Solutions de préparation des échantillons HPLC pour de meilleurs résultats

Quatre étapes pour la préparation des échantillons HPLC

Étape 1. Analyse des solutions aqueuses

Étape 2. Préparation des normes

La préparation des normes pour l'identification et la quantification des composés peut être un processus fastidieux et long. Pesant avec précision un solide afin qu'un volume prédéfini de solvant puisse être utilisé est difficile, et les déchets dus à l'erreur peuvent être coûteux, en particulier lorsque vous travaillez avec des produits pharmaceutiques. D'autres facteurs tels que la température compliquent encore la préparation standard. Les fluctuations de la température modifient la densité du solvant et contribuent à des différences spectaculaires de concentration.



L'utilisation d'un équilibre qui permet une précision de pesée jusqu'à plusieurs décimales et l'automatisation du processus en liant l'équilibre à un distributeur de solvants garantit la plus haute précision. L'utilisation de logiciels tels que le dosage Q-APP YAPP16 permet des calculs automatiques et une surveillance gravimétrique des valeurs mesurées. La documentation de la température et de la densité du solvant garantit également des concentrations très précises, en particulier lors de la préparation des normes les jours suivants. Le transfert de données direct de l'application de pesée YAPP16 au logiciel Thermo Scientific ™ Chromeleon ™ 7.2 Chromatography Data System (CDS) est une option pour la gestion des données sans papier avec l'intégrité complète des données.

Étape 3. Revenez aux bases avec une bonne pipetage

L'importance d'une pipetage précise et précise est trop souvent ignorée et prise pour acquise. Le niveau et l'expérience des compétences de l'utilisateur peuvent avoir des implications significatives pour les analyses sensibles comme HPLC. Le choix de la bonne pipette peut réduire l'erreur humaine et les coûts associés des solvants gaspillés.



Les pipettes mécaniques avec un verrouillage de volume offrent une solution simple pour prévenir les modifications accidentelles de volume, tandis que les pipettes électroniques plus sophistiquées éliminent la variabilité de l'utilisateur pour fournir de manière cohérente des volumes précis. La pointe de la pipette est également un détail important à considérer pour les analyses HPLC. Des conseils de rétention faibles sont meilleurs lorsqu'ils travaillent avec des solvants de différentes viscosités, car ils maximisent la récupération des échantillons. La contamination par échantillon peut également se produire en raison de la lixiviation de la pointe de la pipette. En tant que tels, des conseils à haute résistance chimique préservent l'intégrité de l'échantillon.

Étape 4. Filtre pour la précision et la longévité

Prendre des soins supplémentaires pour filtrer les échantillons avant l'analyse améliore la fiabilité et peut prolonger la durée de vie de la colonne HPLC en empêchant les effets de colmatage. Les filtres à seringue sont une solution simple et rapide pour filtrer les échantillons avant la chromatographie de la colonne. Comme pour les pointes de pipette, les solvants utilisés dans le HPLC nécessitent des filtres spécifiques pour empêcher la lixiviation et la contamination des échantillons.

Les membranes de cellulose sont résistantes au diméthyl sulfoxyde (DMSO), aux amides, aux cétones, aux ester et aux composés éther. Pour les solvants particulièrement sévères, les membranes non couchées en polyéthersulfone (PTFO) empêchent la lixiviation et la contamination des échantillons. La filtration de l'échantillon devient très longue lorsque le nombre d'échantillon augmente. Les unités de filtration multi-échantillons, telles que le système de filtration Clatestep®, peuvent traiter des échantillons sans seringues et une préparation d'échantillons accélérée sans sacrifier la qualité.

Cinq problèmes auxquels vous devez faire attention à！

1. Quels sont les plus gros problèmes de préparation aux échantillons auxquels sont confrontés les laboratoires?

Les laboratoires subissent une pression croissante en termes de temps et de coût, traitant souvent non seulement avec un nombre élevé d'échantillons, mais aussi des échantillons de nature variable. La préparation des échantillons est un domaine où des différences subtiles entre les types d'échantillons ou les méthodes de préparation des échantillons et les matériaux utilisées peuvent avoir un impact sur les résultats obtenus. Assurer la compatibilité entre les matériaux du dispositif de filtration et le solvant peut minimiser les problèmes; Par exemple, les niveaux de composés extractibles qui pourraient interférer avec la détection des analytes.

2. Que se passe-t-il lorsque la préparation des échantillons va mal?

Avant les applications analytiques de chromatographie liquide haute performance (HPLC), les échantillons sont préparés par une variété de méthodes, qui ont toutes le potentiel d'influencer les résultats analytiques en affectant l'échantillon injecté dans le système. La préparation des échantillons inefficaces peut entraîner une réduction de la durée de vie des colonnes, une augmentation des exigences de service pour les composants, des temps d'arrêt potentiels d'instrumentation, une réduction de l'efficacité et de la reproductibilité de la séparation chromatographique et de nombreux autres problèmes.

3. À première vue, la filtration semble être un processus simple ...

Bien que la filtration soit une partie apparemment petite d'un grand flux de travail, l'impact du choix du bon filtre pour une demande donnée peut être substantiel. Par exemple, les méthodes qui ne suppriment pas suffisamment de particules peuvent entraîner le blocage des colonnes. Le choix inapproprié des dispositifs de préparation des échantillons pourrait, dans certaines circonstances, libérer des composés extractibles dans l'échantillon, lier les analytes d'intérêt ou introduire des erreurs par la perte d'échantillon - toutes influençant la qualité et la reproductibilité des résultats observés. Si vous êtes convaincu que vos consommables de filtration ne contribuent pas à des erreurs qui nécessitent des enquêtes de reprise ou de cause de la racine, vous économiserez de l'argent et vous donnerez la tranquillité d'esprit.

4. Quels sont les échantillons d'échantillons les plus courants «échouent»?

Le choix de la membrane filtrante incorrecte est un problème que nous voyons beaucoup. Les problèmes peuvent apparaître comme des pics étrangers à partir d'extraits, ce qui peut interférer avec la détection des analytes d'intérêt. L'incompatibilité des milieux filtrants avec un échantillon ou un solvant en termes de résistance chimique ne se limite pas aux effets de dissolution sur les milieux filtrants. Les solvants peuvent provoquer un léger gonflement des matériaux de membrane polymère lorsqu'ils ne sont pas entièrement compatibles, ce qui peut à son tour affecter les performances de filtration, conduisant à un nettoyage inefficace des échantillons. Une façon de résoudre ce problème consiste à choisir une membrane largement compatible avec les solvants aqueux et organiques. Pour la préparation typique des échantillons HPLC, les filtres à seringue et sans seringue contenant des membranes de cellulose régénérés sont une bonne option en raison de leur large compatibilité des solvants.

L'utilisation d'un dispositif de filtre qui est plus grande que nécessaire pour le volume en cours de préparation est un autre écueil courant. L'utilisation de dispositifs de filtre trop large signifie que de petites quantités de l'échantillon resteront dans le filtre, même après l'expulsion des précautions.

5. Quels sont les avantages de prendre au sérieux l'étape de filtration?

Un objectif fondamental de la plupart des laboratoires engagés dans des tests analytiques est de développer des processus cohérents qui sous-tendent des résultats cohérents - et qui nécessitent un filtrage cohérent. La sélection d'un dispositif de filtration avec la taille des pores et les caractéristiques de rétention des droits permet d'assurer une élimination efficace des particules, tandis que le choix de la taille et de la conception appropriés de l'unité filtrante peut aider à minimiser la perte d'échantillon. Une bonne filtration aide également à protéger la colonne et prolonge potentiellement la durée de vie de l'injecteur et de la colonne.

Conclusion

Le HPLC est une technique précieuse pour la science de la vie et la recherche biopharmaceutique car elle fournit des résultats précis et reproductibles. Cette précision dépend de l'intégrité de l'échantillon HPLC, et la meilleure façon d'assurer des échantillons de haute qualité est de commencer avec les meilleurs outils. Avec des solutions pour l'eau ultrapure, la préparation standard, les pipettes, les conseils et les filtres, la ligne de préparation des échantillons HPLC explique chaque détail. Les solutions et les logiciels automatisés aident également à rationaliser la préparation des échantillons pour fournir des échantillons propres pour des résultats propres.

Plus de discussions sur les solutions de préparation des échantillons HPLC sont les bienvenues!