¿Qué búfer es mejor para su fase móvil HPLC?

Elegir el búfer adecuado para su fase móvil HPLC es crucial para lograr una separación óptima y resultados confiables. Los amortiguadores juegan un papel importante en el control del pH, que afecta directamente la retención y la elución de los analitos, especialmente aquellos que son ionizables. Esto es lo que debe considerar al seleccionar el mejor búfer para su aplicación.

1 pasE⃣ Entiende tus análisis

La elección del tampón depende en gran medida de la PKA de sus analitos. Idealmente, el pH de su fase móvil debe estar dentro de ± 1 unidad del PKA del búfer para garantizar una capacidad de amortiguación efectiva. Por ejemplo, si su analito tiene un PKA de 4.5, un tampón de fosfato con un PKA alrededor de este valor sería adecuado, lo que le permitiría mantener el analito en su estado de ionización deseado.

2 pasE⃣ tipos de búfer

Tampones de fosfato: ampliamente utilizados debido a su rango de amortiguación efectivo (pH 2-8). Son compatibles con muchos analitos y proporcionan una buena estabilidad.
Buffers de acetato: adecuados para aplicaciones de pH más bajas, que generalmente van desde pH 3.6 a 5.6. Son efectivos para analitos ácidos.
Tampones Tris: comúnmente utilizados en aplicaciones biológicas, particularmente para proteínas, pero puede no ser ideal para la detección de rayos UV debido a su absorbancia.

3️⃣ Considere la compatibilidad

Asegúrese de que el búfer seleccionado sea compatible con su sistema HPLC y la fase estacionaria de su columna. Algunos buffers, como el citrato, pueden corroer componentes de acero inoxidable con el tiempo, así que considere los efectos a largo plazo en su equipo.

4️⃣ Monitorear la concentración del búfer

Una concentración de 25-50 mM es típicamente efectiva para la mayoría de las aplicaciones. Las concentraciones más altas pueden mejorar la forma y la resolución máximas, pero también pueden conducir a una mayor contrapresión y una posible precipitación.