Vilken buffert är bäst för din HPLC-mobilfas?
Att välja rätt buffert för din mobila HPLC-fas är avgörande för att uppnå optimal separation och tillförlitliga resultat. Buffertar spelar en betydande roll för att kontrollera pH, vilket direkt påverkar retentionen och elueringen av analyter, särskilt de som är joniserbara. Här är vad du behöver tänka på när du väljer den bästa bufferten för din applikation.
1️⃣ Förstå dina analyser
Valet av buffert beror till stor del på pKa för dina analyter. Helst bör pH i din mobila fas vara inom ±1 enhet av buffertens pKa för att säkerställa effektiv buffringskapacitet. Till exempel, om din analyt har ett pKa på 4,5, skulle en fosfatbuffert med en pKa runt detta värde vara lämplig, vilket gör att du kan behålla analyten i dess önskade joniseringstillstånd.
2️⃣ Bufferttyper
Fosfatbuffertar: Används ofta på grund av deras effektiva buffringsområde (pH 2-8). De är kompatibla med många analyter och ger god stabilitet.
Acetatbuffertar: Lämplig för tillämpningar med lägre pH, vanligtvis från pH 3,6 till 5,6. De är effektiva för sura analyter.
Tris-buffertar: Används vanligtvis i biologiska tillämpningar, särskilt för proteiner, men är kanske inte idealiska för UV-detektion på grund av deras absorbans.
3️⃣ Tänk på kompatibilitet
Se till att den valda bufferten är kompatibel med ditt HPLC-system och den stationära fasen av din kolumn. Vissa buffertar, som citrat, kan korrodera komponenter i rostfritt stål med tiden, så överväg de långsiktiga effekterna på din utrustning.
4️⃣ Övervaka buffertkoncentrationen
En koncentration på 25-50 mM är vanligtvis effektiv för de flesta tillämpningar. Högre koncentrationer kan förbättra toppformen och upplösningen men kan också leda till ökat mottryck och potentiell nederbörd.
