Hvilken buffer er bedst til din HPLC -mobilfase?
Valg af den rigtige buffer til din HPLC -mobilfase er afgørende for at opnå optimal adskillelse og pålidelige resultater. Buffere spiller en betydelig rolle i kontrol af PH, der direkte påvirker tilbageholdelsen og elueringen af analytter, især dem, der kan ioniseres. Her er hvad du skal overveje, når du vælger den bedste buffer til din applikation.
1⃣ Forstå dine analytter
Valget af buffer afhænger stort set af PKA for dine analytter. Ideelt set skal pH i din mobile fase være inden for ± 1 enhed af bufferens PKA for at sikre effektiv bufferingskapacitet. For eksempel, hvis din analyt har en PKA på 4,5, ville en phosphatbuffer med en PKA omkring denne værdi være passende, så du kan opretholde analytten i den ønskede ioniseringstilstand.
2⃣ buffertyper
Phosphatbuffere: vidt brugt på grund af deres effektive bufferingsområde (pH 2-8). De er kompatible med mange analytter og giver god stabilitet.
Acetatbuffere: Velegnet til lavere pH -applikationer, der typisk spænder fra pH 3,6 til 5,6. De er effektive til sure analyser.
Tris -buffere: ofte brugt i biologiske anvendelser, især til proteiner, men er muligvis ikke ideel til UV -detektion på grund af deres absorbans.
3⃣ Overvej kompatibilitet
Sørg for, at den valgte buffer er kompatibel med dit HPLC -system og den stationære fase af din kolonne. Nogle buffere, som citrat, kan korrodere rustfrie stålkomponenter over tid, så overvej de langsigtede effekter på dit udstyr.
4⃣ Monitor Buffer Concentration
En koncentration på 25-50 mM er typisk effektiv til de fleste applikationer. Højere koncentrationer kan forbedre spidsform og opløsning, men kan også føre til øget bagtryk og potentiel nedbør.
