Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o tehnică analitică utilizată pe scară largă, care joacă un rol important în mai multe domenii, inclusiv produse farmaceutice, științele mediului și siguranța alimentelor. Cu toate acestea, succesul analizei HPLC depinde în mare măsură de calitatea pregătirii eșantionului. Pregătirea corectă a eșantionului asigură cuantificarea exactă a analitelor țintă și minimizează interferențele. Acest ghid cuprinzător acoperă tot ceea ce trebuie să știți despre pregătirea eșantionului HPLC, inclusiv importanța, tehnicile, cele mai bune practici și sfaturi de depanare.
Doriți să aflați mai multe despre aplicațiile flacoanelor de cromatografie, vă rugăm să verificați acest articol: 15 aplicații ale flacoanelor de cromatografie în diferite domenii
Importanța pregătirii eșantionului în HPLC
Pregătirea eșantionului este un pas critic în analiza HPLC din mai multe motive.
Minimizați interferențele:Probele conțin adesea impurități și componente matrice care pot interfera cu detectarea analitelor țintă. Tehnicile eficiente de pregătire a eșantionului pot ajuta la eliminarea acestor substanțe nedorite și la îmbunătățirea preciziei analitice.
Îmbunătățiți recuperarea analitului:Pregătirea corectă îmbunătățește recuperarea analitului și asigură că rezultatele reflectă concentrația reală a eșantionului inițial. Acest lucru este important în special pentru analiza urmelor în care analiștii sunt prezenți la concentrații mici.
Forma de vârf îmbunătățită:Probele preparate corect ajută la formarea unor vârfuri simetrice și bine definite în cromatogramă. Acest lucru este esențial pentru cuantificarea exactă. Pregătirea necorespunzătoare a eșantionului poate duce la vârful cozii și lărgirea, ceea ce complică interpretarea datelor.
Protejați -vă sistemul HPLC:Contaminanții din eșantionul dvs. pot deteriora coloanele și alte componente din sistemul dvs. HPLC, ceea ce duce la creșterea costurilor de întreținere și a timpului de oprire. Pregătirea corectă a eșantionului reduce riscul de blocare și uzură a sistemului.
Pași importanți în pregătirea eșantionului HPLC
1. Colecția de probe
Primul pas în pregătirea eșantionului este să colectați corect eșantionul. Aceasta include:
Folosiți containere curate:Folosiți întotdeauna containere curate, inerte, pentru a evita contaminarea. Se recomandă recipiente din sticlă sau de înaltă calitate din plastic.
Evitați contaminarea:Folosiți mănuși și instrumente curate pentru a preveni contaminarea din Sebum și alte surse.
Etichetare corectă:Etichetați în mod clar probele pentru a evita amestecurile și asigurarea trasabilității.
2. Omogenizare a eșantionului
Omogenizarea eșantionului asigură omogenitatea, care este importantă pentru rezultatele reproductibile. Tehnicile de omogenizare includ:
Omogenizare mecanică: amestecarea probelor solide sau semi-solide folosind un agitator sau omogenizator.
Omogenizare cu ultrasunete:Aplicarea ecografiei pentru a dispersa particulele într -un eșantion lichid.
3. diluție sau concentrare
În funcție de concentrația preconizată de analite, eșantioanele pot fi necesare diluate sau concentrate. Acest lucru poate fi obținut de:
Diluare:Diluați eșantionul la concentrația dorită folosind același solvent ca faza mobilă.
Concentraţie:Analitele pot fi concentrate folosind tehnici precum evaporarea sau extracția în fază solidă (SPE).
4. Filtrare
Filtrarea este esențială pentru a elimina particule care pot înfunda coloanele HPLC. Metodele comune de filtrare includ ：
Filtrarea membranei:Utilizare0,2µm sau 0,45 µm filtrepentru a îndepărta particulele. Se folosesc de obicei filtre de polietersulfone (PES) sau din nylon.
Prefiltrare:Pentru eșantioanele cu conținut ridicat de particule, prefiltrarea printr -un filtru mai mare de dimensiuni ale porilor poate preveni înfundarea.
50 de întrebări frecvente despre filtrele de seringă, asigurați -vă că consultați acest articol informativ: Subiectul „filtrului de seringă” 50 de întrebări frecvente
5. Stabilitatea eșantionului
Luați în considerare stabilizarea eșantionului dvs. pentru a preveni degradarea analitului.
Reglarea pH -ului:Reglarea pH -ului poate ajuta la stabilizarea anumitor analite. De exemplu, compușii acide pot necesita acidificare pentru a preveni degradarea.
Aditivi:Adăugarea de stabilizatori sau conservanți poate ajuta la menținerea integrității eșantionului în timpul stocării și analizei.
6. Selecția solventului
Este important să selectați solventul corect pentru a vă dizolva eșantionul și pentru a vă asigura compatibilitatea cu sistemul dvs. HPLC. Luați în considerare următoarele:
Polaritatea solventului:Pentru a obține o dizolvare completă, solventul trebuie să corespundă polarității analitului.
Compatibilitatea fazei mobile: Utilizați un solvent care este compatibil cu faza mobilă pentru a minimiza interferențele potențiale.
7. Pregătirea standardelor
Pregătirea standardelor de calibrare este esențială pentru cuantificarea unui analit într -un eșantion. Aceasta include:
Pregătirea curbei de calibrare:Pregătiți o serie de concentrații cunoscute ale analitului pentru a stabili o curbă de calibrare pentru cuantificare.
Folosiți același solvent:Pentru a menține consecvența, pregătiți -vă întotdeauna standardele folosind același solvent și condiții ca eșantioanele.
Cele mai bune practici pentru pregătirea eșantionului HPLC
Urmați procedurile de operare standard (POS):Stabiliți și aderați la POS pentru pregătirea eșantionului pentru a asigura consecvența și reproductibilitatea.
Utilizați reactivi și solvenți de înaltă calitate:Utilizați întotdeauna solvenți de calitate HPLC și reactivi de înaltă puritate pentru a minimiza contaminarea.
Păstrați spațiul de lucru curat:Păstrați zona de pregătire a eșantionului curată și organizată pentru a reduce riscul de contaminare.
Documentați totul:Păstrați înregistrări detaliate ale procedurilor dvs. de pregătire a eșantionului, inclusiv eventualele abateri de la protocoalele standard.
Validarea metodelor:Validați în mod regulat metodele de pregătire a eșantionului pentru a vă asigura că oferă rezultate fiabile și reproductibile.
Depanare Probleme comune de pregătire a eșantionului
Forma slabă de vârf:Dacă vârfurile sunt largi sau coadă, acest lucru poate indica o dizolvare incompletă sau prezența particulelor. Asigurați -vă că eșantionul dvs. este complet amestecat și filtrat.
Ghost Peaks:Vârfurile fantome pot fi cauzate de impurități în solvent sau eșantion, folosesc solvenți de înaltă puritate și se asigură că toate articolele de sticlă și echipamentele sunt curate.
Sensibilitate scăzută:Dacă sensibilitatea este scăzută, luați în considerare optimizarea metodei dvs. de extracție sau creșterea concentrației analitului.
Clogging coloană:Clogging -ul frecvent poate indica faptul că eșantionul dvs. conține prea multe particule sau nu este filtrat în mod adecvat. Reevaluați procesul de filtrare și luați în considerare pre-filtrarea.
Rezultate inconsistente:Variația rezultatelor poate rezulta din prepararea inconsecventă a eșantionului. Standardizați toate procedurile și asigurați -vă că personalul implicat în pregătirea eșantionului este instruit corespunzător.
Tehnici avansate de pregătire a eșantionului
Pe măsură ce cerințele analitice cresc, laboratoarele adoptă tehnici mai avansate de pregătire a eșantionului pentru a îmbunătăți eficiența și precizia:
1. Extracție în fază solidă (SPE)
SPE este o tehnică utilizată pe scară largă care permite extragerea selectivă a analitelor din matrici complexe. Aceasta implică trecerea unui eșantion lichid printr -un material adsorbant solid care păstrează analitul țintă, permițând trecerea impurităților.
2. Extracția lichid-lichid (LLE)
LLE este o tehnică care separă analitele pe baza solubilității lor în două lichide imiscibile. Această metodă este eficientă în separarea compușilor cu polarități diferite și este adesea folosită în analiza de mediu și farmaceutică.
3. Quechers (rapid, simplu, ieftin, eficient, accidentat și sigur)
Quechers este o metodă populară pentru pregătirea eșantioanelor alimentare și de mediu care combină pașii de extracție și curățare într-un singur proces, ceea ce îl face eficient și rentabil.
4. Automatizare
Debitul și reproductibilitatea pot fi îmbunătățite semnificativ prin sisteme automate de pregătire a eșantionului, care pot efectua sarcini precum diluarea, filtrarea și SPE cu o intervenție umană minimă, reducând astfel riscul de erori.
Doriți să aflați mai multe despre pregătirea eșantionului HPLC, vă rugăm să verificați acest articol: Soluții de pregătire a eșantionului HPLC pentru cele mai bune rezultate
Concluzie
Pregătirea eșantionului HPLC este o etapă critică care poate avea un impact semnificativ asupra preciziei și fiabilității rezultatelor analitice. Urmând cele mai bune practici, folosind tehnici adecvate și abordând probleme comune, laboratoarele pot optimiza procesul de pregătire a eșantionului prin adoptarea tehnicilor și tehnologiilor avansate pe măsură ce evoluează nevoile analitice. Automatizarea va îmbunătăți în continuare eficiența și eficacitatea analizelor HPLC. Pregătirea corectă a eșantionului nu numai că îmbunătățește calitatea rezultatelor, dar protejează și sistemul HPLC, asigurând fiabilitatea și performanța pe termen lung.
Engleză
chinez
