Todo o que debes saber sobre a preparación da mostra de HPLC

A preparación da mostra é un paso crítico na análise de HPLC por varias razóns.

Minimizar as interferencias:As mostras a miúdo conteñen impurezas e compoñentes de matriz que poden interferir na detección de analitos diana. As técnicas eficaces de preparación da mostra poden axudar a eliminar estas substancias non desexadas e mellorar a precisión analítica.

Mellorar a recuperación de analitos:A preparación adecuada mellora a recuperación dos analitos e asegura que os resultados reflicten a concentración real da mostra orixinal. Isto é especialmente importante para a análise de rastrexo onde os analitos están presentes a baixas concentracións.

Forma máxima mellorada:As mostras preparadas correctamente axudan a formar picos simétricos e ben definidos no cromatograma. Isto é esencial para unha cuantificación precisa. A preparación inadecuada da mostra pode producir un colo de pico e ampliación, o que complica a interpretación de datos.

Protexa o seu sistema HPLC:Os contaminantes na súa mostra poden danar as columnas e outros compoñentes do seu sistema HPLC, dando lugar a un aumento dos custos de mantemento e a tempo de inactividade. A preparación adecuada da mostra reduce o risco de obstrución e desgaste do sistema.

O primeiro paso na preparación da mostra é recoller correctamente a túa mostra. Isto inclúe:

Use contedores limpos:Use sempre contedores limpos e inertes para evitar a contaminación. Recoméndase contedores de plástico de vidro ou de alta calidade.

Evite a contaminación:Use luvas e ferramentas limpas para evitar a contaminación do sebo e outras fontes.

Etiquetado adecuado:Etiqueta claramente mostras para evitar mesturas e garantir a rastrexabilidade.

A homoxeneización da mostra asegura a homoxeneidade, o que é importante para os resultados reproducibles. As técnicas de homoxeneización inclúen:

Homoxeneización mecánica: mesturando mostras sólidas ou semi-sólidas mediante un axitador ou homoxeneizador.

Homoxeneización por ultrasóns:Aplicación de ultrasóns para dispersar as partículas dentro dunha mostra de líquido.

Dependendo da concentración esperada de analíticos, pode que as mostras sexan diluídas ou concentradas. Isto pódese conseguir por:

Dilución:Dilúe a mostra á concentración desexada usando o mesmo disolvente que a fase móbil.

Concentración:Os analitos pódense concentrar mediante técnicas como a evaporación ou a extracción de fase sólida (SPE).

A filtración é esencial para eliminar as partículas que poden obstruír as columnas HPLC. Os métodos de filtrado común inclúen ：

Filtración de membrana:UsoFiltros de 0,2µm ou 0,45 micraspara eliminar partículas. Utilízanse normalmente os filtros de polietsulfona (PES) ou nylon.

Prefiltración:Para mostras con alto contido de partículas, a prefiltración a través dun filtro de tamaño de poros máis grande pode evitar o obstrución.


50 preguntas frecuentes sobre filtros de xeringa, asegúrate de consultar este artigo informativo: O tema do "filtro de xeringa" 50 preguntas frecuentes

Considere estabilizar a súa mostra para evitar a degradación do analito.

Axuste do pH:Axustar o pH pode axudar a estabilizar certos analitos. Por exemplo, os compostos ácidos poden requirir acidificación para evitar a degradación.

Aditivos:Engadir estabilizadores ou conservantes pode axudar a manter a integridade da mostra durante o almacenamento e a análise.

É importante seleccionar o disolvente correcto para disolver a súa mostra e asegurar a compatibilidade co sistema HPLC. Considere o seguinte:

Polaridade do disolvente:Para conseguir unha disolución completa, o disolvente debe coincidir coa polaridade do analito.

Compatibilidade en fase móbil: Use un disolvente compatible coa fase móbil para minimizar as interferencias potenciais.

7. Preparación de estándares

A preparación dos estándares de calibración é esencial para cuantificar un analito nunha mostra. Isto inclúe:

Preparación da curva de calibración:Prepare unha serie de concentracións coñecidas do analito para establecer unha curva de calibración para a cuantificación.

Use o mesmo disolvente:Para manter a coherencia, sempre prepare os seus estándares usando o mesmo disolvente e condicións que as túas mostras.

Siga os procedementos de funcionamento estándar (SOPs):Establecer e adherirse aos SOP para a preparación da mostra para garantir a coherencia e a reproducibilidade.

Use reactivos e disolventes de alta calidade:Use sempre disolventes de calidade HPLC e reactivos de alta pureza para minimizar a contaminación.

Mantén o teu espazo de traballo limpo:Manteña a súa área de preparación da mostra limpa e organizada para reducir o risco de contaminación.

Documentar todo:Manteña rexistros detallados dos seus procedementos de preparación da mostra, incluíndo calquera desviación dos protocolos estándar.

Validar métodos:Validar os métodos de preparación de mostras regularmente para asegurarse de que proporcionen resultados fiables e reproducibles.

Pola forma de pico:Se os picos son anchos ou de cola, isto pode indicar a disolución incompleta ou a presenza de partículas. Asegúrese de que a súa mostra estea ben mesturada e filtrada.

Ghost Peaks:Os picos de pantasmas poden ser causados ​​por impurezas no disolvente ou na mostra, usan disolventes de alta pureza e asegurarse de que todos os equipos e equipos estean limpos.

Baixa sensibilidade:Se a sensibilidade é baixa, considere optimizar o método de extracción ou aumentar a concentración do seu analito.

Obstrución de columnas:O obstrución frecuente pode indicar que a súa mostra contén demasiadas partículas ou non se está a filtrar adecuadamente. Vuelva a avaliar o proceso de filtración e considere a pre-filtración.

Resultados inconsistentes:A variación dos resultados pode derivar da preparación de mostras inconsistente. Normaliza todos os procedementos e asegúrese de que o persoal implicado na preparación da mostra estea adecuadamente adestrado.

A medida que aumentan as demandas analíticas, os laboratorios están a adoptar técnicas de preparación de mostras máis avanzadas para mellorar a eficiencia e a precisión:

SPE é unha técnica moi utilizada que permite a extracción selectiva de analitos de matrices complexas. Implica pasar unha mostra líquida a través dun material adsorbente sólido que conserva o analito obxectivo e permite pasar as impurezas.

LLE é unha técnica que separa os analitos baseados na súa solubilidade en dous líquidos inmiscibles. Este método é eficaz para separar compostos con diferentes polaridades e úsase a miúdo na análise ambiental e farmacéutica.

Quechers é un método popular para preparar mostras de alimentos e ambientais que combinan os pasos de extracción e limpeza nun proceso, o que o fai eficiente e rendible.

O rendemento e a reproducibilidade poden mellorarse significativamente mediante sistemas automatizados de preparación de mostras, que poden realizar tarefas como dilución, filtración e SPE cunha mínima intervención humana, reducindo así o risco de erros.


Quere saber máis sobre a preparación da mostra de HPLC, comproba este artigo: Solucións de preparación de mostras de HPLC para os mellores resultados

A preparación da mostra HPLC é un paso crítico que pode afectar significativamente a precisión e fiabilidade dos resultados analíticos. Seguindo as mellores prácticas, empregando técnicas apropiadas e abordando problemas comúns, os laboratorios poden optimizar o proceso de preparación da mostra adoptando técnicas e tecnoloxías avanzadas a medida que evolucionan as necesidades analíticas. A automatización mellorará aínda máis a eficiencia e a eficacia das análises de HPLC. A preparación adecuada da mostra non só mellora a calidade dos resultados, senón que tamén protexe o sistema HPLC, garantindo a fiabilidade e o rendemento a longo prazo.