Kuris buferis yra geriausias jūsų HPLC mobiliajai fazei?
Norint pasiekti optimalų atskyrimą ir patikimus rezultatus, labai svarbu pasirinkti tinkamą HPLC mobiliosios fazės buferį. Buferiai vaidina svarbų vaidmenį kontroliuojant pH, o tai daro tiesioginę įtaką analitėms, ypač jonizuojamoms, sulaikymui ir eliuencijai. Štai ką reikia atsižvelgti renkantis geriausią jūsų programos buferį.
1️⃣ Supraskite savo analizę
Buferio pasirinkimas iš esmės priklauso nuo jūsų analizės PKA. Idealiu atveju jūsų mobiliosios fazės pH turėtų būti ± 1 buferio PKA vienetuose, kad būtų užtikrinta veiksminga buferio talpa. Pvz., Jei jūsų analitės PKA yra 4,5, fosfato buferis, kurio PKA aplink šią vertę, būtų tinkamas, leidžiantis išlaikyti analitę norimą jonizacijos būseną.
2️⃣ buferio tipai
Fosfato buferiai: plačiai naudojami dėl jų efektyvaus buferio diapazono (pH 2-8). Jie suderinami su daugeliu analizių ir suteikia gerą stabilumą.
Acetato buferiai: tinkami mažesniam pH naudojimui, paprastai nuo pH 3,6 iki 5,6. Jie yra veiksmingi rūgštinėms analizėms.
TRIS buferiai: dažniausiai naudojami biologiniuose tiksluose, ypač baltymams, tačiau gali būti ne idealu nustatant UV spindulius dėl jų absorbcijos.
3️⃣ Apsvarstykite suderinamumą
Įsitikinkite, kad pasirinktas buferis yra suderinamas su jūsų HPLC sistema ir nejudančiu jūsų stulpelio faze. Kai kurie buferiai, pavyzdžiui, citratas, laikui bėgant gali korozuoti nerūdijančio plieno komponentus, todėl apsvarstykite ilgalaikį poveikį jūsų įrangai.
4️⃣ Monitoriaus buferio koncentracija
Daugeliui programų paprastai veiksminga 25–50 mm koncentracija. Didesnės koncentracijos gali sustiprinti smailės formą ir skiriamąją gebą, tačiau taip pat gali padidinti atgalinį slėgį ir galimus kritulius.
