บัฟเฟอร์ใดที่ดีที่สุดสำหรับเฟสมือถือ HPLC ของคุณ

การเลือกบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมสำหรับเฟสมือถือ HPLC ของคุณเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการแยกการแยกที่ดีที่สุดและผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ บัฟเฟอร์มีบทบาทสำคัญในการควบคุมค่า pH ซึ่งส่งผลโดยตรงต่อการเก็บรักษาและการชะล้างของ analytes โดยเฉพาะอย่างยิ่งผู้ที่เป็นไอออน นี่คือสิ่งที่คุณต้องพิจารณาเมื่อเลือกบัฟเฟอร์ที่ดีที่สุดสำหรับแอปพลิเคชันของคุณ

1⃣เข้าใจการวิเคราะห์ของคุณ

ทางเลือกของบัฟเฟอร์ส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับ PKA ของ analytes ของคุณ ตามหลักการแล้วค่า pH ของเฟสมือถือของคุณควรอยู่ภายใน± 1 หน่วยของ PKA ของบัฟเฟอร์เพื่อให้แน่ใจว่ามีความสามารถในการบัฟเฟอร์ที่มีประสิทธิภาพ ตัวอย่างเช่นหาก analyte ของคุณมี PKA ที่ 4.5 บัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มี PKA รอบ ๆ ค่านี้จะเหมาะสมทำให้คุณสามารถรักษา analyte ในสถานะ ionization ที่ต้องการ

2⃣ประเภทบัฟเฟอร์

บัฟเฟอร์ฟอสเฟต: ใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากช่วงบัฟเฟอร์ที่มีประสิทธิภาพ (pH 2 8) พวกเขาเข้ากันได้กับ analytes จำนวนมากและให้ความมั่นคงที่ดี
บัฟเฟอร์อะซิเตท: เหมาะสำหรับแอปพลิเคชันค่า pH ที่ต่ำกว่าโดยทั่วไปจะมีตั้งแต่ pH 3.6 ถึง 5.6 พวกเขามีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ที่เป็นกรด
บัฟเฟอร์ Tris: ใช้กันทั่วไปในการใช้งานทางชีวภาพโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับโปรตีน แต่อาจไม่เหมาะสำหรับการตรวจจับ UV เนื่องจากการดูดกลืนแสง

3⃣พิจารณาความเข้ากันได้

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าบัฟเฟอร์ที่เลือกเข้ากันได้กับระบบ HPLC ของคุณและเฟสคงที่ของคอลัมน์ของคุณ บัฟเฟอร์บางอย่างเช่นซิเตรตสามารถกัดกร่อนส่วนประกอบสแตนเลสได้เมื่อเวลาผ่านไปดังนั้นให้พิจารณาผลกระทบระยะยาวต่ออุปกรณ์ของคุณ

4⃣ตรวจสอบความเข้มข้นของบัฟเฟอร์

ความเข้มข้น 25 50 มม. มักจะมีประสิทธิภาพสำหรับการใช้งานส่วนใหญ่ ความเข้มข้นที่สูงขึ้นสามารถเพิ่มรูปร่างและความละเอียดสูงสุด แต่อาจนำไปสู่การเพิ่มแรงดันแบ็คและการตกตะกอนที่อาจเกิดขึ้น