HPLC 移動相にはどのバッファーが最適ですか?

最適な分離と信頼性の高い結果を達成するには、HPLC 移動相に適切なバッファーを選択することが重要です。緩衝液は pH の制御に重要な役割を果たし、分析対象物、特にイオン化可能な分析対象物の保持と溶出に直接影響します。アプリケーションに最適なバッファを選択する際に考慮する必要があることは次のとおりです。

1️⃣ 分析対象物を理解する

バッファーの選択は、分析対象物の pKa に大きく依存します。理想的には、効果的な緩衝能力を確保するには、移動相の pH が緩衝液の pKa の ±1 単位以内である必要があります。たとえば、検体の pKa が 4.5 の場合、この値付近の pKa を持つリン酸緩衝液が適しており、検体を目的のイオン化状態に維持できます。

2️⃣ バッファーの種類

リン酸緩衝剤: 有効な緩衝範囲 (pH 2 ～ 8) により広く使用されています。これらは多くの分析対象物と互換性があり、優れた安定性を提供します。
酢酸緩衝液: 通常は pH 3.6 ～ 5.6 の範囲の、より低い pH アプリケーションに適しています。これらは酸性分析物に対して効果的です。
Tris バッファー: 生物学的用途、特にタンパク質に一般的に使用されますが、吸光度のため UV 検出には理想的ではない場合があります。

3️⃣ 互換性を考慮する

選択したバッファーが HPLC システムおよびカラムの固定相と互換性があることを確認してください。クエン酸塩などの一部の緩衝剤は、時間の経過とともにステンレス鋼コンポーネントを腐食する可能性があるため、機器への長期的な影響を考慮してください。

4️⃣ バッファー濃度を監視する

通常、ほとんどの用途では 25 ～ 50 mM の濃度が有効です。濃度を高くすると、ピークの形状と分解能が向上しますが、背圧が増加し、沈殿が発生する可能性もあります。