Die keuse van die regte buffer vir u HPLC -mobiele fase is van kritieke belang om optimale skeiding en ontleding van u monsters. Buffers help om 'n stabiele pH te handhaaf, wat noodsaaklik is vir die beheer van die ionisasietoestand van u ontleders, en sodoende hul retensietyd en piekvorm beïnvloed. Hieronder is 'n gedetailleerde oorsig van hoe u die beste buffer vir u HPLC -toepassing kan kies.

Weet u van HPLC -monstervoorbereiding? Klik op hierdie artikel om meer te wete te kom: "Alles wat u moet weet oor HPLC -voorbeeldvoorbereiding"

Belangrikheid van bufferkeuse

'N Buffer is 'n oplossing waarvan die pH nie verander nadat u 'n klein hoeveelheid suur of basis bygevoeg het nie. Op grond van hul samestelling, kan buffers as suur of basies geklassifiseer word. Die effektiwiteit van 'n buffer word bepaal deur sy PKA, wat ideaal sou wees binne ± 1 pH -eenheid van die gewenste mobiele fase -pH vir optimale buffervermoë.

Sleutelfaktore wat u moet oorweeg

1.Ph -reeks: Die pH van die mobiele fase moet minstens 2 pH -eenhede van die PKA van die analiet wees. Dit help om ionisasie van suur- of basiese ontleders te onderdruk, wat die behoud daarvan op die kolom maksimeer. Byvoorbeeld, as die analiet 'n swak suur is met 'n PKA van 4,5, sou die gebruik van 'n mobiele fase met 'n pH rondom 2,0 dit in 'n nie-ioniseerde toestand hou, wat die behoud verbeter.

2. Buffer -tipe: Algemene buffers wat in HPLC gebruik word, sluit in:

Fosfaatbuffers: effektief in die pH -reeks van 2,0 tot 8,0, fosfaatbuffers word wyd gebruik as gevolg van hul stabiliteit en verenigbaarheid met baie analiete. Dit is veral geskik vir LC-UV-toepassings.

Asetaatbuffers: Dit is ook gewild vir LC-UV-ondersoeke en kan in soortgelyke pH-reekse as fosfaatbuffers gebruik word.

Vlugtige buffers: Vir LC-MS-toepassings word vlugtige buffers soos formaat, asetaat en ammoniumbikarbonaat verkies omdat dit maklik verwyder kan word tydens die massaspektrometrieproses.

3. Buffer-konsentrasie: 'n Tipiese beginkonsentrasie vir buffers in HPLC is tussen 25-50 mm. Hoër konsentrasies kan piekvorm en doeltreffendheid verbeter, maar dit kan ook lei tot neerslag as dit met organiese oplosmiddels gemeng word. Dit is raadsaam om die bufferkonsentrasie onder 25 mm te hou om komplikasies te voorkom.

4. Chemiese suiwerheid: gebruik altyd chromatografiese graadbuffers met 'n hoë suiwerheid om besoedeling te voorkom en betroubare resultate te verseker. Onsuiwerhede kan lei tot onverwagte interaksies en veranderlikheid in die retensietye.

Temperatuureffekte: Die temperatuur kan die pH van bufferoplossings beïnvloed. Dit is belangrik om buffers op 'n konstante temperatuur voor te berei en op te slaan om die effektiwiteit daarvan te behou.

Wil u 50 antwoorde oor HPLC -flessies weet, kyk gerus na hierdie artikel: 50 vrae wat gereeld gevra word oor HPLC -flessies

Praktiese wenke vir buffervoorbereiding

Voorbereidingsmetode: Buffers kan berei word deur gelyke hoeveelhede van hul suur en basiese komponente te meng of deur 'n basiese oplossing met suur te titreer. Vermy die aanpassing van die pH na die toevoeging van organiese oplosmiddels, aangesien dit tot inkonsekwente resultate kan lei.

Vars oplossings: Berei vars bufferoplossings gereeld voor om mikrobiese groei en afbraak van komponente te verminder, wat die chromatografiese werkverrigting kan beïnvloed.

Vermy korrosie: sekere buffers, soos sitraat, kan vlekvrye staalkomponente van HPLC -stelsels korrodeer. Verseker dat die stelsel deeglik spoel na die gebruik van sulke buffers om skade te voorkom.

Konklusie

Die keuse van die regte buffer vir u HPLC -mobiele fase is van kritieke belang om betroubare en reproduceerbare resultate te behaal. Oorweeg pH, buffertipe, konsentrasie en suiwerheid tydens die keuse. Deur hierdie riglyne te volg, kan u u HPLC -metode optimaliseer om u monsters effektief te skei en te ontleed.

Wil u weet wat die prys van HPLC -flessies is, kyk na hierdie artikel: HPLC VICLE PRYS: 50 vrae wat die meeste gevra word

Hoe kan u COD -proefbuise behoorlik gebruik vir toetsing van waterkwaliteit?

Hoe om die deurbraak van filter in spuitfilters te vermy