande significa que pequenas quantidades da amostra permanecerão no filtro, mesmo depois que as precauções são tomadas para expulsar o máximo possível.

5. Quais são as vantagens de levar a sério a etapa de filtração?

Um objetivo fundamental da maioria dos laboratórios envolvidos em testes analíticos é desenvolver processos consistentes que sustentam os resultados consistentes - e que requerem filtragem consistente. A seleção de um dispositivo de filtragem com o tamanho certo e as características de retenção dos poros ajuda a garantir uma remoção eficaz de partículas, enquanto a escolha do tamanho e o design apropriado da unidade de filtro pode ajudar a minimizar a perda da amostra. A boa filtração também ajuda a proteger a coluna e potencialmente estende a vida útil do injetor e da coluna.

Conclusão

A HPLC é uma técnica valiosa para a ciência da vida e a pesquisa biofarmacêutica, pois oferece resultados precisos e reproduzíveis. Essa precisão depende da integridade da amostra HPLC, e a melhor maneira de garantir amostras de alta qualidade é começar com as melhores ferramentas. Com soluções para água ultrapura, preparação padrão, pipetas, dicas e filtros, a linha de preparação da amostra HPLC é responsável por todos os detalhes. Soluções e software automatizados também ajudam a otimizar a preparação da amostra para fornecer amostras limpas para obter resultados limpos.

Mais discussões sobre soluções de preparação de amostras de HPLC são bem -vindas!