Какой буфер лучше всего подходит для вашей мобильной фазы ВЭЖХ?

Выбор правильного буфера для мобильной фазы ВЭЖХ имеет решающее значение для достижения оптимального разделения и надежных результатов. Буферы играют значительную роль в контроле pH, что напрямую влияет на удержание и элюирование аналитов, особенно те, которые являются ионизируемыми. Вот что вам нужно учитывать при выборе лучшего буфера для вашего приложения.

1⃣ Поймите ваши аналиты

Выбор буфера в значительной степени зависит от PKA ваших аналитов. В идеале, рН вашей подвижной фазы должен находиться в пределах ± 1 единицу PKA буфера, чтобы обеспечить эффективную буферизацию. Например, если у вашего аналита есть PKA 4,5, подходит фосфатный буфер с PKA вокруг этого значения, что позволит вам поддерживать аналит в желаемом состоянии ионизации.

2⃣ типы буферов

Фосфатные буферы: широко используются из-за их эффективного диапазона буферизации (рН 2-8). Они совместимы со многими аналитами и обеспечивают хорошую стабильность.
Буферы ацетата: подходит для применения с более низким pH, обычно от 3,6 до 5,6. Они эффективны для кислых аналитов.
Трис буферы: обычно используются в биологических применениях, особенно для белков, но не могут быть идеальными для обнаружения ультрафиолета из -за их поглощения.

3⃣ рассмотрим совместимость

Убедитесь, что выбранный буфер совместим с вашей системой ВЭЖХ и стационарной фазой вашего столбца. Некоторые буферы, такие как цитрат, могут с течением времени корродировать компоненты нержавеющей стали, поэтому рассмотрите долгосрочные последствия для вашего оборудования.

4⃣ Концентрация мониторинга буфера

Концентрация 25-50 мм обычно эффективна для большинства приложений. Более высокие концентрации могут улучшить форму пика и разрешения, но также могут привести к увеличению обратного давления и потенциальным осадкам.