Care tampon este cel mai bun pentru faza dvs. mobilă HPLC?

Alegerea tamponului potrivit pentru faza mobilă HPLC este crucială pentru obținerea unei separații optime și a rezultatelor fiabile. Tampoarele joacă un rol semnificativ în controlul pH -ului, ceea ce afectează în mod direct retenția și eluarea analitelor, în special a celor care sunt ionizabile. Iată ce trebuie să luați în considerare atunci când selectați cel mai bun tampon pentru aplicația dvs.

1️⃣ Înțelegeți -vă analitele

Alegerea tamponului depinde în mare măsură de PKA a analitelor tale. În mod ideal, pH -ul fazei dvs. mobile ar trebui să se afle în ± 1 unitate din PKA a tamponului pentru a asigura o capacitate de tamponare eficientă. De exemplu, dacă analitul dvs. are un PKA de 4.5, un tampon fosfat cu un PKA în jurul acestei valori ar fi adecvat, permițându -vă să mențineți analitul în starea de ionizare dorită.

2️⃣ Tipuri de tampon

Tampoane de fosfat: utilizate pe scară largă datorită intervalului lor de tamponare efectiv (pH 2-8). Sunt compatibile cu mulți analite și oferă o stabilitate bună.
Buffere de acetat: adecvate pentru aplicații de pH mai mici, de obicei variind de la pH 3,6 la 5,6. Sunt eficiente pentru analite acide.
TRIS TRIVES: utilizat frecvent în aplicațiile biologice, în special pentru proteine, dar este posibil să nu fie ideal pentru detectarea UV din cauza absorbției lor.

3️⃣ Luați în considerare compatibilitatea

Asigurați -vă că bufferul selectat este compatibil cu sistemul dvs. HPLC și cu faza staționară a coloanei dvs. Unele tampoane, cum ar fi citratul, pot coroda componentele din oțel inoxidabil în timp, așa că luați în considerare efectele pe termen lung asupra echipamentului dvs.

4️⃣ Monitorizați concentrația tampon

O concentrație de 25-50 mM este de obicei eficientă pentru majoritatea aplicațiilor. Concentrații mai mari pot spori forma și rezoluția de vârf, dar pot duce, de asemenea, la creșterea precipitațiilor și a precipitațiilor potențiale.