Який буфер найкращий для вашої мобільної фази HPLC?
Вибір правого буфера для мобільної фази HPLC має вирішальне значення для досягнення оптимального розділення та надійних результатів. Буфери відіграють значну роль у контролі рН, що безпосередньо впливає на утримання та елюцію аналітиків, особливо тих, які є іонізуючими. Ось що потрібно врахувати при виборі найкращого буфера для вашої програми.
1⃣ Зрозумійте своїх аналітиків
Вибір буфера багато в чому залежить від ПКА ваших аналіти. В ідеалі рН вашої мобільної фази повинен бути в межах ± 1 одиниці PKA буфера для забезпечення ефективної буферизації. Наприклад, якщо ваш аналіт має PKA 4,5, фосфатний буфер з PKA навколо цього значення був би придатним, що дозволяє підтримувати аналіт у бажаному стані іонізації.
2⃣ типів буфера
Фосфатні буфери: широко використовується завдяки їх ефективному діапазоні буферизації (pH 2-8). Вони сумісні з багатьма аналітиками і забезпечують хорошу стабільність.
Ацетатні буфери: підходить для нижчих застосувань pH, як правило, від рН 3,6 до 5,6. Вони ефективні для кислих аналітиків.
Трис буфери: зазвичай використовуються в біологічних застосуванні, особливо для білків, але можуть бути не ідеальними для виявлення УФ через їх поглинання.
3⃣ Розгляньте сумісність
Переконайтесь, що вибраний буфер сумісний із системою ВЕРХ та стаціонарною фазою вашої стовпця. Деякі буфери, як-от цитрат, можуть з часом роззлочити компоненти з нержавіючої сталі, тому враховуйте довгостроковий вплив на ваше обладнання.
4⃣ Концентрація буфера монітор
Концентрація 25-50 мм, як правило, ефективна для більшості застосувань. Більш високі концентрації можуть посилити пікову форму та роздільну здатність, але також можуть призвести до посилення тиску та потенційних опадів.
